五氧化二钒对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

五氧化二钒（V2O5）是一种常见的工业毒物和环境污染物。为了进一步验证钒的致畸性,并为揭示其发育毒性的作用机理提供依据。本在大鼠致畸试验的基础上,应用细胞微团培养方法他钒对大鼠胚胎芽细胞在体内外增殖和分化的影响。体外实验：从妊娠d13的孕鼠中分离出胚胎,取前肢芽,制成细胞悬液（21×10^7cell/mL）,取10μL置于培养板上成一微团,于高湿、37℃的CO2孵箱中预培养2h,然后缓慢加入不同剂量的V2O5溶液（勿冲散微团,对照加培养基）,培养5d。体内实验：取鼠妊娠d12时,经i.p,以不同剂量的V2O5处理,16h后处死、取胚胎肢芽细胞培养。然后,固定细胞,分别采用苏木精染色和阿利新兰染色,前经甲醇脱色后以酶标光密度值反映细胞增殖情况;后由镜检每一微团中天蓝色的分化落数判断对细胞分化的抑制作用。体外试验结果显示,钒剂量在5．0μmol／L,以上时细胞集落数明显下降,光密度则在7．5μmol／L以上时明显下降,均呈明显的剂量－反应关系（Table1),说明钒对肢芽细胞增殖和分化都有抑制作用,但细胞增殖和分化的两条抑制曲线明显不同（Fig.1),其中IC50分别为13．14和4．77μmol／L。按Flint及Reanaault提出的判定标准,钒为肢芽细胞的特异性分化抑制物,与大鼠致畸试验的结果一致。体内染毒对胚胎肢芽细胞增殖的影响与体外染毒无明显差别,但对抑制细胞分化则差别显,2mg/kg V2O5组的集落数已减少近50％。已在抑制胚肥形成过程中的细胞增殖和分化可导致发育异常。钒在对肢芽产殖无明显影响时即可影响细胞的分化,表明：至少在较低剂量时,抑制胚胎细胞分化可能是钒致畸机理的最初形式;提高剂量后,其发育毒性除表现在影响细胞分化外,还可能表现在抑制细胞增殖。     

水稻叶片中过氧化氢与核酮糖—1,5—二磷酸羧化酶／加氧酶降解 …

甲基紫精（ＭＶ）处理水稻植株能快速诱导核酮糖－１,５－二磷酸羧化酶／加氧酶（Ｒｒｂｉｓｃｏ,ＥＣ４．１．１．３９）及其它可溶性蛋白的降解。ＭＶ浓度越高,降解速率越高。ＭＶ能诱发叶片内源Ｈ２Ｏ２迅速积累。光合电子传递抑制剂ＤＣＭＵ（１５０μｍｏｌ／Ｌ）能显著抑制ＭＶ（１００μｍｏｌ／Ｌ）诱导的Ｒｕｂｉｓｃｏ及其它可溶性蛋白的降解;活性氧清除剂抗坏血酸（５ｍｍｏｌ／Ｌ）、甘露醇（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）、苯     

含CD自杀基因腺病毒载体的构建及其应用

构建了含ＣＭＶ启动子、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ｃｄ）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶＣＤ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ鉴定证实,ｃｄ基因已克隆进入ＡｄＣＭＶＣＤ,并在受染细胞中表达。经氯化铯密度梯度离心法纯化的病毒滴度达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。经１００ｍ．ｏ．ｉ．的ＡｄＣＭＶＣＤ感染的ＨｅＬａ和Ｃ６细胞株在１００μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,细胞存活率＜２０％。同时也观察到ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统有很强的旁杀伤效应,将３．３％的ＡｄＣＭＶＣＤ受染细胞与９６．７％的野生型细胞混合,经５０μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,＞６０％的细胞被杀死。ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

亚硝酸盐对培养心肌细胞周期的影响

本文用流式细胞仪测定了ＮａＮＯ２对体外培养的Ｗｉｓｔａｒ乳鼠心肌细胞周期的影响。结果表明,１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＮａＮＯ２引起Ｓ期细胞明显减少（Ｐ〈０．０５）;１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ ＮａＮＯ２对其 显著（Ｐ〉０．０５）。应用「３Ｈ」ＴｄＲ掺入法测定了ＮａＮＯ２对心肌细胞增殖的作用。实验发现,１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＮａＮＯ２明显抑制细胞增殖,而１０＾－９－１０＾７ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＮＯ２则促进细胞增殖     

钙通道阻滞剂对肾上腺素能受体激动剂促血管平滑肌细胞增值的抑制

本工作观察到１０－６—１０－５ｍｏｌ／Ｌ去甲肾上腺素（ＮＥ）和１０－７—１０－５ｍｏｌ／Ｌ异丙基肾上腺素（ＩＳＯ）可明显促进离体培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖和ＤＮＡ的合成,并呈剂量依赖效应,该效应可为相应的受体阻断剂ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）和ｐｒｏｐｔａｎｏｌｏｌ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）所抑制;ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）和ｖｅｒａｒｏｍｉｌ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）分别与同样浓度的ＮＥ同时加入细胞培养液中,其细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入率分别较单用ＮＥ时显著降低（Ｐ＜０．０１）,ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ与ｖｅｒａｐａｍｉｌ亦明显抑制ＩＳＯ促ＶＳＭＣ增殖的作用。     

丹皮酚对心肌细胞自律性和延迟后除极的影响

目的与方法：采用常规玻璃微电极技术研究丹皮酚对离体心肌细胞自律性（ＡＭ）、延迟后除极（ＤＡＤ） 及触发活动（ＴＡ）的影响。结果：１．８×１０－４ｍｏｌ／Ｌ丹皮酚灌流组,肾上腺素（Ａｄｒ）的阈浓度空白对照组为（１．２８±０．５７）μｍｏｌ／Ｌ,药后为（１．５６±０．５３）μｍｏｌ／Ｌ（ｎ＝９,Ｐ＞０．０５）;用（１．８×１０－ ３） ｍｏｌ／Ｌ丹皮酚（Ｐａｅ）灌流组,Ａｄｒ 浓度由空白对照组的（１．２２ ±０．６２）μｍｏｌ／Ｌ升高到（６．２２±２．１１）μｍｏｌ／Ｌ（ｎ＝９,Ｐ＜０．０１）。１．８×１０－３ｍｏｌ／Ｌ的Ｐａｅ 能明显抑制哇巴因（Ｏｕａ）诱发的ＤＡＤ的幅值,当基本刺激周长为５００,４００,３００ 和２００ ｍｓ 时,其ＤＡＤ幅值从（５．５±２．０）ｍＶ,（７．３±２．１）ｍＶ,（８．０ ±２．４）ｍＶ和（９．２±１．９）ｍＶ减小到（３．０±１．１）ｍＶ、（３．６±１．７）ｍＶ,（４．３±２．０） ｍＶ和（５．９ ±１．６） ｍＶ,Ｐ＜０．０１。当基本刺激周长为２００ ｍｓ时,ＴＡ 数目由５．５±１．０ 降至０．７±０．３（Ｐ＜０．０１）。结论：丹皮酚能抑制心肌细胞ＡＭ、ＤＡＤ及ＴＡ,具有抗心律失常作用     

SNP抑制5-HT诱导的胞内游离钙浓度升高和内钙释放

用Ｆｕｒａ － ２／ＡＭ 荧光测量技术研究了５ － 羟色胺（５－ ＨＴ） 诱导的大鼠尾动脉平滑肌细胞胞内钙升高和一氧化氮（ＮＯ） 的抑制效应。实验表明, 胞外０ｍ ｍｏｌ／ Ｌ Ｃａ２ ＋ 时胞内静息［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 为２０ ．２±８ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ８） 。１０μｍｏｌ／Ｌ ５－ ＨＴ 可诱导出胞内钙库释放引起的瞬态［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值达２４５ ．７ ±７１．６ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ６） 。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ 硝普钠（ＳＮＰ） 可抑制５－ ＨＴ 诱导的［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值浓度降为７５．１±３５ ．９ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ５） 。当细胞浴液含２．５ｍ ｍｏｌ／Ｌ Ｃａ２ ＋ 时,静息［Ｃａ２ ＋］ｉ为１１２ ．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ５） , 这时１０μｍｏｌ／ Ｌ ５ － ＨＴ 可诱导［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 的峰值为２５２ ．３ ±８０ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,以及其后平台浓度为１４３ ．０ ±３７ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,略大于［Ｃａ２ ＋］ｉ 为１１２．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／Ｌ 的静息浓度,为外钙内流引起。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ ＳＮＰ 也可抑制５－ ＨＴ 诱导［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 平台相浓度。平台浓度由１４３ ±４７     

钙通道阻滞剂对肾上腺素能受体激动剂促血管平滑肌细胞增殖的抑制

本工作观察到１０＾－６－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ去甲明上腺素（ＮＥ）用１０＾－７－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ异丙基肾上腺素（ＩＳＯ）可明显促进离体培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖和ＤＮＡ的合成,并呈剂量依赖效应,该效应可为相应的受体阻断剂ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ（１０＾－６ｍｏｌ／ｌ）和ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ（１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）所抑制;ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）和ｖｅｒａｐａｍｉ     

过氧化氢和次黄嘌呤＋黄嘌呤氧化酶对家兔离体肺、脑动脉环缺氧反应的影响

在家兔离体肺内动脉、脑基底动脉环观察了过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）及次黄嘌呤＋黄嘌呤氧化酶（ＨＸ＋ＸＯ）对动脉环缺氧反应的影响。结果发现：（１）Ｈ２Ｏ２１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ加强ｆ去内皮肺动脉环（ＰＡ－）的缺氧收缩幅度（ＴＩＨ）,而Ｈ２Ｏ２３×１０－５ｍｏｌ／Ｌ、ＨＸ１０－４ｍｏｌ／Ｌ＋ＸＯ０．１及０．０３Ｕ／ｍｌ则可抑制内皮完整肺动脉环（ＰＡ＋）及ＰＡ－的ＴＩＨ（Ｐ＜０．０５）;（２）各剂量Ｈ２Ｏ２及ＨＸ＋ＸＯ对有、无内皮的脑基底动脉环的ＴＩＨ均无显著影响。     

α_1肾上腺素能受体介导去甲肾上腺素促大鼠培养心肌细胞蛋白质合成效应

在无血清和含１．０％、５．０％血清培养的新生大鼠心肌细胞标本上,去甲肾上腺素（ＮＥ,２．０μｍｏｌ／Ｌ）使细胞蛋白质含量（Ｌｏｗｒｙ法）分别比相应对照组增加４０％、２６％、１９％（Ｐ均＜０．０１）;细胞３Ｈ－亮氨酸参入量与ＮＥ浓度呈正性剂量依赖性,最大效应浓度为２０．０μｍｏｌ／Ｌ;无血清培养体系中,０．２、２．０、２０μｍｏｌ／Ｌ的ＮＥ使参入量分别比对照增加１７．８％、３５３％、３７．７％;１．０％血清培养体系中分别比对照增加１６．２％、２７．９％、３１．６％（Ｐ均＜０．０５）;哌唑嗪（２．０μｍｏｌ／Ｌ）可阻断ＮＥ的促蛋白质合成作用,心得安（２．０μｍｏｌ／Ｌ）则无此效应。提示在无血清或低浓度血清培养体系中,ＮＥ可促进心肌细胞蛋白质合成,增加细胞蛋白质含量,该作用可能是通过α１肾上腺素能受体介导。     

α受体激动对绵羊心脏浦肯野纤维延迟后除极的影响

用乙酰毒毛旋花子成元０．２μｍｏｌ／Ｌ诱发绵羊心脏浦肯野纤维产生延迟后除极（ＤＡＤ）,采用细胞内微电极记录。在用普奈洛尔１．０μｍｏｌ／Ｌ阻断β受体条件下,苯肾上腺素１．０μｍｏｌ／Ｌ使ＤＡＤ幅值由８．１±２．２ｍＶ增至９．５±２．８ｍＶ,时程由２４０±４７ｍｓ延长到２７３±４７ｍｓ（ｎ＝１３,ＰＭ＜０．０１）,ＤＡＤ上升速率由０．０３９±０．０２３Ｖ／ｓ增至０．０５１±０．０２６Ｖ／ｓ（ｎ＝１３,Ｐ＜０．０５）,ＤＡＤ在动作电位后出现的时间提前了３０±４７ｍｓ（ｎ＝１３,Ｐ＜０．０５）。用去甲肾上腺素１．０μｍｏｌ／Ｌ增强ＤＡＤ引起触发活动时,酚妥０拉明１．８μｍｏｌ／Ｌ不能抑制触发活动,普奈洛尔１．０μｍｏｌ／Ｌ能抑制之。上述结果表明α受体激动对ＤＡＤ有轻度增强作用,但由ＤＡＤ引起的触发活动,α受体阻滞剂的抑制作用不如β受体阻滞剂有效。     

组胺H_2受体激动剂和拮抗剂对WEHI_3细胞增殖的作用

近年来研究表明组胺及其受体在正常造血调控中起着重要作用。本研究用琼脂半固体培养技术观察了特异性组胺Ｈ２受体激动剂英普咪定和拮抗剂西咪替丁对髓系粒－单核细胞白血病干细胞株ＷＥＨＩ３细胞生长的影响。结果表明不同浓度的英普咪定（１０－８─１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对集落数呈明显剂量依赖性抑制,与对照组比较ｐ＜０．０１。１０－１０─１０－９ｍｏｌ／Ｌ英普咪定对集落数无明显影响。１０－４─６×１０－４ｍｏｌ／Ｌ的英普咪定对集落产率的抑制作用趋于饱和。最大抑制效能为对照组的５４％（ｐ＜０．０１）。１０－４ｍｏｌ／Ｌ西咪替丁能完全阻断１０－８ｍｏｌ／Ｌ英普咪定的集落抑制作用。对≥１０－６ｍｏｌ／Ｌ英普咪定的作用西咪替丁均有部分阻断作用,与对照组比较Ｐ＜０．０１。单用西咪替丁对ＷＥＨＩ３细胞无明显直接作用。这提示ＷＥＨＩ３细胞株上存在有组胺Ｈ２受体,激动Ｈ２受体可抑制细胞增殖。     

α受体激动对绵羊心肌瞬时性内向离子流的影响

用乙酰毒毛旋花子甙元（ＡＳ）０．０５μｍｏｌ／Ｌ诱发绵羊心浦肯野纤维产生稳定的瞬时性内向离子流（Ｉｔｉ）,用普萘洛尔０．５μｍｏｌ／Ｌ阻断β受体,观察α受体激动剂苯肾上腺素（ＰＥ）０．３,１．０μｍｏｌ／Ｌ对Ｉｔｉ幅值与时程的影响。ＰＥ１．０μｍｏｌ／Ｌ灌流２０,５０ｍｉｎ时Ｉｔｉ幅值分别由对照值１２．８±１．９ｎＡ减小至１０．７±１．２ｎＡ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０５）与９．６±１．９ｎＡ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０１）;ＩｔｉＤ５０时程分别由对照值１４５±２４．４ｍｓ延长至１８３．３±２８．１ｍｓ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０５）与２０７．５±３４．２ｍｓ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０１）,ＰＥ对Ｉｔｉ的抑制作用呈剂量依赖性与时间依赖性。Ｉｔｉ到达峰值的时间和回复到基线的时间都延长,提示ＰＥ作用下Ｉｔｉ通道动力学发生了变化。如果在β受体激动剂异丙肾上腺素（ＩＳＯ）１．０μｍｏｌ／Ｌ增强Ｉｔｉ的基础上,ＰＥ１．０μｍｏｌ／Ｌ灌流１０ｍｉｎ,对Ｉｔｉ幅值的抑制及时程的延长作用更显著,Ｉｔｉ幅值由对照值１５．６±３．２ｎＡ减小到１０．３±２．２ｎＡ;ＩｔｉＤ５０由９２．５±１４．３ｍｓ延长到１３２．５±３６．０ｍｓ（ｎ＝５,Ｐ＜０．０１）。     

转小鼠金属硫蛋白cDNA枸杞的获得及其检测

小鼠金属硫蛋白－ＩｃＤＮＡ通过根癌农杆菌介导转枸杞,枸杞体内的表达产物对重金属镉有一定的抗性。用带有嵌合ｍＭＴ－ＩｃＤＮＡ及Ｃａ ＭＶ３５ｓ启动子的含非致瘤性Ｔｉ持粒载体的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４感染枸杞幼茎外植体,在含有卡那霉素１００μｇ／ｍＬ和５０μｍｏｌ／Ｌ Ｃｄ＾２＋的选择培养基上筛选转化的愈伤组织,并在含卡那霉素５０μｇ／ｍＬ和１００μｍｏｌ／Ｌ,Ｃｄ＾２＋的分化培养基上得到再生小芽。     

维生素A缺乏胎鼠作为先天性心脏病动物模型的实验研究

目的　探讨将维生素Ａ缺乏（ＶＡＤ）胎鼠作为先天性心脏病动物模型的可行性。方法取１１－１９ｄ不同胎龄正常及ＶＡＤ胎鼠心脏经石蜡包埋、切片及 ＨＥ染色观察其发育情况。结果 １．实验组饲料含维生素Ａ（ＶＡ）７μｇ／１００ｇ,经ＶＡＤ饮食喂养后实验组大鼠血清ＶＡ水平明显低于对照组［（０．１６８±０．０５９）μｍｏｌ／Ｌ Ｖｓ（２．１８±０．２３）μｍｏｌ／Ｌ,ｔ＝３２．８８, Ｐ＜０．００１］。 ２．大鼠死亡百分比：饲养于屏障系统的ＶＡＤ大鼠死亡百分比较饲养于开放系统中的要低４．６倍（１０％ Ｖｓ ４５．８３％．ｘ ２＝１６．６４, Ｐ＜０．００１）,对照组为０。 ３．实验组大鼠受孕百分比及每只孕鼠产仔数均低于对照组［５８．３３％ Ｖｓ ８１．５％, ｘ ２＝４．３７,Ｐ＜０．０５：（６．９７±２．７９） Ｖｓ（１３ ±１．０５）,ｔ＝７．１６, Ｐ＜０．００１］。 ４．经切片观察１１～１５ ｄ胎龄胎鼠实验组心脏出现明显发育延迟的占３６．６７％, １６～１９ ｄ胎龄胎鼠实验组心脏畸形占４１．４３％,血管异常占１８．５７％。结论ＶＡＤ胎鼠可用来作为先天性心脏病动物模型,但需改进饲养环境以减少异常死亡。     

腺病毒载体介导的肝癌细胞专一性自杀基因表达

构建由肝癌细胞专一的ａｆｐ基因表达调节元件控制自杀基因ＨＳＶ－ｔｋ的穿梭质粒,将它与缺陷型腺病毒载体重组,得到ＡｄｒＡＦＰＴＫ病毒。经ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等证实它们含ａｆｐ元件和ｔｋ基因。空斑形成试验表明病毒效价达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。同时构建由ＣＭＶ启动子控制ｔｋ基因的类似载体作为对照。将这两个重组腺病毒分别感染ＡＦＰ阳性（ＨｅｐＧ２）或阴性（ＨｅＬａ,ＢＲＬ－３Ａ）细胞株（ｍ．ｏ．ｉ．＝１００）,以丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ）处理后,用ＭＴＴ法测定杀伤细胞的效应。结果,ＡｄＣＭＶＴＫ感染这三种细胞后,ＧＣＶ半杀伤浓度分别为１．３、２、＜１μｍｏｌ／Ｌ;但是,ＡｄｒＡＦＰＴＫ感染的ＨｅＬａ和ＢＲＬ－３Ａ细胞的ＧＣＶ半杀伤浓度都＞１０００μｍｏｌ／Ｌ,而对ＨｅｐＧ２细胞只有＜１μｍｏｌ／Ｌ,表现出极高的细胞专一性。重组腺病毒ＡｄｒＡＦＰＴＫ可望用于肝癌的专一性基因治疗     

过氧化氢对蚕豆气孔运动和质膜K^＋通道的影响

不同浓度Ｈ２Ｏ２可使蚕豆（Ｖｉｃｉａ ｆａｂａ Ｌ．）叶片气孔关闭,抑制气孔张开,１０ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２最有效,１０μｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２仍明显使气孔关闭。且１０μｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２抑制气孔张开作用能被ＥＧＴＡ所消除,表明Ｃａ＾２＋参与低浓度Ｈ２Ｏ２使气孔关闭的过程。２ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２可使质膜内向Ｋ＾＋通道电流明显减小而外向Ｋ＾＋通道电流显著增加。因此,Ｈ２Ｏ２促进蚕豆气孔关闭主要是通     

光氧化胁迫下几种植物叶片的超氧自由基产生速率和光合特性

以甲基藉精（ＭＶ）Ｏ－１ｍｍｏｌ／Ｌ在１５００μｍｏｌ ｍ＾－２ａ＾－１光下处理Ｃ３植物花生、水稻和Ｃ４植物玉米、甘蔗的叶圆片３０ｍｍ,Ｏ２＾２＋产生速率随ＭＶ浓度提高而加快ＭＶ浓度超过１０μｍｏｌ／Ｌ,光合放氧出现负植并持续增大。光氧化作用降低叶绿素荧光参数ＦＶ／Ｆｍ,ΦＰＳⅡ和ｑｐ,而ｑＮ则或提高（Ｃ３植物,ＭＶ１０μｍｏｌ／Ｌ）或几平下）。热耗散系数ＫＤ的变化与ＱＮ相似。秘Ｃ４植物相比,Ｃ３     

人绒毛膜促性腺激素β—亚基在中国仓鼠卵巢细胞中…

本文以哺乳动物细胞表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ为运载体,构建了受控于ＳＶ４０早期启动子β－ｈＣＧ基因的表达载体,转染ＣＨＯ－ｈｆｒ＾－细胞后,挑选ＣＨＯ（ｄｈｆｒ＾＋）细胞,结果表明β－ｈＣＧ不仅在细胞中表达,不分泌到培养液中,通过氨甲喋（ＭＴＸ）加压后,表达量逐渐提高,０．１μｍｏｌ／ＬＭＴＸ条件下培养液中β－ｈＣＧ最高表达量可达到１．５μｇ／１０＾６细胞．２４小时。经亲和层析获得纯的重组β－ｈＣ     

体外培养大鼠星形细胞的缺糖缺氧性损伤及药物的保护

本实验用大鼠星形细胞体外培养模型,观察了细胞在不同条件下乳酸脱氨酶（ＬＤＨ）的漏出。发现当去掉葡萄糖后,细胞缺氧５和７ｈ后ＬＤＨ漏出明显增加,５ｂ为５９．７±２５．３Ｕ／ｍｇ蛋白（对照组２４．７±１６．３,Ｐ＜０．０５）,７ｈ为６８．３±８９Ｕ／ｍｇ蛋白（对照组３９．９±２１２,Ｐ＜０．０１）。用３－氧－甲基－［１－￣３Ｈ］－Ｄ－葡萄糖摄取法测量细胞体积,结果显示缺糖缺氧５ｈ后细胞明显肿胀,从对照组的４．１±１．２增加到８．１±３．２μｌ／ｍｇ蛋白（Ｐ＜０．０１）。丹参有效成分７６４－３在０．５至５０μｍｏｌ／Ｌ时能减少缺糖缺氧细胞ＬＤＨ漏出;在５０μｍｏｌ／Ｌ时能减小缺糖缺氧细胞的体积。谷氨酸受体拮抗剂ＤＮＱＸ（６,７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２,３ｄｉｏｎｅ）５０μｍｏｌ／Ｌ能减轻星形细胞肿胀和ＬＤＨ漏出。