嵌合抗原受体T细胞免疫疗法治疗B细胞淋巴瘤的研究进展

B细胞淋巴瘤(B cell lymphoma)因其异质性,患者极易复发,因此成为肿瘤治疗的难题之一。嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T)免疫疗法有良好的治疗效果且具精准、快速和高效的特点,成为最具前景的治疗癌症的方法之一。目前,CAR-T免疫疗法在治疗B细胞淋巴瘤上得以成功的应用,同时,FDA已批准相关产品应用于治疗B细胞淋巴瘤,一定程度上弥补了常规治疗B细胞淋巴瘤的方法。现就CAR-T免疫疗法的发展历程、主要靶点及其策略研究作一概述,为治疗B细胞淋巴瘤提供可参考的思路。     

细胞治疗的典范：嵌合抗原受体T细胞疗法

嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法是一种利用合成受体特异性靶向抗原的过继性细胞疗法(ACT),目前在血液肿瘤的治疗中有极大的临床应用价值。虽然美国食品药品监督管理局(FDA)已经批准两款CAR-T药物上市,但CAR-T疗法在治疗过程中仍然存在一些副作用,如细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性、B细胞功能缺失等。同时,CAR-T疗法在实体瘤治疗中的效果甚微,主要原因是缺乏特异性靶点以及肿瘤微环境对CAR-T细胞功能的抑制等。文中将从CAR的结构设计、临床应用、合成生物学对新型CAR的优化来阐述应用CAR-T细胞疗法治疗肿瘤所面临的挑战及广阔前景。     

嵌合抗原受体T细胞治疗血液肿瘤的研究进展

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy,CAR-T)是近年来迅速发展的肿瘤过继免疫治疗方法,其胞外段抗体以非主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)方式与相应的肿瘤相关抗原结合识别后,使T细胞活化而发挥抗肿瘤效应。CAR-T在血液疾病治疗中取得较好的效果,现就CAR的结构、CAR-T治疗的靶点、出现的不良反应及采取的相应策略等作一概述。     

嵌合抗原受体T细胞治疗的现状与展望

肿瘤严重威胁着人类健康,当前肿瘤传统的治疗方法有手术治疗、化疗、放疗和靶向药物治疗等。近年来,肿瘤免疫治疗,尤其是嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR） T细胞免疫疗法在基础研究与临床应用中蓬勃发展,并在治疗血液系统恶性肿瘤方面取得了巨大成功。然而,大量研究显示,细胞免疫治疗后可出现不同程度的毒副反应,且部分患者缓解后再次复发。因此,了解细胞治疗面临的挑战与局限性,寻找解决的办法,对继续发挥细胞免疫疗法的潜能具有重要意义。本文就免疫细胞的CAR结构、病毒载体的选择、细胞治疗面临的挑战及前景进行综述。     

嵌合抗原受体T细胞介绍及抗肿瘤临床应用

过继性细胞免疫治疗（adoptive cellular immunotherapy,ACI）是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方法之一。随着技术的日趋成熟,已在多种实体瘤和血液肿瘤的t临床治疗中取得较好疗效。其中,嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）T细胞技术是近年来发展非常迅速的一种细胞治疗技术。通过基因改造技术,效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性均较常规应用的免疫细胞高,并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态。目前,CAR的信号域已从第一代的单一信号分子发展为包含CD28、4—1BB等共刺激分子的多信号结构域（第二、三代）,临床应用广泛。但是,该技术也存在脱靶效应、插入突变等临床应用风险。该文将就CAR—T细胞技术在恶性肿瘤免疫治疗中的应用及可能存在的问题作一综述。     

定点突变优化信号肽对嵌合抗原受体T细胞功能的影响

信号肽(signal peptide, SP)参与调节嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)结构的分泌水平及跨膜易位过程,对嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)行使功能至关重要,本研究通过定点突变技术优化SP序列,并研究其对CD19-CAR-T杀伤功能的影响。首先,利用基因合成和分子克隆技术,构建含野生型SP (SP-wtY)、2种突变型SP (SP-muK或SP-muR)的靶向CD19的CAR载体;对构建成功的载体进行慢病毒包装,并使用慢病毒侵染T细胞,利用流式细胞术检测细胞的转染效率,钙黄绿素释放法检测对靶细胞的体外杀瘤能力,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)技术检测2种细胞因子[干扰素-γ (interferon-γ, IFN-γ)和干扰素-α (interferon-α, TNF-α)]的分泌水平。结果显示,构建了野生型和信号肽突变的重组慢病毒质粒,慢病毒转导T细胞后,携带3种信号肽(SP-wtY、SP-muK或SP-muR)的CD19-CAR转染效率分别为33.9%、35.5%、36.8%。进一步杀伤实验显示,与SP-muK和SP-wtY细胞相比,SP-muR细胞的肿瘤杀伤效果显著提高,当效靶比为10:1时共培养24 h后,SP-muR组CAR-T细胞的细胞因子IFN-γ和TNF-α分泌水平显著高于SP-muK和SP-wtY组。本研究揭示信号肽N端正电荷数的增加可以提高CAR的表达效率和对CD19⁺靶细胞的杀伤作用,为CAR结构的优化改造和临床高效应用提供了科学依据。     

嵌合抗原受体修饰的T细胞治疗急性白血病的研究进展

嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)治疗是过继免疫治疗的一种,通常CAR-T细胞是由患者或供者的T细胞经CAR基因转化并扩增而来,最后再回输到患者体内.CAR-T在治疗B细胞恶性肿瘤中展现出了振奋人心的效果,目前也被用于治疗其他血液肿瘤的研究中.本文就CAR的基本结构、CAR结构的演变、在急性白血病治疗中的进展以及目前CAR-T设计新方案4个方面进行叙述.     

嵌合抗原受体修饰T 细胞免疫治疗肿瘤的研究进展

以嵌合抗原受体修饰T细胞(chimeric antigen receptor modified-T lymphocytes,CAR-T)为基础的过继细胞免疫治疗近年来成为治疗恶性肿瘤的一种新模式。CAR-T细胞赋予T细胞靶向杀伤活性,并可克服肿瘤免疫抑制和打破宿主免疫耐受。尽管目前CAR-T的临床应用还存在诸如脱靶效应、细胞因子风暴、插入突变和移植物抗宿主病样损伤等许多问题,但我们相信随着对CAR-T细胞的深入研究及推广应用将会大幅度提高肿瘤的临床治疗效果。本文就CAR-T细胞应用于肿瘤免疫治疗的前生、今世和将来作一综述。     

B细胞免疫球蛋白与T细胞抗原受体基因的B细胞免疫球蛋白与T细胞抗原受体基因的种系结构及其体细胞重排（续)

T细胞受体基因 以”’：标记的抗原测试‘I细胞,发现T细胞能与 杭原结合,存放射7i }i性很高时被杀灭,余下的’T细饱就 不再能结合此种抗原。这提示I'细胞也具有抗原受 体,日了j一少乞隆多样性。但对’FCR的木质多年未捉摸不 定,推测也是一种Ig样分r,故称之为I g':I或Igx} 1983年同时有儿个实脸室制备了与TCR反应的克隆 特异性杭f水。1981年以来相继克降了’I'CR基因的 u.F3}丫基叫族,测定了它们的部分核仆酸顺序。结果提 示'1 'C R从川的种系结构一｝一分类似于Ig从因族,也司 样通过休细胞重1I卜产生之泞N基囚,二者同属于Ig超从 ｝’;｛族（、;uperl;ene lamily)^[11]     

B细胞免疫球蛋白与T细胞抗原受体基因的种系结构及其体细胞重排

免疫现象的第一步是免疫活性细胞对抗原的识 别。脊椎动物和人体有两类免疫活性细胞与抗原发生 特异性结合反应：B淋巴细胞表面的抗原受体与可溶 性抗原反应,T淋巴细胞表面的抗原受体与细胞表面 抗原反应。这些受体分子的基本结构单位是类似的异 型二聚体（heterodimer) ; B细胞抗原受体（B cell rece ptor, BCR）由轻链（L）和重链(H)构成,T细胞抗原 受体（T cell receptor, TCR）由,链和0链构成。抗原 分子多种多样。一个抗原分子还往往会有一个以上的 表位（e pi tope）或称抗原决定基（antigenic determinant) 均应有与它互补的对位（paratope）即抗原受体可与它 发生特异性结合反应。一个脊推动物或人体的B细胞 和T细胞必需而且事实上具备极为丰富的抗原受体贮 备库。在抗原刺激下,带有特异性抗原受体的B细胞 或T细胞发生克隆扩增（clonal multiplication),每个克 险只具有一种抗原结合特异性。这里有两个矛盾。一 个是淋巴细胞基因组内基因有限,与为如此众多受体 蛋白质分子编码需要大量遗传信息之间的矛盾;另一 个是淋巴细胞基因组的全能性与一个成熟淋巴细胞只 表现一种抗原受体特异性之间的矛盾。探究这些矛盾 的奥秘是近三十年来免疫遗传学中一个吸引人而又使 人烦恼的课题。     

嵌合抗原受体基因修饰的T细胞治疗复发或难治性急性白血病的临床疗效及可行性

经过几十年的医学发展,急性白血病的治疗手段有了很大的改善,但是复发率依然维持在一个高的水平;而面对复发这种局面,治疗的方案主要包括二次异基因造血干细胞移植和供者淋巴细胞输注(DLI)这两种治疗方式,主要是调控移植物抗白血病效应,但是治疗效果有限.DLI总的缓解率仅是15%~42%;两年总生存期是15%~20%,而且伴有DLI相关的毒副作用,如移植物抗宿主病.因此,发展新的靶向治疗策略治疗复发或难治性白血病迫在眉睫.嵌合抗原受体基因修饰的T细胞治疗白血病成为一种很有前景的治疗方法,被基因修饰过的T细胞具备识别肿瘤相关抗原的能力,而且可以突破传统治疗的限制.本文通过对当前嵌合抗原受体基因修饰的T细胞治疗的理解,讨论其相关的有效性及毒副作用.     

嵌合抗原受体（CAR）-T细胞的单细胞转录组测序研究

CAR-T细胞疗法是一种新兴的肿瘤免疫疗法,目前已经在白血病、骨髓瘤等血液系统肿瘤的治疗中取得显著疗效。由于CAR-T细胞是在体外诱导产生的细胞群体,具有很高的异质性。这种异质性的存在,是影响CAR-T细胞治疗效果的重要因素。本研究通过单细胞转录组测序技术,对基于NKG2D分子识别和第3代CAR-T细胞技术构建的NKG2D/CAR-T细胞进行了转录组学特征的分析。结果表明,通过对比特征基因进行降维聚类,将NKG2D/CAR-T细胞分为12个细胞簇,其特征基因显示NKG2D/CAR-T细胞以幼稚样和中央记忆样细胞亚群为主。不同细胞簇表达基因存在差异,对差异基因进行富集分析发现,这些差异基因富集在病毒侵入细胞、插入宿主细胞DNA并复制、T细胞代谢、增殖、活化及分化等信号通路。     

靶向人源BCMA的嵌合抗原受体T细胞构建及体外抗肿瘤活性研究

摘要 目的：通过对CAR结构的ScFv单链可变区进行改造,构建并筛选具有更强杀伤肿瘤细胞功能的新型靶向人源B细胞成熟抗原（BCMA）的嵌合抗原受体 (CAR)-T细胞。方法：构建靶向人源BCMA的CAR分子,用逆转录病毒载体包装成功后转导健康志愿者的T细胞,制备Anti-BCMA-CAR-T细胞。将Anti-BCMA-CAR-T细胞作为观察组,普通T细胞作为对照组,将其与RPMI-8226细胞共培养,采用CFSE染色的T细胞增殖实验观察两组体外增殖能力。采用荧光素酶化学发光实验检测两组细胞在不同效靶比（1:8、1:4、1:2、1:1、2:1、4:1）对RPMI-8226细胞的杀伤效率,采用流式细胞术检测两组细胞在不同效靶比（1:4、1:2、1:1、2:1、4:1）对RPMI-8226细胞的杀伤效率。结果：CFSE检测结果显示,与对照组比较,观察组FITC信号明显左移,表明T细胞增殖能力越强。流式细胞术检测结果显示,相同效靶比时,观察组对RPMI-8226细胞的杀伤效率均高于对照组（P均<0.05）;荧光素酶化学发光实验结果显示,相同效靶比时,观察组对RPMI-8226细胞的杀伤效率均高于对照组（P均<0.05）。在效靶比为4:1时,CAR170-T（未经改造的传统的ScFv）细胞和CAR174-T（经改造的ScFv）细胞的杀伤效率分别达到了88.5±0.3 %和98.5±0.7 %。结论：通过对CAR结构的ScFv单链可变区进行改造后成功构建出的新型靶向BCMA的CAR-T细胞,它能保持较强的增殖活性且具有更强的杀伤肿瘤细胞的能力。     

Epstein-Barr病毒相关T/NK细胞淋巴瘤与B细胞淋巴瘤的临床分析

Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是可导致人类感染的淋巴滤泡病毒,感染非常普遍。本研究通过对2013年1月-2016年12月于复旦大学附属华东医院就诊并确诊为淋巴瘤且伴有EBV感染的49例患者的临床资料进行回顾性分析,探讨EBV相关淋巴瘤患者的临床特点及生存情况。结果显示,49例EBV相关淋巴瘤患者中,18例为B细胞淋巴瘤,31例为T/NK细胞淋巴瘤。EBV相关B细胞淋巴瘤与T/NK细胞淋巴瘤患者之间白细胞、血小板、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、铁蛋白、纤维蛋白原、红细胞沉降率、C反应蛋白的差异有统计学意义(P<0.05)。中位随访5.0个月,49例患者的1个月、6个月、1年、3年生存率分别为 84.4%、59.8%、53.2%、40.3%。结果表明,与EBV相关B细胞淋巴瘤患者相比,EBV相关T/NK细胞淋巴瘤患者的肝功能损伤严重,更易合并噬血细胞综合征,生存期更短,但生存期差异无统计学意义。     

T细胞抗原受体的结构与功能研究进展

T细胞抗原受体(T ceIl receptor,TCR)是T细胞表面关键的受体分子。TCR特异性地识别各种多肽抗原并通过胞内区ITAM磷酸化传递抗原刺激信号,进而引发T细胞的免疫效应。TCR的活性异常将会导致自身免疫病和免疫缺陷病的发生。对于TCR结构和功能的深入研究有助于我们更好地理解免疫反应的分子机理,从而为相关免疫疾病的预防和治疗提供重要的理论依据。该文对TCR的分类、基因重排机制、受体组装方式及其结构基础、TCR对抗原的识别以及活化机制等方面的研究成果进行了总结,综述了近几年来的最新研究进展。     

长效抑制TIM-3表达增强ROR1嵌合抗原受体修饰的T细胞的抗肿瘤免疫应答

该文探讨了T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3,TIM-3)基因沉默对靶向ROR1的嵌合抗原受体(ROR1-CAR)修饰的T细胞增殖和抗肿瘤免疫应答的影响及其作用机制。通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)基因沉默技术长效抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达,采用qRT-PCR和Western blot实验检测TIM-3在mRNA和蛋白水平的表达情况;采用ELISA实验验证TIM-3基因沉默的ROR1-CAR T细胞对靶细胞的杀伤能力的影响;流式细胞检测进一步评估抑制TIM-3表达对ROR1-CAR T细胞的靶向杀伤和抗原依赖性的增殖能力的影响。结果显示,shRNA可显著抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达,但不影响ROR1-CAR T细胞的百分比和增殖活性;通过检测发现ROR1阳性的人结肠癌细胞系SW620分泌高水平的TIM-3配体—半乳凝素9(Galectin-9),该配体可直接作用于ROR1-CAR T细胞而发挥免疫负调控...     

γ,δ链T细胞抗原受体的基因结构及其生物学作用

TCR有αβ或γδ两种异二聚体形式,使T细胞可分为TCR1(γδ)和TCR2(αβ)两种类型。TCR1T细胞特异识别MHC-I类抗原,在监视上皮细胞以及TCR2T细胞的分化过程中有重要作用。     

B细胞免疫球蛋白与T细胞抗原受体基因的种系结构及其体细胞重排(续)

T细胞受体基因 以~(125)Ⅰ标记的抗原测试T细胞,发现T细胞能与抗原结合,在放射活性很高时被杀灭,余下的T细胞就不再能结合此种抗原。这提示T细胞也具有抗原受体,且有克隆多样性。但对TCR的本质多年来捉摸不定,推测也是一种Ig样分子,故称之为IgT或Igx。1983年同时有几个实验室制备了与TCR反应的克隆特异性抗体。1984年以来相继克隆了TCR基因的