CNTFRα在ALV自然重组FJ15HT0株感染宿主过程中的表达

本团队之前分离到一株天然重组禽白血病病毒(ALV)毒株FJ15HT0,经RNA-seq分析发现该毒株感染会引起鸡胸腺组织中睫状神经营养因子受体α(CNTFRα)基因表达量上调.为进一步探究CNTFRα在ALVFJ15HT0株感染过程中的表达及作用,本研究在构建ALV先天感染模型的基础上,通过RT-qPCR和免疫组织化学染色(IHC)探究不同时间点CNTFRα在感染鸡肝脏和胸腺中的表达量变化;以RT-qPCR和Western Blot检验病毒的复制水平对DF-1细胞CNTFRα在转录水平和蛋白表达水平的影响.结果表明,感染组与空白组相比,鸡胚出壳率明显降低,鸡只体重极显著降低(P＜0.01);RT-qPCR和IHC结果显示同一时间点感染组胸腺和肝脏组织中CNTFRα转录水平及蛋白表达量均极显著高于空白组(PP＜0.01),胸腺组织中CNTFRα基因相对表达量与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.633,P＜0.01);14d、21d感染组鸡只血清C.NTF含量显著高于空白组(P＜0.05).RT-qPCR和Western Blot检测结果表明84 h感染组DF-1细胞CNTFRα表达量随病毒复制水平增加而显著提高(P＜0.05),CNTFRα基因与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.73,P＜0.01),CNTFRα蛋白与p27蛋白的表达量呈极显著正相关关系(r=0.973,P＜0.01).研究表明CNTFRα可能参与ALV FJ15HT0株致病过程.     

膦甲酸钠对宫颈高危HPV持续感染患者病毒载量的影响

目的 探讨抗病毒药物膦甲酸钠对宫颈高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续感染患者的病毒载量及HPV转阴率的影响,指导临床实践。方法 选择2015年1月至2015年6月112例宫颈高危型HPV持续感染患者为研究对象,在充分知情同意的前提下,患者自愿选择进入治疗组或观察组,治疗组患者随机分成膦甲酸钠组和干扰素组。最终分组情况为：观察组43例,膦甲酸钠组34例,干扰素组35例。观察组患者不采取任何干预措施仅随访观察,治疗组患者分别予以膦甲酸钠静脉滴注3.0 g/次,1次/d,连用14 d;重组人干扰素a2b肌肉注射300万U/次,隔日1次,总共10次。于治疗后第1、3、6个月采用二代杂交捕获术（HC-2）对患者进行HPV DNA半定量分析,比较各组患者病毒载量的变化及HPV转阴率。结果 第1、3、6个月治疗组患者HPV病毒载量较治疗前明显下降,HPV转阴率显著高于观察组;膦甲酸钠组患者HPV病毒载量下降幅度显著大于干扰素组;观察组患者各时间点HPV病毒载量无明显变化。治疗后第1、3、6个月,膦甲酸钠组患者有效率分别为47.06%、61.76%、79.41%,均显著高于观察组及干扰素组（P<0.01）。在随访过程中,观察组患者未发现HPV转阴病例,治疗组转阴率为30.04%,差异有统计学意义（P<0.05）;膦甲酸钠组患者转阴率为35.29%,干扰素组为25.71%,两组差异无统计学意义（χ2=0.75,P=0.27）。结论 宫颈高危HPV持续感染患者自然清除率低,建议采取积极干预措施,膦甲酸钠能降低HPV病毒载量,促进HPV转阴,对持续性高危HPV感染患者有一定治疗意义。     

整合进禽反转录病毒基因组片段的鸡马立克氏病病毒重组野毒株的发现

用对禽网状内皮组织增生病病毒(REV)的单抗从广东和广西分离到的二株马立克氏病病毒(MDV)野毒株做间接荧光抗体试验, 用MDV感染细胞的基因组DNA做斑点分子杂交及PCR显示, 这二株MDV基因组中已整合进REV的LTR序列. 根据MDV基因组上易插入REV的LTR的高频位点的序列合成7条引物, 根据REV的LTR合成4条引物, 由此交叉组成28对引物, 分别从这二个MDV野毒株扩增和克隆已整合进MDV的REV-LTR序列及其相连的MDV序列. 测序证明, 二株中的REV-LTR插入序列及在MDV基因组中短独特序列(US)上的插入位点完全相同. 表明这二个毒株很可能是一次重组事件在鸡群中形成的流行毒株.     

禽呼肠孤病毒感染对鸡法氏囊及免疫应答的影响

研究LY株禽呼肠孤病毒(ARV)感染1日龄SPF鸡后对法氏囊发育影响,对传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)疫苗免疫诱发的抗体的影响,及对强毒株IBDV致病作用的影响。结果表明,LY株ARV感染1日龄SPF鸡可引起法氏囊萎缩和部分淋巴细胞减少,但对增重及AIV和NDV疫苗免疫后抗体滴度却没有显著影响。ARV感染可降低弱毒IBDV疫苗免疫后的抗体反应,但对随后IBDV强毒株攻毒的抵抗力却与对照鸡无显著差异。经IBDV弱毒疫苗免疫后,再接种强毒株IBDV,不会引起死亡,但却仍能显著抑制对AIV、NDV疫苗免疫后的抗体滴度。然而,对于1~7日龄经ARV感染的鸡,IBDV强毒的这种免疫抑制作用又显著低于未经ARV感染的对照鸡。     

弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒低剂量污染对SPF鸡体重和疫苗免疫抗体的影响

为了观察使用污染有低剂量鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)弱毒疫苗后对鸡免疫和体重的影响,本研究通过人工模拟试验观察了CIAV低剂量污染对SPF鸡体重以及对NDV疫苗抗体产生的影响。结果显示使用每羽份污染10个EID50CIAV和5个EID50CIAV两种剂量的NDV疫苗后均造成了SPF鸡体重的下降,与使用未污染疫苗组相比差异显著;并且使用污染两种剂量CIAV的疫苗后NDV抗体水平与使用无污染组相比也降低了,差异显著。使用污染两种剂量CIAV的NDV疫苗后第2周开始均检测到一定比例的CIAV抗体阳性,而通过核酸检测在使用污染疫苗后第1周就检测到很高比例的CIAV核酸阳性。研究结果不仅展示了弱毒疫苗中CIAV污染对SPF鸡生产性能和免疫机能的影响,也提示我们在通过SPF鸡检查法检测外源病毒污染时增加对病毒核酸检测有助于节省检测时间和提高检出率。     

生长激素对感染J亚群禽白血病病毒的鸡胚成纤维细胞系的影响

生长激素(growth hormone, GH)不仅能调节动物的代谢、生长、发育和生殖,也能调节动物的免疫系统。本研究旨在通过转录组测序及生物信息学技术分析GH影响J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis viruses, ALV-J)感染的鸡胚成纤维细胞系(chicken fibroblast cells, DF-1)中的关键基因和信号通路。将空载和GH的过表达质粒分别转染至DF-1,接着均接种ALV-J毒株SCAU-HN06,采用转录组测序技术检测相关的基因表达谱变化。结果显示,与对照组相比,实验组中有上调差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)122个(49%),下调DEGs 127个(51%)。通过GO功能富集分析发现,DEGs主要富集于新陈代谢过程、生物调节、细胞过程、细胞部分、催化活性和结合等过程。经KEGG富集分析发现DEGs主要在免疫系统、信号转导、信号分子和相互作用、细胞生长和死亡等通路上富集。进一步构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI...     

表达猪瘟病毒石门株E0基因重组鸡痘病毒的构建及动物免疫试验

应用PCR从质粒pMD18-T-E0中扩增编码CSFV E0蛋白的基因片段,定向克隆到重组鸡痘病毒表达载体FPV-P11上,进一步构建出重组鸡痘病毒转移载体FPV-pSY-E0.用脂质体将该质粒转染至鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,通过蓝斑纯化实验筛选出重组鸡痘病毒FV282-CSFV-E0.PCR证实E0基因已整合至鸡痘病毒基因组中,Western blot检测到重组病毒感染CEF细胞中E0蛋白的表达.重组病毒3次腹腔接种小鼠,ELISA检测血清抗体滴度高达1∶4 096.重组病毒免疫猪3次之后,接种猪瘟病毒强毒进行攻毒试验,结果对免疫组产生75%的保护率,为研制猪瘟活载体疫苗奠定了基础.     

乳酸菌发酵液联合瑞琳他抗对HeLa细胞活性及HPV18病毒载量影响的实验

研究乳酸菌发酵液联合瑞琳他抗对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖、凋亡、迁移及HPV18 DNA病毒载量的影响,为2种药物联合治疗HPV感染提供新的选择。

采用CCK8法检测不同浓度的单药、组合药对HeLa细胞增殖变化的影响,得出乳酸菌发酵液联合瑞琳他抗对HeLa细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）;采用流式细胞术、Transwell实验和杂交捕获—化学发光法（DH3）分别检测乳酸菌发酵液联合瑞琳他抗对HeLa细胞凋亡、细胞迁移、HPV18 DNA病毒载量的影响。

通过CCK-8法检测乳酸菌发酵液IC₅₀为5.5×10⁸ CFU/mL,瑞琳他抗IC₅₀为160 mg/mL。增殖实验结果显示作用48 h后,单药组均对HeLa细胞抑制生长作用明显,且乳酸菌发酵液+瑞琳他抗组对细胞的抑制作用强于瑞琳他抗组（F=164.810,P＜0.05）;流式细胞术检测发现单药组均可诱导HeLa细胞凋亡,乳酸菌发酵液+瑞琳他抗组对细胞的凋亡作用增加且大于瑞林他抗组（F=83.823,P＜0.05）;Transwell实验发现单药组均可抑制细胞迁移,乳酸菌发酵液+瑞琳他抗组对细胞迁移的抑制作用大于瑞林他抗组（F=492.242,P＜0.05）;DH3法显示单药组均可明显下调HeLa细胞HPV18 DNA病毒载量,乳酸菌发酵液+瑞琳他抗组对细胞HPV18 DNA病毒载量的作用大于瑞林他抗组（F=284.769,P＜0.05）。

乳酸菌发酵液联合瑞琳他抗对抑制HeLa细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制细胞迁移和下调细胞HPV18 DNA病毒载量的作用优于瑞琳他抗,为临床治疗HPV感染提供了实验依据和借鉴。

     

重组人干扰素α1b对呼吸道合胞病毒感染小鼠外周血T淋巴细胞亚群及肺组织病理学的影响

目的:研究重组人干扰素α1b对呼吸道合胞病毒感染小鼠外周血T淋巴细胞亚群及肺组织病理学的影响.方法:将40只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为正常对照组、感染模型组、重组人干扰素α1b 3.125 μg剂量组、重组人干扰素α1b 12.5 μg剂量组和重组人干扰素α1b 50 μg剂量组.建立感染小鼠模型成功后,连续雾化干预5天,第6天摘眼球取血、肝素化处理,流式细胞术检测小鼠外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+水平.剖取小鼠左肺立即固定于10％中性福尔马林溶液24小时,石蜡包埋、切片行HE染色,光镜下观察小鼠肺组织病理学改变.结果:与正常对照组比较,其余各组小鼠外周血CD3+CD8+水平均显著降低,CD3+CD4+与CD3+CD4+/CD3+CD8+水平均显著升高,除重组人干扰素α1b 50 μg剂量组CD3+CD4+水平外,其余各组差异均有统计学意义(P＜0.05);与感染模型组比较,其余各组小鼠外周血CD3+CD8+水平均显著升高,CD3+CD4+与CD3+CD4+/CD3+CD8+水平均显著降低,除重组人干扰素α1b 3.125 μg剂量组CD3+CD8+水平外,其余各组差异均有统计学意义(P＜0.05);重组人干扰素α1b 3.125 μg、12.5μg、50μg剂量组间比较可见,随着药物剂量的成倍增加,CD3+CD8+水平呈递增趋势,CD3+CD4+与CD3+CD4+/CD3+CD8+水平呈递减趋势,除重组人干扰素α1b 3.125 μg与12.5 μg剂量组间P＞0.05,其余各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).肺组织病理学观察到感染模型组小鼠肺组织炎性损伤显著,雾化吸入重组人干扰素α1b后,肺组织炎性损伤程度显著降低.结论:重组人干扰素α1b对RSV感染小鼠外周血T淋巴细胞亚群及肺组织病理学影响显著,具有良好的抗病毒及免疫调节作用,并在一定范围内存在剂量-效应关系.     

鼠神经生长因子对巨细胞病毒神经系统感染小鼠海马组织氧化应激及细胞凋亡的影响

巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)感染神经系统可引起神经功能损害,海马组织参与学习、记忆、认知等过程的调控,CMV感染海马组织并引起氧化应激及细胞凋亡激活与神经功能损害的发生密切相关。鼠神经生长因子(mouse nerve growth factor,mNGF)对缺血缺氧、六溴环十二烷等病理因素引起的脑组织氧化应激及细胞凋亡具有改善作用,但mNGF对CMV神经系统感染过程中氧化应激及细胞凋亡的调节作用及机制尚未明确。为研究mNGF对CMV神经系统感染小鼠海马组织氧化应激及细胞凋亡的影响,本研究选择C57BL/6小鼠并随机分为对照组、MCMV组、mNGF组,MCMV组、mNGF组通过腹腔注射病毒液的方式建立MCMV神经系统感染模型,mNGF组从造模后24h开始给予mNGF腹腔注射,连续14d。比较三组小鼠海马组织HE染色、MCMV DNA表达、行为学指标、氧化应激指标含量、凋亡基因及PI3K/PKB通路表达量的差异。结果显示,MCMV组出现了明显的海马组织病理改变且海马组织中MCMV DNA表达水平、bax及cleaved caspase-3表达水平、MDA含量明显高于...     

肾综合征出血热病毒对不同生理状态小鼠的实验感染及在小鼠淋巴细胞亚群中的定位

本文用双标记免疫细胞化学和双标记免疫电镜技术观察了环磷酰胺处理的BALB/c小鼠及乳鼠实验感染肾综合征出血热病毒后的发病和病毒定位情况,结果发现,免疫功能不成熟或有缺陷的小鼠感染后发病并有规律地死亡,而免疫功能正常鼠只呈隐性感染。在发病的和隐性感染的小鼠之间,病毒定位主要差别在于HFRSV是否感染免疫器官,即HFRSV抗原可见于发病鼠外周血,牌和胸腺的单个核细胞中,而在隐性感染小鼠的这些免疫器官中则为阴性,HFRS病毒颗粒及病毒抗原广泛见于发病鼠的T细胞亚群中,在Thy-1,L3T4和Lyt-2亚群中,双标记阳性细胞百分比分别为24.6+—15.3％,7.5％+—6.1％和17.7+—6.1％。对HFRSV在T细胞中分布的差异还作了动态比较。结果提示:细胞免疫可受HFRSV的直接影响,病毒对宿主免疫系统的感染是HFRSV感染发病的一个关键因素。     

新城疫病毒F蛋白碱裂解位点修饰及外源基因的插入对 新城疫LaSota疫苗株致病力的影响

新城疫是危害养禽业发展的重要传染病.新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素.本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗株反向遗传操作平台,将LaSota病毒F蛋白的碱裂解位点由GGRQGR↓L分别突变为GRRQRR↓F和GRRQRR↓L,在未加入TPCK胰酶的情况下分别成功拯救出突变修饰LaSota疫苗病毒株rL-FmF和rL-FmL,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)等指标对其毒力进行评估,结果rL-FmF和rL-FmL,的ICPI值由LaSota的0.36分别上升为1.18和1.05,但.MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0,表明碱裂解位点的突变可显著增强致病力.为了检测外源基因插入对病毒致病力的影响,进一步以rL-FmF为载体,分别构建并拯救出表达H5亚型禽流感病毒血凝素HA和增强绿色荧光蛋白EGFP基因的重组病毒rL-FmF-HA和rL-FmF-EGFP,经测定ICPI分别为0.67和1.10,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0.结果表明,对rLaSota病毒F蛋白裂解位点2个非碱性氨基酸突变为碱性氨基酸,无论F2蛋白氨基端为F或L,均可显著增强其脑内接种致病力,接近中发型毒株标准,但对静脉内接种致病能力均无显著影响,而对鸡胚致死能力均保持rIaSota病毒缓发型特点(MDT≥90);外源基因的重组、表达可不同程度致弱病毒,其致弱程度与外源基因及其表达产物性质有关.结果提示,影响NDV致病力不仅仅局限于F蛋白裂解位点氨基酸序列;通过F裂解位点修饰及HA基因插入可以获得致病力较高但基本接近缓发型标准的重组病毒.     

不同碘摄入水平对小鼠甲状腺组织Ⅰ型脱碘酶基因表达及酶活性的影响

甲状腺功能与碘摄入水平有密切的关系,甲状腺功能主要是通过其合成的甲状腺激素来实现的.脱碘反应是调节甲状腺激素生物活性的重要方式,不同碘营养状态下甲状腺组织I型脱碘酶(D1)基因表达及活性的变化是甲状腺功能调节的重要机制.在成功建立碘缺乏与不同程度碘过量的.Babl/c小鼠模型的基础上,采用实时荧光定量PCR法检测甲状腺组织DlmRNA表达水平,同时以125I-rT3,作为底物,结合离子交换层析技术测定甲状腺D1活性,此外,应用竞争结合放射免疫分析方法对甲状腺组织激素进行了检测.结果显示:碘缺乏时,D1 mRNA表达和D1活性均显著升高,甲状腺组织内T3与T4水平均显著降低,但T3/T4明显升高;碘过量可明显抑制D1 mRNA表达,但对D1活性并无显著影响,甲状腺组织内T3/T4有所下降.上述结果提示,甲状腺I型脱碘酶在甲状腺功能调节中具有重要的作用,碘缺乏时D1 mRNA表达及活性的上调可促进T4向T3的转化,以满足机体代谢的需要,而过量碘对Dl基因表达的抑制可防止过多的T3对机体的损伤,具有重要的生理意义.