微生物的保存方法(续七)——病原性细菌的保存方法(兽医学领域)

一、前言 病原性细菌保存最重要的问题是保持该菌的生物学及免疫学的各种特性,尤其要保持其病原性不变。 保存兽医学领域的病原性细菌,与一般细菌相同,主要采用传种培养方法、冰冻法及冻干法;其它,如Stamp氏明胶片干燥法也可试用。 传种培养保存法具有按需要随时接种,供做试验的方便,但其缺点是可能在传种过     

微生物的保存方法(续二)

<正> (11)冷冻干燥法: 1.冻干法的原理及适用范围 (1)冻干法的原理 冻干法的原理简单,即首先使微生物冻结,然后在负压下进行升华、除水。菌体的水分大部分被除掉之后,则细胞的生活反应事实上即将停止,从而得以长期保持其生活状态。冻干有各种方式,这里将包括水升华过程的干燥法统称冻干法。 做为除水的手段,冻干法是个缓和的方法,但对于敏感的生物细胞,如果不加以充分注意,大部分细菌都有可能因冻干处理而死亡。关于菌种保存,可能被认为只要有一点菌活存下来就行了,但这只能是在万不得已的情况下的说法,而要想保持菌株的性质不发生变化,就必须设法尽量使更多的细胞活存下来。特别脆弱的菌另当别论,一般说来都希望活存率能保持在10％以上。 (2)适用范围 冻干法适用于大多数细菌及放线菌,同时病毒、噬菌体、立克次体、霉菌、酵母等,大部分约可用此法保存。     

微生物的保存方法(续五)

<正> (九)非冻干的其他干燥保存法 如前所还,冻干法的基本特征是首先使试料冻结,继而使冰升华。所以,同液态干燥法相比,具有下列优点:(1)可防止发生气泡;(2)操作的全过程可在低温下进行;(3)在干燥过程中保持着多孔状态,不会形成皮膜或干燥不均匀;(4)能保持原形不变,加水后容易溶解。所以,冻干法可以说是微生物干燥保存的主要方法。 但是,冻干法并非在任何情况下总是最好的方法。例如,试料的予冻就有可能对于某种微生物具有极大的伤害。因此,人们又设计了几种不通过结冰进行干燥的方法。这一节就介绍此类干燥保存方法。 用土、砂等也是一种干燥方法,是一向应用甚广的主要的微生物保存方法,即前述的载体保存法。     

幽门螺旋菌保存方法的初步研究

幽门螺旋菌(HP)过去称它为幽门弯曲菌(CP)是近年来从人体胃组织中发现的一种细菌,自1982年首次培养成功以来,已做了大量的研究工作,它与胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系.幽门螺旋菌营养要求和培养条件都比较高,而且生物学特性,经多次传代比较容易产生变异,特别是菌种保存方面还存在不少问题,该菌的长期贮存很困难,而长期贮存对该菌的药敏,生物学特性的研究,动物模型的建立都是非常重要的。为了开展对幽门螺旋菌与慢性胃炎和消化性溃疡关系的基础研究,我们对临床胃及十二指肠患者粘膜分离出的幽门螺旋菌进行传代培养,在10％兔全血的布氏肉汤琼脂培养基上,在混合气体(10％CO_2,5％O_2,85％N_2条件下),4℃冰箱中保存于不同时间检查了存活情况,生物学特性的比较。实验表明,用这种方法保存细菌存活率,菌体形态生物学特性保存较好,取得了较满意的结果.     

真空冷冻干燥法保存菌种

我们测验了在室温(波动为5—36℃)贮藏4年半一8年,用脱脂牛奶作保护剂,真空冷冻干燥保存的559种20lo株细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌的存活力,以及其中部分菌株的主要生理特性。贮存在室温的真空冷冻干燥法保存的84种484株细菌,180种565株放线菌,59种459株酵母菌和236种502株丝状真菌的存活力分别是467(96·5％)、516(91．33％)、394(85．83％)和439(87·45％)。我们还观测了贮藏在5℃,1957年真空冷冻干燥法保存的细菌。在这种条件下保存16年的32种126株细菌,103株(81．74％)保持着活力,除个别菌株外,没有任何种的死亡。所测定的17株真空冷冻干燥保存的菌种的生理特性,与定期移植保存的同一菌株对比结果,除两株大肠杆菌,其中l株谷氨酸脱羧酶活力减退外,其他菌株都没有明显的变化。     

根瘤菌数值分类方法探讨

数值分类是指用数值分析方法,借助电子计算机将运筹分类单位(OTU)(如细菌菌株)按其性状状态的相似程度归类成表观群(phenon)。为了揭示生物分类单位间的真实关系,需要尽可能多的特性测定,将这些信息转换为数值,对这些数值进行运筹处理,其计算量往往十分巨大,必须依靠电子计算机来完成,所以直至本世纪四十年代电子计算机技术兴起,才     

无水硅胶保存支原体

<正> 支原体在血清肉汤-70℃冻结,可以存活好几年。除保存地方问题以外,支原体频繁冻结和解结,生存性将减低。冻干支原体证明是令人满意的。但实验室有时不得不在短期内保存许多菌株,应该精选贮存方法。 Perkins曾叙述真菌抱子或Crassa链孢霉菌丝体悬于脱脂奶中被吸附到无水硅胶微粒上的贮存技术。将这样保存的原始菌株,取一些颗粒接种于适宜肉汤中,可以恢复生长。这样的干燥贮存管,在数年间进行反复试种,证明生长出来的细菌没有发生变异。     

菌种保存方法对冰核细菌冰核活性的影响

本文测定了5种保存方法及3种保存温度,对4株代表3个属4个种(变种)的冰核细菌冰棱活性的影响。结果表明,不同保存方法对冰核细菌的存活力和冰核活性存在着不同程度的影响,保存温度越高,对冰核活性的影响越大,不同菌种对保存的敏感性不同。所适合的保存方法也不同。真空冷冻干燥和灭菌水于-20℃冷冻保存对各菌株的存活力和冰核活性的影响都较小,适用于一般冰棱细菌的长期保存。而10%甘油冷冻保存则不适用于冰核细菌的保存。     

掘氏疫霉遗传学研究I．自交后代(S1)生物学性状的遗传与变异

测定了掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker生长速率、菌落形态、菌体形态、产孢能力、耐35℃高温生长、致病力等生物学性状在自交S1代的遗传与变异。2个掘氏疫霉野生型菌株(A1、A2各1株)经聚碳膜间隔配对诱导自交产生的卵孢子(保存110天左右)在S+L培养基上萌发,分别获得30和35个单卵孢株(萌发率10％左右)。测定结果表明,上述生物学性状在2个亲本自交后代均发生变异,部分单卵孢株生长速度减慢、菌落形态明显改变、孢子囊和菌丝畸形、产孢能力增强、在35℃中弱生长或不生长,或致病力减弱直至无致病力。在亲本的单游动孢子无性系后代未观察到上述变异,说明上述生物学性状变异主要因亲本遗传因子的杂合性所致。从遗传学角度探讨了在自然条件下掘氏疫霉生物学性状的变异性以及某些分类依据不稳定的原因,指出有性生殖过程中的基因重组可能是引起掘氏疫霉生物学性状变异的主要原因之一。     

氯化锂、紫外线对金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)产金霉素特性的诱变作用

为了探明金霉素产生菌的遗传变异特性,改善其生产特性,研究氯化锂与紫外线对金霉素产生菌产金霉素性状的影响,发现经复合处理后该菌产金霉素的特征发生变异,共获得变异菌株114个,其中金霉素产量增加的菌株占62.28%,减少的占37.72%。并筛选到2个突变株55-44#、55-103#,其效价较出发菌株提高10%以上,且由菌株55-44#分离得到的菌株44-3#其高效价特性稳定,生产能力较出发菌株提高4%以上,应用在生产中大幅度的提高了生产能力与效益。     

纳米细菌的分离培养和保存方法探讨

目的 以钙化的胎盘组织为例,寻求在钙化组织中分离纳米细菌的最佳方法,以便更多疑似与纳米细菌感染有关的疾病得以准确分离出纳米细菌菌株,并探讨培养和保存纳米细菌的最适宜的条件.方法 (Ⅰ)胎盘钙化组织标本分别用盐酸脱矿与超声振荡脱矿的方法分离纳米细菌,计算其分离阳性率.(2)分离出的纳米细菌分别用细胞培养箱与细菌培养箱培养1个月,利用分光光度计记录两种条件下纳米细菌浓度的变化,并描绘生长曲线.(3)分别用4、- 20与- 80℃冰箱保存钙化组织和纳米细菌,记录纳米细菌分离和复苏的生长状况并绘制生长曲线.结果 (1)钙化组织用盐酸脱矿更易分离得到纳米细菌.(2)细胞与细菌培养环境下纳米细菌的生长速度并无明显差别.(3)4℃保存钙化组织和纳米细菌对于其分离和复苏都要优于- 20℃和- 80℃.结论 对钙化组织进行盐酸脱矿可以更好的分离出纳米细菌,并且可以在细菌培养箱内培养纳米细菌,新鲜钙化组织标本和纳米细菌可以短时间保存在4℃.     

~(60)Co-γ射线与NaN_3复合处理对珍汕97A的诱变效应

以珍汕 97A为材料 ,通过不同剂量的 6 0 Co- γ射线和 Na N3药剂对珍汕 97A进行复合处理 ,分析研究它们的诱变效应。结果表明 ,随着辐射剂量的增加 ,M1群体中的育性恢复突变率有所下降 ;而分离出不育株的 M2 株系占育性恢复突变 M1株系的比例逐渐增加 ;与珍汕97A相比 ,M2 分离出的不育株有的仅发生农艺性状的变异 ,有的则在不育性的表达和农艺性状上均发生变异 ;与珍汕 97B相比 ,育性恢复的 M2 群体部分农艺性状发生了多种变异 ,并在M2 群体中出现了无花粉型不育株及弯秆突变体。此外 ,还讨论了诱变技术对不育系的改良与创新的有关问题。     

生物危险(续完)

<正>三、病原微生物危险度的分级 具有不同程度危险的各种病原微生物,按其危险度进行分级,这对于研究和确定生物危险对策是很重要的。根据级别对各类微生物应采取的对策自然也不同。 危险度是根据病原微生物的种类及性质(致病力、抵抗力)、近年来的流行病学特点、有无有效的防治方法、人体免疫建立状态、以及对社会的影响(如对家畜家禽或实验     

寄生蠕虫标本的采集及保存方法

为了充实蠕虫的教材,标本的采集和保存,是一项十分重要的工作。蠕虫的种类很多,宿主的范围很广。有的标本可从宿主的各种排泄物内检查而得,有的标本需要做动物解剖或尸体剖验而得,也有的可用驱虫剂将寄生虫从宿主体内驱除出来。因此采集的对象不同,所用的方法也有分别。在各项处理过程中,都须要熟习一般的操作技术,在这里择要地叙述一些常用的方法,希望对从事于这种工作者有所帮助。     

天梯山石窟壁画保存环境中空气细菌的季节性变化

【背景】微生物侵蚀是古代壁画常见生物病害,影响壁画的长久保存和安全陈展。空气微生物作为壁画病害菌的主要来源,近年在文物赋存环境监测和预防性保护中引起广泛重视。【目的】对天梯山石窟壁画的2处保存地,即天梯山原址和武威西夏博物馆壁画保存环境中的空气细菌浓度、群落结构及其季节变化规律进行分析。【方法】利用生物气溶胶采样器,在2016年春、夏、秋、冬4季分别采集各位点空气样品;基于传统培养方法获得空气中细菌浓度及纯培养菌株;通过提取细菌基因组DNA、扩增其16S rRNA基因、测序和系统发生关系分析等技术研究不同位点细菌群落时空动态变化规律;结合环境监测数据,分析影响文化遗产地空气细菌群落变化的主要因素。【结果】空气可培养细菌的总浓度在16.7-1 451.8 CFU/m3范围内变动。原址第18窟和第13窟,各季节细菌浓度无显著性差异,且呈明显季节性变动规律,总体特征为夏秋季低,冬春季高。西夏博物馆外空气细菌浓度在各季节均高于库房内,冬季最高。本研究共鉴定出19个细菌属,隶属于4个门;其中不动杆菌属(Acinetobacter)、节杆菌属(Arthrobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、考克氏菌属(Kocuria)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、肉食杆菌属(Carnobacterium)、 Pseudoclavibacter和薄层菌属(Hymenobacter)为优势属。【结论】天梯山石窟空气细菌群落结构具有明显的时空分布特征;相对湿度、温度及季节性降水均会影响其变化;鉴定得到部分种属具备引起壁画生物腐蚀的潜势;本研究可为当地开展遗址和馆藏环境中文物预防性保护提供本底资料。     

微生物的保存方法(续一)

<正> (七)冷冻保存法 1.一般注意事项 (1)细胞外冻结与细胞内冻结 大多数微生物都适于冷冻保存。按冷冻的速度,细胞冻结状态分为二种。以一定的冷冻速度为界线,慢于此速度者,仅引起细胞周围外液冻结,而细胞本身并不冻结,这种冻结状态称为“细胞外冻结”。冷冻速度超过此界线者,细胞本身内部也将结冰,称为“细胞内冻结”。一般讲,细胞越大越容易引起细胞内冻结。 对冻结具有强抵抗力的细菌,能够耐受细胞外冻结,但对于大多数细胞,不论是细胞外冻结或是细胞内冻结都容易引起伤害。     

掘氏疫霉遗传学研究 Ⅰ.自交后代(S_1)生物学性状的遗传与变异

测定了掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker生长速率、菌落形态、菌体形态、产孢能力、耐35℃高温生长、致病力等生物学性状在自交S_1代的遗传与变异。2个掘氏疫霉野生型菌株(A_1、A_2各1株)经聚碳膜间隔配对诱导自交产生的卵孢子(保存110天左右)在S+L培养基上萌发,分别获得30和35个单卵孢株(萌发率10%左右)。测定结果表明,上述生物学性状在2个亲本自交后代均发生变异,部分单卵孢株生长速度减慢、菌落形态明显改变、孢子囊和菌丝畸形、产孢能力增强、在35℃中弱生长或不生长,或致病力减弱直至无致病力。在亲本的单游动孢子无性系后代未观察到上述变异,说明上述生物学性状变异主要因亲本遗传因子的杂合性所致。从遗传学角度探讨了在自然条件下掘氏疫霉生物学性状的变异性以及某些分类依据不稳定的原因,指出有性生殖过程中的基因重组可能是引起掘氏疫霉生物学性状变异的主要原因之一。     

微生物的保存方法(续三)

<正> 10.干燥 (1)冷凝器的冷却或干燥剂的准备 予冻结束后,立即转入减压干燥。此时,必须事先予冷冷凝器,以备收集冻结菌液的升华水分,例如采用图(一)所示的那种最简单的装置,双层简型冷凝器的内筒盛装乙醇或丙酮等有机溶媒,加足够量的干冰,则温度可降至大约-70～-80℃,升华水分则可凝结在夹层内的表面上。为保持冷凝器温度不升高,须及时添加干冰。最近有几家制造厂产销一种浸没式的挠性冷却棒,放入上述有机溶媒中,可使冷凝器降至-60～-100℃,而且无需中途补加,便于长时间运转。如有特殊用途,也可用液氮冷却冷凝器,但对于一般菌种保存,并无如此需要。     

在保存名录中应重视微生物的地位

濒危动物种类的DNA需要收集保存,代表着地球上大部分种系发生多种性的微生物也需要收集保存,尤其是由于环境退化而受到威胁的细菌.与濒危的植物或动物种类专性共生的微生物也可考虑为濒危物种.     

人工林刨花楠木材主要特性的径向变异及其对气象因子的响应

为了给刨花楠材质预测、轮伐期选择及木材合理高效利用提供理论基础,本研究以17年生刨花楠人工林为对象,采用木材性质快速测定仪(SilviScan-3^TM)获得木材性质参数,研究人工林刨花楠解剖特性、木材密度与弹性模量的径向变异规律及其对气象因子的响应,重点分析生长轮宽度、年龄与各材性性质参数之间的相关性.结果表明: 刨花楠不同材性性状的径向变异规律不同,7～11生长轮为其变异曲线的转折点;木材密度和纤维壁腔比与生长轮宽度的相关性不显著,生长速度和生长轮年龄对大部分材性性状具有重要影响;不同气象因子对不同材性性状影响程度不尽相同,相对湿度是影响刨花楠材性的主要生态因子;各材性性状中,微纤丝角和弹性模量对气象因子的响应更敏感.