山羊体外受精的研究

通过在山羊卵母细胞体外成熟培养液中添加不同的血清和不同浓度的卵泡液 ,在体外成熟培养液中培养不同的时间 ,以及采用不同的精子获能方法来摸索效率较高的体外受精方法体系。在山羊卵母细胞体外成熟培养液中添加FCS、EGS及不同浓度的卵泡液 ,成熟培养时间分别为 16、2 0、2 4和 2 7h ,山羊新鲜精液用钙离子载体法和肝素法进行获能处理后用于体外受精 ,比较其体外成熟率和体外受精率。添加FCS、EGS和 2 0 %卵泡液组的成熟率无显著差异 ,显著高于添加 10 %和 3 0 %卵泡液组的成熟率 ;但添加FCS和EGS组的受精率显著高于添加10 %、2 0 %、3 0 %卵泡液组的受精率。培养 2 4h组和 2 7h组的成熟率显著高于另外两组 ,而培养 2 7h组的受精率显著高于其余各组。用钙离子载体法处理的山羊精子的顶体反应率和体外受精率显著高于肝素法。EGS可以代替FCS添加于成熟培养液中 ,对COCs的成熟率和受精率没有明显的影响 ,但卵泡液不能完全代替FCS的作用。培养时间为 2 7h ,精子用钙离子载体法处理获能后能得到较高的体外受精率     

人脐静脉内皮细胞的原代培养和鉴定

目的：探索建立稳定有效的脐静脉内皮细胞体外培养方法。方法：用0．1％II型胶原酶消化分离人脐静脉肉皮细胞,加入含内皮细胞生长因子的M199完全培养液中培养,用胰蛋白酶-EDTA进行消化传代培养,用光镜和免疫组化方法对培养的细胞进行形态观察和鉴定。结果：原代培养的内皮细胞在接种后24h后完全贴壁生长,第445天后融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组化可见胞浆中第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应,证实培养的细胞为内皮细胞。结论：脐静脉灌注II型胶原酶消化法配合M199完全培养液可获得高纯度的内皮细胞,细胞可传代5—6次,但细胞产出量不高,不能传10代以上,5代以后细胞形态变化较大,对于复杂的基础研究应用受限。     

普通大气条件下的蚀斑试验

草鱼出血病病毒湖南邵阳株(CCHV—873),常规培养条件下能在鱼肾(CIK)细胞上形成直径约2mm的蚀斑。当采用三种缓冲系统(MFM-NaHCO_3、MEM-Tris、MEMHEPES)的培养液在普通大气条件下分别培养CIK细胞时,三天内培养液的pH略有变化,其变化范围在0.2—0.4左右,但细胞生长仍然良好,三者无明显差别。在上述系统,以双相法(培养液-凝胶)进行蚀斑试验时,观察到无机缓冲系统培养液的pH变化较大,有机缓冲系统则较稳定,且蚀斑形成的数量显著不同,后者效价比前者要高出4个数量级。因此,在培养液中加入适量的有机缓冲液代之以CO_2的调节是完全有可能的。     

地钱叶状体组织离体快速培养

地钱叶状体组织离体快速培养地钱是中学和大学植物类群的一个教学材料。为随时培养大量的实验材料,我们试用了琼脂培养基（用一般的完全培养液配制）,按组织培养程序培养和盆土内组织块离体培养的简易方法,快速培养都获得了成功。剪碎的地钱叶状体的组织块都能出芽并长...     

水分胁迫下抗旱树种相对含水量,SOD活性和膜透性的变化

云南干旱地区广泛用作薪炭林的抗旱树种香须（Albiziaocloratissima）、粉花山扁豆（Cassianodosa）、刺槐（Robiniapseudoacacia）和新银合欢（Leucaenaleucocephala）的种子，用温水浸泡催芽萌发后，浅埋于用完全培养液（华东师范大学植物生理教研组主编．植物生理学实验指导．人民教育出版社，1980．54）湿润的蛙石中，平恒温（25±1℃）培养，每天照光（40001X）／黑暗为10／14h。长出功能叶片后，将幼苗用完全培养液配制成浓度分别为O／、5／、Ic％、15％的聚乙H醇（PEG6000）在暗中作渗透胁迫（12h）处理（每种处理3个重复）．再…     

大鼠膝骨关节炎滑膜细胞原代培养

目的:建立原代培养膝骨关节炎大鼠滑膜细胞的方法。方法:取膝骨关节炎大鼠膝关节滑膜组织,用酶消化法消化、分离细胞,用DMEM培养液进行培养并传代,观察滑膜细胞生长状况、并用细胞形态学及细胞免疫化学鉴定。结果:用酶消化法培养膝骨关节炎滑膜细胞,方法简单、成功率高、细胞形态典型。结论:单一的胶原酶消化法是一种有效的滑膜细胞原代培养的方法,可以满足一般实验需求。     

PEG诱导人类细胞和元麦原生质体融合初步尝试

本实验尝试以PEG诱导Hela细胞与元麦原生质体融合进行了初步观察。 实验方法是将Hela细胞悬液250万/0.25 ml和元麦原生质体悬浮液500万/0.25 ml混合,然后加入0.125 ml PEG溶液(PEG 6,000分子量0.09M,CaCl_2·2 H_2O 10.5 mM,葡萄糖0.25 M,KH_2PO_4·7H_2O 0.7mM,pH 5.5)于37℃孵育30分钟,接着以RPMI-1640培养液洗掉PEG,离心收集细胞培养于小玻瓶中。实验分两组:一组细胞培养在Nagata培养液中,另一组培养在RPMI-1640培养液中。初步观察结果如下:     

内皮细胞条件培养液诱导单核细胞分化为内皮细胞的实验研究

目的研究ECV-304条件培养液诱导单核细胞分化为内皮细胞的可能性.方法贴壁法分离培养外周血单核细胞并进行鉴定.用购买的ECV-304细胞株制备条件培养液和M-CSF诱导单核细胞分化,观察细胞形态变化,收集细胞,用免疫组化与异植物血凝素结合试验鉴定.结果获得的单核细胞具有CD14阳性细胞占84.3%;刺激一周后的单核细胞形态发生改变并且Ⅷ因子、异植物血凝素结合试验阳性.结论 ECV-304条件培养液能诱导单核细胞分化为内皮细胞,提示内皮细胞来源的一条途径.     

粗根荨麻多糖对人脐血单核细胞源树突细胞表面分子表达的影响

研究粗根荨麻多糖在体外对人脐血单核细胞向树突细胞分化及成熟的作用。用淋巴细胞分离液分离脐血获得脐血单个核细胞,将获得的单核细胞分为3组,实验组:在含有粗根荨麻多糖(200 mg/L)的RPMI1640完全培养液中培养;阴性对照组:在无药物的RPMI1640完全培养液中培养;阳性对照组:在含有细胞因子(IL-4、GM-CSF、TNF-α)的RPMI1640完全培养液中培养;收集第10 d细胞用流式细胞术检测DCs成熟表型(CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR)。结果表明,与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组CD80、CD83、CD86、HLADR、CD1a的表达明显增加。粗根荨麻多糖可诱导脐血单核细胞分化成熟的DCs。     

兔肝细胞体外分离及培养方法的实验研究

目的：研究体外兔肝细胞分离及培养方法,比较不同培养基条件下兔肝细胞培养过程。方法：采用非灌注胶原酶消化法分离兔肝细胞,分别采用RPIM1640培养液（含10％新生牛血清）,DMEM培养液（含10％新生牛血清）,DMEM培养液（含10％胎牛血清）培养,计数法观察原代细胞增殖变化,MTF法观察传代细胞增殖情况。培养细膨采用PAS染色法鉴定,电镜观察细胞超微结构。结果：分离的肝细胞细胞活率大于85％;DMEM培养液（含10％胎牛血清）培养肝细胞生长状态较另两种培养液中的肝细胞强,DMEM培养液（含10％新生牛血清）中的细胞增殖能力较RPIM1640培养液（含10％新生牛血清）高,具有统计学意义。PAS染色和透射电镜观察培养细胞胞质中有大量糖原颗粒。结论：本实验采用的分离方法可获得较纯的肝细胞,而且操作简便实用。DMEM培养液较RPIM1640培养液更加适宜原代培养肝细胞生长,胎牛血清对培养肝细胞的生长促进作用明显高于新生牛血清。     

Cu2+对离体培养猪腺垂体细胞GH分泌的影响

目的：研究铜离子（Cu2＋）对离体培养猪腺垂体细胞生长激素（GH）分泌的影响。方法：试验选取32-35日龄仔猪腺垂体细胞,于10%小牛血清的Dulbecco MEM培养液（DMEM）中离体培养48 h。之后用含不同浓度Cu2＋（0 mg/L、0.025 mg/L、0.1 mg/L、0.4 mg/L、1.6 mg/L）的无小牛血清DMEM培养液培养36 h,于12 h、24 h、36 h收集细胞培养液,用Linco公司的试剂盒及放射免疫法测定培养液中GH浓度。结果：铜离子离体培养腺垂体细胞24 h,0.025 mg/L、0.1 mg/L、0.4 mg/L组培养液中GH浓度均高于0 mg/L组,其中0.1 mg/L组与0 mg/L组差异显著（P〈0.05）。结论：铜离子可促进离体培养猪腺垂体细胞分泌GH。     

马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液对正常大鼠脑内及培养的神经元内PLCβ1的影响

目的揭示星形胶质细胞对大鼠脑内及培养的神经元磷脂酶Cβ1(PLCβ1)的影响及其在癫痫发病中的作用。方法将马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液(astrocyte-conditioned medium,ACM)注射入正常SD大鼠侧脑室,观察大鼠的行为变化;运用免疫组织化学方法,观察大鼠大脑皮质、海马内PLCβ1免疫反应的变化;将培养的神经元随机分为2组:1.对照组(无血清培养基组),2.ACM组。各组细胞分别培养4、8、12h后,免疫细胞化学方法观察培养神经元内PLCβ1表达的变化,Western blot法检测各组培养神经元PLCβ1含量的变化。结果ACM组大鼠在注射ACM后30 min出现癫痫行为,2 h恢复正常;免疫组织化学显示:ACM作用后4h,大鼠大脑皮质、海马PLCβ1免疫反应阳性神经元数和平均光密度值显著增高(P<0.05);培养神经元的免疫细胞化学染色证明ACM组在作用4h时PLCβ1免疫阳性反应产物明显增加,与对照组比较有明显差异(P<0.05);Western blot结果表明PLCβ1含量在ACM作用4h较对照组明显增多(P<0.05)。结论马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液可上调大鼠脑内及培养的神经元内PLCβ1的表达,并导致动物痫性发作。     

缺血预处理大鼠脊髓匀浆培养液增强骨髓基质细胞存活、增殖和迁移能力

目的探讨缺血预处理大鼠脊髓匀浆培养液对骨髓基质细胞(bone narrow stromal cells,BMSCs)存活、增殖和迁移能力的影响。方法体外分离培养BMSCs,予以传代。正常脊髓匀浆培养液组(Normal组):将BMSCs置于正常大鼠脊髓匀浆培养液中培养;缺血再灌注损伤脊髓匀浆培养液组(IR组):将BMSCs置于缺血再灌注损伤大鼠脊髓匀浆培养液中培养;缺血预处理脊髓匀浆培养液组(IPC组):将BMSCs置于缺血预处理后缺血再灌注损伤脊髓匀浆培养液中培养。流式细胞仪检测各组BMSCs凋亡率,MTT法检测BMSCs增殖,Transwell小室检测BMSCs迁移能力。结果与Normal组比较,IR组的BMSCs凋亡率增高,增殖能力下降,迁移能力下降;与IR组比较,IPC组的BMSCs凋亡率降低,增殖能力和迁移能力增强。结论缺血预处理大鼠脊髓匀浆培养液增强骨髓基质细胞存活、增殖和迁移能力。     

变形虫垂滴培养观察片

在观察原生动物——变形虫时,所感到最烦心的是观察者还没有来得及找着或看清变形虫的形态和运动,水液装片就已将干尽了。尤其是初学的人还想描绘一个真实的图形,那就更觉得困难了。因此,必须设法改进培养和装片的方法,以期解决上述的问题。用半固体培养液垂滴装片观察变形虫的形态和运动,效果很好。这种培养观察片的制作方法很简单,介绍如下: 材料:1.变形虫纯培养液——用稻草浸液培养即可。 2.半固体培养液。适当浓度的稻草水——第500c.c.水加2—3克稻草水,煑沸半小时,浸半小时。半固体的程度——每100c.c.稻草水加0.2克洋     

枸杞子水提取物对Bel-7402人肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨枸杞水提取物对Bel-7402人肝癌细胞增殖的影响。方法:用RPMI-1640完全培养液温育Bel-7402人肝癌细胞,分为空白对照组和药物组,空白对照组给予培养液处理,药物组分为低剂量组(100μg/m L)和高剂量组(200μg/mL),实验过程加入相应剂量的枸杞子水提取物。于倒置显微镜下观察三组细胞形态学变化,采用流式细胞仪观察细胞的凋亡状况及活性氧簇(ROS)含量,采用MTT法检测细胞增殖的抑制作用,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bel-7402细胞中bax m RNA和bcl-2 m RNA的表达。结果:在倒置显微镜下观察,枸杞子水提取物使Bel-7402细胞生长受到抑制,表现为细胞贴壁减少、脱落增加,脱落的细胞浮悬于培养液中,呈圆形,体积缩小。枸杞子水提取物可促进Bel-7402细胞凋亡,药物组Bel-7402细胞的凋亡率比空白对照组明显增加(P0.01),G0/G1期细胞比率减少(P0.05),G2/M2期细胞比率增加(P0.05),且ROS含量增加(P0.05)。枸杞子水提取物对Bel-7402细胞的生长有明显抑制作用,且抑制率随着培养时间的延长而增加,且高剂量组在96小时时抑制率最高。药物组Bel-7402细胞中bax基因灰度比值显著高于空白对照组(P0.01),bcl-2基因灰度比值显著低于空白对照组(P0.01)。结论:枸杞子水提取物可抑制Bel-7402人肝癌细胞的增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡,增加ROS含量,促进bax基因表达,抑制bcl-2基因表达,该实验结果可为枸杞子抗肝癌作用提供实验依据。     

原代培养骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:观察高脂负荷在胰岛素抵抗形成中的意义.方法:用不同浓度椋榈酸、胰岛素分别培养骨骼肌细胞2h、6h、12h、24h,对棕榈酸诱导组的一部分细胞给予1× 10-7M胰岛素刺激2h,用血糖检测试剂盒(GOD-POD)检测各组培养液中的葡萄糖含量,研究不同浓度棕榈酸、胰岛素对骨骼肌细胞摄取葡萄糖的影响,观察胰岛素的生理功效的变化.结果:0.6mM棕榈酸诱导12h以上或者5×101-M胰岛素诱导24h后,培养液中的葡萄糖浓度比正常组高且有显著性差异,表明细胞的糖代谢能力降低.经1×10-7M胰岛素刺激2h后的棕榈酸诱导组,培养液中葡萄糖的浓度与未经胰岛素刺激的棕榈酸诱导组相比无显著差异,胰岛素的生理功效降低,证实棕榈酸诱导组细胞已对胰岛素产生耐受.结论:高脂或高胰岛素条件均可诱导原代骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型.     

内生真菌培养液对东北红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响

产紫杉醇的内生真菌(Fusarium mairei)先培养在B5液体培养基中, 然后制备成内生真菌培养液。在东北红豆杉(Taxus cuspidata)细胞悬浮培养的不同阶段(5、10和15天), 用不同剂量的内生真菌培养液(2、4和6 mL)分别进行处理。结果表明,在用4 mL内生真菌培养液处理的植物细胞中可获得最高的紫杉醇产量(5.88 mg.L-1)与释放率(67%), 分别是对照的1.9 倍与5.6 倍。添加时间方面, 在植物细胞培养周期的第5天添加4 mL内生真菌培养液, 可获得最佳效果, 紫杉醇产量与释放率分别为6.1 mg.L-1与75%, 分别是对照的2倍与6.8倍。与其它诱导子相比, 4 mL内生真菌培养液不仅可提高紫杉醇的释放率, 而且不会引起东北红豆杉细胞膜的明显伤害, 说明内生真菌发酵液激活了紫杉醇主动运输过程中的相关酶类。     

小鼠肝脏树突状细胞前体分离培养及影响其成熟因素的初步探讨

本次首次建立了从小鼠肝脏分离、培养、扩增肝树突状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌ,ＨＤＣ）前体的方法。采用经门静脉插管胶原酶二步循环灌流法及Ｐｅｒｃｏｌ不连续密度梯度离心法分离非肝细胞,得到含ＨＤＣ前体组分,将其分三组培养：第一组加入重组小鼠粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ＭｒＧＭＣＳＦ）,待培养９天后,将细胞转移至鼠尾胶原上继续培养。第二组加入ＭｒＧＭＣＳＦ培养,但细胞不转移。第三组为对照组,仅加完全培养液。结果显示：第一、二组细胞于培养４天可见有许多细胞集落形成,第一组细胞转移至鼠尾胶原上培养１天后,细胞集落减少,而培养液中ＤＣ密度明显增加,光镜和扫描、透射电镜观察证明培养ＨＤＣ纯度达９５％,第二组则无上述细胞释放现象。实验结果提示,ＨＤＣ前体在体外受细胞因子刺激能大量扩增,但必须在胶原存在下才能分化成熟     

罗格列酮对胰岛素抵抗人肝细胞Angpil3和LXRα基因表达的影响

研究罗格列酮对胰岛素抵抗人肝L02细胞Angptl3基因及与脂代谢相关的LXRα基因的影响.采用高胰岛素诱导法建立胰岛素抵抗模型(IR-L02),分别加入含有和不含罗格列酮的不同葡萄糖浓度培养液培养,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD法)检测培养液残存葡萄糖量,并用RT-PCR方法检测基因Angptl3、LXRα mRNA表达水平的变化.结果表明相同葡萄糖浓度下罗格列酮作用组(IR-R组)的培养液残存葡萄糖量比无罗格列酮作用组(IR组)减少;IR-R组的Angptl3、LXRα mRNA表达水平较IR组显著升高(P<0.05).     

食用真菌发酵液SOD检测

目的检测食用真菌培养液中是否含有SOD（超氧化物歧化酶）,及经长期保存后的SOD酶活性。方法选取3株实验室保存的食用真菌,经液体培养后,长期保存于液体培养基中2年,用邻苯三酚法检测各培养液的SOD酶活性。结果3种培养液中SOD酶活性均为阳性。结论SOD存在于食用菌培养液中,且经长期保存仍有很强的SOD酶活性。