棉铃虫c-Jun氨基末端激酶基因的克隆、表达谱及对UV-A胁迫的响应

【目的】本研究旨在克隆棉铃虫Helicoverpa armigera c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)基因,并对其进行序列和表达模式分析,探讨该基因在棉铃虫生长发育及响应UV胁迫方面的作用。【方法】利用RT-PCR与RACE技术克隆棉铃虫JNK基因,并利用生物信息学方法对其编码的氨基酸序列进行分析;采用实时荧光定量PCR技术检测其在棉铃虫不同发育阶段(卵、1-6龄幼虫、蛹、雌雄成虫)、成虫不同组织(去除触角和复眼的头、胸、腹、触角、复眼、足、翅、中肠、卵巢)中及雌成虫在UV-A照射不同时间(0, 30, 60, 90, 120和150 min)下的相对表达量变化。【结果】克隆获得一个棉铃虫JNK基因并命名为HaJNK(GenBank登录号:MH719009),其cDNA序列全长为2 431 bp,开放阅读框(ORF)长1 191 bp,编码396个氨基酸,编码蛋白质的相对分子量为45.01 kD,等电点为6.35,无跨膜结构,无信号肽。系统进化分析显示,棉铃虫HaJNK与其他昆虫JNK具有很高的同源性。发育阶段表达分析表明,HaJNK在棉铃虫卵期表达量最高;组织特异性分析显示该基因在成虫复眼、胸部及卵巢部位特异性表达。UV-A照射能诱导棉铃虫雌成虫体内HaJNK的表达,随着照射时间的延长,其表达量呈现先升高后降低的趋势,在照射60 min时表达量达到峰值。【结论】HaJNK在棉铃虫不同龄期、成虫不同组织和UV-A照射不同时间的雌成虫中差异表达,提示其在响应UV-A胁迫的分子机制中具有重要意义。     

脑缺血Akt 和MAPK 磷酸酶负性调节c-Jun N 端激酶信号通路

目的:探讨脑缺血再灌后Akt和MAPK磷酸酶与JNK活性下调的关系。方法:采用成年清洁级雄性SD大鼠,建立四动脉阻断前脑缺血再灌注模型。缺血10min后再灌注不同时间(15min,1h,4h,24h)。侧脑室分别给予PI3K抑制剂LY294002(LY)和MAPK磷酸酶抑制剂放线菌酮(CHO)。免疫印迹观察p-Akt和p-JNK蛋白水平变化。结果:脑缺血再灌注4h,JNK的活性能被Akt抑制剂LY294002增强,表明激活的Akt能够下调JNK信号通路。而MAPK磷酸酶抑制剂放线菌酮能上调缺血后JNK活性,提示MAPK磷酸酶通过去磷酸化参与了JNK的活性抑制。结论:前脑缺血再灌后,激活Akt和MAPK磷酸酶参与了JNK信号通路负性调节,是抑制JNK诱导缺血后中枢神经损伤的重要机制。     

脑缺血Akt和MAPK磷酸酶负性调节c-Jun N端激酶信号通路

目的：探讨脑缺血再灌后Akt和MAPK磷酸酶与JNK活性下调的关系。方法：采用成年清洁级雄性SD大鼠,建立四动脉阻断前脑缺血再灌注模型。缺血10min后再灌注不同时间（15min,1h,4h,24h）。侧脑室分别给予P13K抑制剂LY294002（LY）和MAPK磷酸酶抑制剂放线菌酮（CHO）。免疫印迹观察P-Akt和P-JNK蛋白水平变化。结果：脑缺血再灌注4h,JNK的活性能被Akt抑制剂LY294002增强,表明激活的Akt能够下调JNK信号通路。而MAPK磷酸酶抑制剂放线茵酮能上调缺血后JNK活性,提示MAPK磷酸酶通过去磷酸化参与了JNK的活性抑制。结论：前脑缺血再灌后,激活Akt和MAPK磷酸酶参与了JNK信号通路负性调节,是抑制JNK诱导缺血后中枢神经损伤的重要机制。     

氨基末端磁性载体固定化中性蛋白酶的研究

以氨基末端磁微粒为载体,用戊二醛作交联剂,通过共价交联结合法固定化AS1.398中性蛋白酶.可以制备出活力达45 000 U/g磁性固定化酶.探讨了该载体对中性蛋白酶的最适固定化条件,并对磁性固定化酶的热稳定性,储存稳定性、操作稳定性等进行了研究,确定了此载体对酶的固载能力大于200 mg/g（载体）,及固定化磁性酶最适pH为7.5, 最适温度为60℃等催化特性.     

内源性蛋白酶对人脑己糖激酶N-末端序列水解作用的研究

在人脑己糖激酶Ｎ－末端设计和构建两个突变体,Ｔｙｒ－１０→Ｌｅｕ和Ｐｈｅ－１１→Ｌｅｕ,在大肠杆菌中表达,并且分离纯化,通过对这两个突变体Ｎ－末端起始氨基酸的分析结果显示,它们均失去Ｎ－末端序列,酶切位点类似于糜蛋白酶,     

从癌性腹水中分离Ⅲ型前胶原氨基末端肽

采用(NH₄)₂SO₄沉淀,二次不同pH的DEAE-Sephacel离子交换柱层析及Sephacryl S-200分子筛柱层析从人癌性腹水中分离并纯化了PⅢP,并制备了抗血清。经SDS-PAGE鉴定为均一蛋白带,分子量约为47kD。经西德药盒测定,与西德、芬兰PⅢP抑制曲线平行关系良好。氨基酸组成测定亦与文献报道基本一致。抗血清效价较高,特异性强。本研究在方法学上有一定创新,提纯方法简便易行。     

Nogo-A氨基末端：通过特异整合素机制抑制细胞黏附及轴突生长

成年哺乳动物的中枢神经系统（CNS）受损后,解剖学上的修复水平非常有限。因神经纤维再生明显受阻,往往造成神经损伤后永久性的功能缺陷。在成年CNS抑制轴突生长的因子中,有一类是髓磷脂蛋白（myelin）,而Nogo是这类蛋白中的一种,由少突神经胶质细胞产生,抑制轴突的生长。通过不同的启动子和差别剪接,nogo基因会产生三种主要的转录产物Nogo-A、-B和-C。     

长双歧杆菌N-乙酰氨基己糖1-位激酶的活性位点

【目的】研究长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JCM1217的N-乙酰氨基己糖1-位激酶(Nacetylhexosamine 1-kinase,Nah K)中对催化活性有影响的位点。【方法】利用点突变试剂盒,获得Nah K的4个位点的共10种单点突变体表达菌株。诱导表达并纯化野生型和突变体酶,用DNS法和NADH偶联的微孔板分光光度法检测野生型及突变体酶的最适p H和最适Mg~(2+)浓度,并测定酶促反应动力学参数。【结果】D208A、D208N、D208E和I24A四种突变体的催化活性几乎丧失。突变体H31A、H31V、F247A和I24V的最适p H由野生型的7.5变为7.0,突变体H31A和F247A的最适Mg~(2+)浓度由野生型的5 mmol/L变为10 mmol/L。反应动力学参数测定结果表明,突变体F247Y对底物Glc NAc/Gal NAc及ATP的催化活性均高于野生型。【结论】通过定点突变,确定了对Nah K催化活性有影响的4个位点,并且获得了一个催化效率提高的突变体(F247Y),为进一步对Nah K进行分子改造奠定了一定基础。     

纳豆激酶

纳豆激酶 (ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ)是一种枯草杆菌蛋白激酶 ,是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ/ｎａｔｔｏ)产生的一种丝氨酸蛋白酶。 1 987年由日本的须见洋行等首先发现[1～ 3] 。研究发现 ,纳豆激酶具有纤溶活性 ,可治疗和预防血栓病 ,它还可激活体内的纤溶酶原 ,从而增加内源性纤溶酶的量与作用[4] 。目前常用的及一些还在开发的治疗心脑血管栓塞疾病的药品 ,如链激酶 (ｓｔｒｅｐ ｔｏｋｉｎａｓｅ ,ＳＫ)、尿激酶 (ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ,ＵＫ)、重组组织型纤溶酶原激活剂 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ…     

小儿法洛四联症根治术后氨基末端脑钠肽前体水平变化及其临床意义分析

目的：探讨小儿法洛四联症根治术后血浆氨基末端脑钠肽前体（N—terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP）水平变化及其临床意义。方法：选择我院2011年10月～2013年4月收治的法洛四联症患儿52例,所有患儿行法洛四联症根治术治疗,并于术前、术后3h、12h、48h、1周、1个月和3个月测定患儿血浆NT-proBNP水平,应用心脏彩超机检查肺动脉跨瓣压差、右室舒张末期容积（rightventricularend．diastolicvolume,RVEDV）、左室射血分数（Leftventricular ejection fraction,LVEF）和右心Tei指数（Teiindex）。结果：①术后3hNT—proBNP水平开始逐渐升高,术后48h达最高,明显高于术前水平（P〈0．01）,术后1个月、3个月明显低于治疗前水平（P〈0．05）。②术后1周,右心功能不全组血浆NT．proBNP水平、肺动脉跨瓣压差、RVEDV明显高于右心功能正常组,LVEF明显低于右心功能正常组（P〈0．05）。③术后3个月,重度返流组、中度返流组患儿术后48h、1周、3个月血浆NT—proBNP明显高于轻度返流组（P〈0．05）;重度返流组患儿术后1周、3个月血浆NT—proBNP明显高于轻度返流组（P〈0．05）。结论：NT．proBNP在小儿法洛四联症根治术后早期的变化水平与右心功能的变化一致,可以作为评估右心功能的客观指标。     

用杆状病毒-昆虫细胞系统表达、纯化重组的人源化氨基末端LBP

根据已有的资料显示LBP与LPS的结合位点位于其氨基末端的第 91～ 1 0 0个氨基酸残基。在体外构建含有人LBP与LPS结合活性部分的穿梭质粒pBacmidtLBP ,并且带上 6×his的标签 ,用此穿梭质粒转染sf2 1昆虫细胞 ,获得重组病毒。然后用重组病毒液感染对数生长期的sf2 1昆虫细胞 ,72h后收获含有这种截断型人源化氨基末端LBP-(NH-LBP)的培养上清。用金属亲和树脂纯化后 ,采用SDS-PAGE电泳以及Western-Blot鉴定所得到的纯化物。成功获得相对分子质量约为 30 0 0 0的NH-LBP。为进一步研究LBP在介导LPS活化靶细胞中的作用机制奠定了基础。     

c-Jun/激活蛋白-1活性调节研究进展

转录因子激活蛋白-1(AP-1)对细胞增殖、细胞存活与细胞凋亡等重要生理过程具有调控作用,其核心组成成分是c-Jun.c-Jun活性从转录调控、翻译后调控（主要是磷酸化调节）和相互作用蛋白质调节等三个水平受到正负向调控.其分子内8个位点可被JNK1、GSK3、CKII、Abl等激酶磷酸化.通过N端的转录激活结构域和C端的碱性亮氨酸拉链区,c-Jun可与bZIP类转录因子、辅助激活因子和其他一些蛋白质直接相互作用而被调控.另外一些分子可通过CBP、JAB1等重要辅助激活因子的介导间接调控AP-1的活性,共同构成AP-1活性调节的复杂网络.     

末端蛋白质组学研究进展

蛋白质是一类重要的生物大分子,参与生物体的各种生命活动。蛋白质组学研究主要致力于从整体水平上对一个生物体包含的所有蛋白质进行定性和定量分析。蛋白质的末端参与众多的生物学过程,与蛋白质的转运、定位、凋亡和降解等有密切联系。因此,详细研究末端蛋白质组学将有助于揭示相关的生物学机制,是蛋白质组学研究的重点之一。本文就蛋白质末端的修饰、功能、研究方法及应用前景进行简要综述。     

绝经后骨质疏松患者血清I型胶原氨基末端、I型胶原羧基末端及骨钙素的表达变化及临床意义

摘要 目的：探讨绝经后骨质疏松患者血清I型胶原氨基末端（NTx）、I型胶原羧基末端（CTX）及骨钙素（BGP）的表达变化及临床意义。方法：选取我院2017年8月-2022年8月收治的60例绝经后骨质疏松患者作为研究对象,将其分为观察组,另选取同期来我院体检的60名绝经后健康志愿者作为对照组。对比两组患者NTx、CTX、BGP表达水平,并建立受试者特征工作（ROC）曲线分析NTx、CTX、BGP对绝经后骨质疏松的诊断效能。3个月后对所有患者进行门诊复查随访,将症状明显明显减轻,X线检查明显改善,骨密度值明显增加的35例绝经后骨质疏松患者分为预后良好组,将其余25例未达到上述标准的患者分为预后不良组,对比两组患者临床一般情况,并应用Logistic回归分析NTx、CTX、BGP对绝经后骨质疏松的预后预测价值。结果：两组受检者NTx、CTX、BGP表达水平对比差异显著,观察组NTx、CTX高于对照组,BGP低于对照组（P＜0.05）; NTx、CTX、BGP三者联合对绝经后骨质疏松的诊断效能优于单一检测（P＜0.05）;预后良好组与预后不良组患者年龄、BMI、合并基础疾病、病程、Ca表达水平对比无明显差异（P＞0.05）,预后良好组与预后不良组患者病情严重程度、骨密度T值、雌二醇、血清NTx、CTX、BGP表达水平对比差异显著（P＜0.05）;logistic回归分析结果表明：CTX、BGP为绝经后骨质疏松的预后不良的独立影响因素（P＜0.05）。结论：绝经后骨质疏松患者血清I型胶原氨基末端、I型胶原羧基末端表达水平高于非骨质疏松群体,骨钙素低于非骨质疏松群体,三者联合可提升绝经后骨质疏松的诊断效能。另外,CTX、BGP作为绝经后骨质疏松的预后不良的独立影响因素,CTX水平越高、BGP水平越低可能预示患者预后不良,因此临床需针对此类患者及时改良治疗措施,提升其预后水平。     

粘着斑激酶

粘着斑激酶（ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ,ＦＡＫ）是蛋白酪氨酸激酶,属于非受体蛋白酪氨酸激酶,分布在细胞粘着斑部位。ＦＡＫ位于神经肽,整合素和癌基因作用的聚合点,可发生酪氨酸磷酸化,它参与调节细胞发育,生长,存活,凋亡,粘附,骨架重组,转化,扩散和迁延等过程。     

植物蛋白激酶研究进展

蛋白激酶是一类磷酸转移酶,其在细胞信号转导过程中起到较为重要作用.目前,在不同植物中分离了各种蛋白激酶基因.相关研究报道表明,这一类蛋白酶基因参与了植物的抗逆性、生长发育以及信号转导等一系列生命活动进程.着重从植物蛋白激酶分类、结构及其功能研究几个方面进行综述.     

精氨酸激酶研究进展

能量代谢是生物体重要的生命活动之一。精氨酸激酶广泛分布于低等与高等无脊椎动物中,现已经在直翅目、蜚蠊目、鞘翅目、鳞翅目、双翅目、膜翅目等多种昆虫中得到证实,是无脊椎动物中能量代谢的重要酶之一。随着研究的深入,精氨酸激酶的应用前景逐渐显现。对无脊椎动物体内精氨酸激酶的理化性质、表达规律及应用前景等方面的研究进展进行了综述,并提出了一些建议,以期为精氨酸激酶今后的研究做铺垫。