BALB/C乳鼠作为流行性出血热动物实验模型的初步研究

用EHF病毒76/118株、陈株、H_(8278)株、,A_(54)株经脑内注射BALB/C小鼠,乳鼠均能发生感染,并引起规律性发病,表现为耸毛、个体瘦小、动作迟缓、后肢麻痹僵直,直至死亡。在乳鼠脑、肺、肝等脏器内均可检出病毒抗原,并可分离出病毒,传3代的乳鼠脑悬液经VeroE—6细胞滴定,病毒滴度有明显增高,说明Balb/C乳鼠对EHF病毒是敏感的,可作为EHF的实验动物模型。幼鼠和成鼠虽然也能感染EHF,但在脑、肺、肝等脏器中均查不出病毒抗原,而抗体水平却很高,最高可达1∶1280。     

长爪沙鼠腹腔巨噬细胞对流行性出血热病毒的敏感性

本文就长爪沙鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)对流行性出血热病毒(EHFV)的敏感性进行了试验,用3株野鼠型(A9、R3、76-118)和1株家鼠型EHFV(R22),并用对EHFV敏感的Vero-E6细胞作对照,结果沙鼠腹腔巨噬细胞感染EHFV后,第1代第8天前即可查见明显的特异性荧光,第16天左右达高峰,病毒滴度≥10~(-7.5),与Vero-E6细胞比较,培养上清液的病毒滴度,沙鼠MΦ较Vero-E6细胞高1～4个对数,当感染病毒量很低时,在Vero-E6细胞内测不出特异性抗原,而在沙鼠MΦ内病毒仍可繁殖,滴度达10~(-5.(?)),中和试验、间接免疫荧光检测和荧光阻断试验均证明,沙鼠MΦ内繁殖的病毒确实为EHFV。     

流行性出血热病毒对乳鼠致病特点的观察

本文观察了两株从病人体内新分离的流行性出血热(EHF)病毒114株和435株对乳鼠的致病特点,并在感染的乳鼠脑内找到了EHF病毒。免疫荧光检查发现,病毒抗原广泛存在于感染鼠的脑、肺、肝、肾等脏器。脑内和腹腔两条感染途径的比较发现,病毒抗原在上述脏器中的分布基本一致,但前者脑内的病毒感染滴度较后者高一个对数单位。对病毒的动态观察发现,EHF病毒首先在乳鼠腹腔感染6小时后的腹腔巨噬细胞(Mφ)中分离到、并持续阳性;病毒血症出现在感染后2天,随之在脑、肺、肝、肾和脾脏中查到。以上结果表明:EHF病毒对乳鼠具有广泛的嗜性,脑内感染途径能获得较高滴度的感染性病毒。提示EHF病毒在鼠mφ中增殖并携带至全身播散,可能是造成乳鼠全身性弥漫性感染的主要原因。     

汉滩病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞模型的建立

目的:建立汉滩病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞模型。方法:PBS灌洗6~8周龄C57BL/6小鼠腹腔,分离获取小鼠腹腔巨噬细胞后,以100 TCID50汉滩病毒76-118株感染小鼠腹腔巨噬细胞,通过间接免疫荧光、ELISA和Realtime PCR检测病毒感染情况。结果:病毒感染3 d后,间接免疫荧光和ELISA检测到病毒核衣壳蛋白的表达,Realtime PCR检测到病毒核酸的表达。结论:建立了汉滩病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞的模型,为进一步阐明汉滩病毒的发病机制奠定了基础。     

四川省部分疫区流行性出血热病原学及流行病学研究

本文报道四川省流行性出血热(EHF)疫医鼠类带毒调查、病毒分离鉴定及抗原性分析结果,由7份EHF抗原阳性鼠肺标本及9份急性期患者血清中各分离到EHF病毒5株。由鼠类分离的5株病毒包括褐家鼠2株,黄胸鼠1株,四川短尾(鼠勾)鼱1株以及中麝(鼠勾)1株。经IFA、ELISA及单克隆抗体的抗原测定,证明所有毒株均属野鼠型、抗原性与76—118株及A_9株接近,但由短尾(鼠勾)及中麝(鼠勾)分离的毒株的抗原性有明显差异。     

流行性出血热病原学的研究——Balb/c乳鼠感染病毒后鼠脑、鼠肺超微结构的观察

Balb/c乳鼠用标准病毒(EHF)H8278感染后取鼠脑、鼠肺进行电镜观察,结果证明:在鼠脑及鼠肺细胞内均发现有病毒,病毒特点:呈园形或椭园形,单位膜结构清楚,内含有比较疏松的丝状或颗粒状结构,单位膜外有微突。病毒的大小在90～120mm之间。此外在细胞浆内并发现有包涵体。     

病毒感染后的实验小鼠对植入的肿瘤细胞抑制作用的实验研究

昆明鼠或ＤＢＡ／２鼠腹腔植入Ｓ１８０肉瘤细胞。Ｐ３８８白血病细胞或Ｆｒｉｅｎｄ白血病细胞后１００％死亡。然而在小鼠感染ＰＲ８株甲型流感病毒、ＮＤＶ或Ｍ１４病毒２５天左右的恢复期腹腔接种上述三种恶性肿瘤细胞时,３０～９５％的小鼠能抑制肿瘤发生而存活。另外,自然感染鼠痘而存活的小鼠,在其感染恢复期内接种上述肿瘤细胞,小鼠的存活率可达１００％,而相应的禾感染鼠痘组小鼠１００％死于肿瘤。病毒感染恢复期小鼠的抗肿瘤作用机制是机体非特异性肿瘤免疫机能强化所致。我们的结果表明,病毒恢复期Ｔ细胞的杀肿瘤作用增强并伴有巨噬细胞数量增加及其吞噬活性增加的现象。本研究的结果提示,自然或人为地非致病病毒感染有利于机体清除变异细胞或肿瘤细胞,对肿瘤发生有一定的防护作用。     

甲型流感病毒免疫治疗S_（37）腹水瘤的实验研究

用甲型流感病毒７５－３９株鼠肺适应型,免疫治疗Ｓ３７腹水瘤小鼠,存活率达９３．３％。体外流感病毒感染Ｓ３７肿瘤细胞,经不同时间观测,到３天时Ｓ３７细胞经胎盘蓝染色发现细胞１００％死亡。而对照组Ｓ３７细胞死亡率为１０％左右（ｐ＜０．０１）。进一步研究病毒免疫治疗Ｓ３７腹水瘤小鼠的机理,发现经病毒感染后小鼠ＮＫ细胞杀伤活性升高达５８％,正常鼠ＮＫ活性为２２％,两者有显著性差异（ｐ＜０．０１）。另外,检测病毒注射后小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性也随之升高。     

基因Ⅲ型新城疫病毒感染鸡外周血单个核细胞后的靶细胞分析

新城疫(ND)是鸡新城疫强毒株引起的一种鸡的烈性传染病,目前疫苗接种是防治该病的主要手段。临床上曾分离到与中等毒力疫苗株Mukteswar高度同源的强毒株JS/7/05/Ch,其通过静脉注射后毒力显著增强。为了探究JS/7/05/Ch经血液途径毒力增强的机制,本研究选用鸡外周血单个核细胞(PBMC)作为研究模型,分析基因Ⅲ型NDV在PBMC中的靶细胞。细胞分选结果表明病毒感染可诱导PBMC中单核细胞的增殖。实验组病毒感染后单核细胞相对占比上升,感染后1d Mukteswar组(Muk组)单核细胞占比16.3%,JS/7/05/Ch组(JS组)为13.21%,而对照组单核细胞仅占比3.18%。荧光定量PCR测定分选后各细胞中的病毒载量,感染后3d JS组单核细胞中的病毒含量与感染后1d相比极显著性增加(P<0.01)。感染后1d病毒以感染淋巴细胞为主,而在感染后3d单核细胞的相对病毒含量均超过淋巴细胞占据主导地位,Muk组和JS组分别为54.2%和60.2%。综上所述,基因Ⅲ型NDV在PBMC中的靶细胞是单核巨噬细胞。这为进一步研究这对基因Ⅲ型模式病毒毒力差异的机制奠定了一定基础。     

几种细胞因子对HSV─1感染单核巨噬细胞的影响

以ＨＳＶ─１接种人单核细胞系Ｕ＿（９３７）和小鼠腹腔巨噬细胞,并在接种前后分别以不同的细胞因子处理。经病毒滴定、免疫荧光试验检测病毒抗原及多聚酶链反应技术检测病毒基因,研究了细胞因子对ＨＳＶ─１感染单核巨噬细胞的影响。结果证实,ＴＮＦ─α５０ｕ／ｍＬ　、Ｍ─ＣＳＦ２００ｕ／ｍＬＩＦＮ─γ１０００ｕ／ｍＬ、ＩＦＮ－α１０００ｕ／ｍＬ均能增强单核巨噬细胞对ＨＳＶ─１的抗性,加速细胞对ＨＳＶ─１ＤＮＡ的清除,抑制病毒抗原的表达;并能拮抗ＬＰＳ对ＨＳＶ─１在单核巨噬细胞中表达的促进作用。     

免疫调变人巨噬细胞增强天然杀伤(NK)细胞活性的表达

人体单核-巨噬细胞通过塑料培皿粘附技术从外周血单个核细胞(PBMNC)中分离,并在体外短期培养。培养8天后,这些细胞已发生形态和功能上的分化,成为成熟的巨噬细胞。培养8天的巨噬细胞和PBMNC的比例为2:1和1:1时能引起NK活性的显著抑制。本实验应用4小时~(51)Cr释放试验来测定NK细胞对K562肿瘤细胞的细胞毒性。然而,培养1天的粘附性单核细胞不能观察到对NK活性的抑制。这提示,巨噬细胞对NK活性的抑制与体外分化、成熟、激活有关。培养1天和8天的单核-巨噬细胞对肿瘤靶细胞MBL-2和EAC都有很强的细胞静止效应。应用免疫调变剂脂多糖(LPS)体外处理粘附性单核细胞或巨噬细胞,仅培养8天的巨噬细胞能显著增强NK活性,而培养1天的单核细胞不能引起这种功能。这表明,免疫调变效应的诱导期发生在细胞明显增大的巨噬细胞形成期。与此同时,免疫调变巨噬细胞增强了IL-1的分泌和保持了抗肿瘤功能,从而证明,培养8天的巨噬细胞其抗肿瘤和免疫调节两类功能是可以分离的。本实验应用免疫调变剂寻找到既抗肿瘤又增强NK活性的人体新表型的巨噬细胞亚群。进一步支持了先前在小鼠激活的腹腔巨噬细胞免疫调变研究中的观察。     

单核巨噬细胞在病毒感染中的作用及抗体介导的感染增强

<正> 人类和动物的病毒感染分为初次感染和再次感染。在初次感染的恢复期及再感染时,机体的特异性免疫系统起着重要的作用。然而在初次感染的早期,即特异性免疫系统尚未被激活之前,防止病毒的入侵、繁殖和扩散以及消灭病毒,机体早已存在的非特异免疫系统和各种屏障却起决定性作用。单核巨噬细胞位于许多病毒最初感染的部位以及它     

β-葡聚糖对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的免疫刺激作用

目的研究β-葡聚糖的应用对Balb/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将不同浓度（0～150μg/ml）的β-葡聚糖与Balb/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7作用1～7d后,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖情况并绘制细胞生长曲线。结果β-葡聚糖在50～75μg/ml的浓度范围内能够明显地刺激细胞发生增殖。结论适当剂量的β-葡聚糖作用足够时间,RAW264.7细胞系可以发生显著的生长促进效应。     

鼠诺如病毒感染RAW264.7细胞中干扰素和干扰素激活基因转录水平研究

诺如病毒(Norovirus,NoV)是全球急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要致病原。鼠诺如病毒(Murine norovirus,MNV)是研究诺如病毒的理想研究模型。本研究通过实时定量荧光PCR检测急性感染毒株MNV-CW1和持续性感染毒株MNV-SH1603感染Balb/c小鼠后的排毒情况以及感染RAW264.7细胞后不同时间点病毒RNA扩增、干扰素(Interferon,IFN)和干扰素激活基因(Interferon-stimulated gene,ISG)转录水平,以探讨不同的MNV毒株感染诱导IFNs和ISGs基因表达的特征。研究显示MNV-CW1和MNV-SH1603病毒感染Balb/c小鼠后排毒时间不同。MNV-CW1和MNV-SH1603病毒感染RAW264.7细胞后,6h后出现明显扩增,48h达到病毒复制高峰,随后复制速度减慢。MNV-SH1603增殖比MNV-CW1快。两种病毒感染RAW264.7细胞后能上调IFN-β,IFN-λ2,ISG15和ISG54转录水平。MNV-CW1感染后,诱导IFN-β,IFN-λ2和ISG15基因表达上调,而ISG54在感染24h后转录水平下降。MNV-SH1603感染初期IFN-β,IFN-λ2,ISG15和ISG54基因转录水平持续增高,感染24h后IFN-β和ISG54的转录水平明显降低,IFN-λ2和ISG15转录水平峰值在感染后72h。研究揭示MNV病毒感染RAW264.7细胞后能上调IFN和ISG基因表达,但是MNV-CW1和MNV-SH1603诱导的基因表达特征有异同。     

几种细胞因子对HSV—1感染单核巨噬细胞的影响

以ＨＳＶ－１接种人单核细胞系Ｕ９３７和小鼠腹腔巨噬细胞，并在接种前后分别以不同的细胞因子处理，经病毒滴定，免疫荧光试验检测病毒抗原及多聚酶链反应技术检测病毒基因研究了细胞因子对ＨＳＶ－１感染单核巨噬细胞的影响。结果证实，ＴＮＰ－α５０ｕ／ｍＬ，Ｍ－ＣＳＦ２００ｕ／ｍＬ，ＩＦＮ－γ１０００ｕ／ｍＬ，ＩＦＮ－α１０００ｕ／ｍＬ均能增强单核巨噬细胞对ＨＳＶ－１的抗性，加速细胞对ＨＳＶ－１ＤＮＡ的清除，抑     

逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒配基因的真核表达

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在PK-15细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的PK-15细胞腹腔免疫Balb/c小鼠,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。     

流行性出血热(EHF)Ⅱ型疫苗生产中病毒株及原液的质控检测

流行性出血热Ⅱ型纯化疫苗(即亚单位疫苗)系用Ⅱ型Hautaan病毒R_(22)SM株感染乳鼠脑精制而成。为了保证疫苗生产和质量控制,我们对病毒株的繁殖量,感染度,毒力及纯毒株的中和指数作了实验性检测,依据检测的结果:用Ⅱ型EHF毒株R_(22)SM株乳鼠脑内接种感染后的第4或5天病毒在脑内开始出现,而大量繁殖则在接种感染后第7～8。其单一鼠脑内病毒繁殖量(病毒滴度)和制成单一收获原液中病毒含量基本相一致;脑内病毒滴度log LD_(50)为9.7;原悬液中病毒滴度log ID_(50)为11.2,纯毒试验的特异性中和指数为1378。如上所述,各种实验检测结果完全符合EHF疫苗生产规程指标要求。     

七种实验动物对沙鼠利什曼原虫感受性的研究

本文报道3株近交系小鼠、沙鼠和仓鼠对沙鼠利什曼原虫的感受性。结果表明,BALB/c株小鼠,长爪沙鼠和黑线仓鼠对沙鼠利什曼有较好的感受性。CFW株小鼠感染后不久即可自愈,而C57 BL株鼠则抗拒感染。除了黑线仓鼠的睾丸在感染原虫后偶可产生转移性皮肤损害外,其余实验动物的感染均仅局限在接种部位的皮肤,进一步表明沙鼠利什曼是一种亲皮肤性的原虫。     

不同动物制备的抗血清对病毒抗原免疫反应的差异

血清学技术是病毒诊断、鉴定、分类及亲缘关系分析的重要手段。一般常用以制备抗病毒血清的动物是家兔,但也有采用其它动物的,如蛙、羊、豚鼠、鸡及小鼠等。本文比较了Balb/c小鼠、昆明种小鼠和新西兰大白兔对长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)和烟草花叶病毒普通株(TMVc)的免疫反应特征。     

中华蜜蜂囊状幼虫病病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)单克隆抗体,本实验利用纯化的中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV)免疫Balb/c小鼠,经过3次免疫后,小鼠断尾采血测其血清效价,选择效价高于1∶80 000的小鼠,在细胞融合前3~4d再加强免疫一次。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后注射入Balb/c小鼠(Mus musculus)腹腔制备单抗腹水。共获得9株稳定分泌抗CSBV的单克隆抗体,命名为10A1、5B10、5A5、5H2、11D7、9A5、1D3、3C10、10C4,效价都在1∶16 000以上,经间接ELISA实验检测表明,具有较好的特异性。在此基础上,将9株腹水单抗分别与CSBV互作后,接种于2~3日龄中华蜜蜂幼虫,观察幼虫死亡率,研究单克隆抗体中和CSBV病毒能力,结果表明筛选到三株单克隆抗体(10A1、5A5、9A5)对CSBV有中和作用,为CSBV的防治研究奠定了基础。