孕激素诱导cyclin G1在小鼠子宫内膜上皮细胞的表达及其对细胞增殖的影响

本文在体外培养条件下研究卵巢激素诱导小鼠子宫内膜上皮细胞cyclin G1的表达及细胞增殖和细胞周期进程的变化,以探讨孕激素依赖的细胞周期调控因子cyclin G1对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用.原代培养小鼠子宫内膜上皮细胞,待其生长汇合后分为4组:对照组(C组)、雌激素组(E组)、孕激素组(P组)、雌、孕激素共同作用组(EP组).加入相应激素作用24 h后,用细胞免疫化学方法检测各组细胞cyclin G1的表达水平:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力,间接观察子宫内膜上皮细胞的增殖情况;用流式细胞仪检测分布在细胞周期各时相的子宫内膜上皮细胞所占百分数.细胞免疫化学结果显示,cyclin G1在C组和E组子宫内膜上皮细胞上无明显表达,而在P组和EP组子宫内膜上皮细胞中表达明显,且定位于细胞核内.MTT法结果显示,与C组相比,E组细胞活力明显增高,而P组和EP组的细胞活力均明显下降,表明雌激素能促进子宫内膜上皮细胞增殖,而孕激素则具有抑制子宫内膜上皮细胞增殖的作用.流式细胞术检测显示,与C组相比,E组中处于S期的子宫内膜上皮细胞百分数增多;P组与EP组中处于S期的子宫内膜上皮细胞百分数明显减少,而处于G1期的细胞百分数和G2/M期的细胞百分数则明显增加.上述结果提示,孕激素依赖的cyclin G1可能通过阻滞细胞周期进程来参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用.     

SF-1诱导小鼠子宫内膜基质细胞增殖及其机制的研究

该研究分离并鉴定了原代小鼠子宫内膜基质细胞(mouse endometrial stromal cell,m ESC)。过表达类固醇生成因子-1(steroidogenic factor-1,SF-1)可显著诱导该细胞的增殖能力、促进增殖相关基因PCNA(proliferating cell nuclear antigen)及PH3(phospho-histone 3)的蛋白质水平表达增高以及激活PI3K-AKT-m TOR信号通路;PI3K信号通路抑制剂LY294002和m TOR信号通路抑制剂Rapamycin等可抑制mESC中SF-1过表达所引起p AKT S473、pm TOR S2448、pp70S6K T389、p S6 S235/236和p4E-BP1 T37/46的蛋白质水平的增高。该研究初步揭示了SF-1表达与mESC增殖的相关性。     

microRNA-125b 抑制结肠癌细胞增殖的研究

目的:探究在多种肿瘤中均发挥重要调节作用的miR-125b对结肠癌细胞增殖的影响。方法:采用miR-125b过表达的结肠癌细胞系HCT116,在细胞水平验证miR-125b对细胞增殖能力的影响。采用皮下注射的方式,建立裸鼠结肠癌皮下移植瘤模型,以研究miR-125b对结肠癌体内增殖的影响。在临床样本组织中检测miR-125b的表达以佐证miR-125b功能。结果:在体外MTT实验中,miR-125b能够抑制结肠癌细胞系HCT116的增殖(P0.001)。在体内模型中,注射过表达miR-125b mimics的HCT116细胞所形成的肿瘤与对照组相比,生长速度缓慢,肿瘤大小亦明显低于对照组(P0.05)。在临床样本中对比癌组织与癌旁正常组织中miR-125b的表达量,发现miR-125b在癌旁组织中表达明显高于癌组织。结论:miR-125b能够抑制结肠癌细胞的增殖。     

microRNA-378i抑制横纹肌肉瘤细胞增殖和迁移

该文主要研究了microRNA-378i(miR-378i)在人横纹肌肉瘤细胞中的表达水平及其对细胞增殖和迁移能力的影响。通过q RT-PCR(quantitative RT-PCR)法检测在横纹肌组织和横纹肌肉瘤细胞中miR-378i成熟体的水平。采用阳离子脂质体介导的方法将miR-378i成熟体转染入横纹肌肉瘤细胞,通过MTS法检测细胞增殖能力、细胞克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力、流式细胞技术检测细胞周期,以及应用x CELLigence细胞功能分析仪检测细胞迁移能力。Western blot方法检测miR-378i对靶基因蛋白质水平的调控。结果显示,在横纹肌肉瘤细胞中,miR-378i成熟体的水平较正常横纹肌组织显著下调。恢复miR-378i的表达水平能显著抑制横纹肌肉瘤细胞的增殖、细胞克隆形成和迁移能力,并诱导细胞发生G1或G2期阻滞。Western blot结果显示,miR-378i能够下调IGF1Rβ的蛋白质水平。综上所述,miR-378i能够显著抑制横纹肌肉瘤细胞的增殖和迁移。     

白藜芦醇苷通过抑制microRNA-21表达抑制肝癌细胞增殖和迁移

原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,目前仍在寻找有效的治疗手段. 白藜芦醇苷可抑制肺癌细胞以及大肠癌细胞的增殖,但其在肝癌中的作用及具体作用机制并不清楚. 本文探讨白藜芦醇苷对大鼠肝癌是否具有预防作用,及其对肝癌细胞系增殖和侵袭的影响. 构建大鼠原发性肝癌模型,将其分为正常组、模型组及白藜芦醇苷预防组. 病理检测结果显示,与模型组相比,白藜芦醇苷预防组的肝癌发生率明显降低.检测肝组织中microRNA-21表达情况,结果显示,白藜芦醇苷预防组肝中microRNA-21表达明显降低,并且microRNA-21的靶基因PTEN表达上调.在肝癌细胞系SMMC7721和HepG2中加入白藜芦醇苷,细胞增殖及侵袭能力明显下降,同时伴随microRNA-21表达降低,PTEN表达升高. 这提示,白藜芦醇苷可能通过抑制microRNA-21的表达,抑制肝癌的发生,本文结果为预防原发性肝癌提供了新的理论依据,但其临床疗效还需要进一步验证.     

Pten基因沉默可抑制子宫内膜细胞增殖

本研究将Pten-siRNA转染至子宫内膜细胞,通过蛋白免疫印迹检测子宫内膜细胞中Pten蛋白的表达情况;通过MTT法检测Pten-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)细胞增殖状态;通过蛋白免疫印迹检测Pten-siRNA转染组和对照组子宫内膜细胞中PCNA、Ki67蛋白表达情况;通过流式细胞仪检测子宫内膜细胞Pten-siRNA转染组和对照组中ROS的水平,以探究Pten基因对子宫内膜癌发生发展的影响。研究表明,Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中Pten蛋白明显低于对照组;Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞增殖率显著高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,细胞增殖相关蛋白PCNA和Ki67明显高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中ROS水平明显低于对照组(p<0.05)。本研究初步结论显示Pten-siRNA可降低子宫内膜细胞中Pten蛋白表达,抑制子宫内膜细胞的增殖并增加子宫内膜细胞中ROS水平。     

诱导子宫内膜异位症患者子宫内膜上皮细胞调亡研究

目的:研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHα)对子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜蛋白表达的影响,为EMs的治疗提供依据。方法:94例EMs患者随机分为两组,每组47例,均实施腹腔镜手术治疗,对照组未给予药物治疗,观察组给予曲普瑞林皮下注射,28日/次,注射3次,术中及治疗三个月后观察组分别用取内膜器取少量子宫内膜组织标本,采用免疫组化法法、TUNEL染色法和Western blot检测组织内Bcl-2、Caspase3、GRP78等表达情况,并观察治疗效果。结果:治疗后观察组疼痛视觉模拟评分(VAS)为(2.13±0.69)分,低于对照组的(2.62±0.71)分(P0.05);观察组1年内妊娠率及总妊娠率分别为38.30%、51.06%,均高于对照组的19.15%、29.79%(P0.05);治疗后观察组Bcl-2、Caspase3表达量分别为(1.54±0.28)、(3.20±0.65),均高于对照组的(1.38±0.15)、(1.24±0.27)(P0.05);治疗后观察组GRP78表达量为(0.46±0.17),低于对照组的(0.61±0.24)(P0.05)。结论:GnRHα可缓解EMs患者下腹痛、痛经、性交痛等症状,提高妊娠率,其机制可能与GnRHα调控上皮细胞Bcl-2、Caspase3、GRP78等的表达有关。     

microRNA-10a/b通过抑制Mib1调节斑马鱼神经元的发育

该文研究了microRNA-10(miR-10)家族miR-10a/b在斑马鱼胚胎发育时期神经管的表达及其对神经元发育的影响。通过斑马鱼胚胎整体原位杂交及Taq Man PCR技术分析研究miR-10a/b在斑马鱼胚胎期神经管的表达情况。利用吗啡啉(morpholino,Mo)修饰的反义寡核苷酸敲低技术建立miR-10a/b下调的斑马鱼模型,研究miR-10a/b下调后神经元发育异常的表型,并分析鉴定miR-10调控神经元发育的下游靶点。结果发现,受精后24 h(24 hours post fertilization,24 hpf)和48 hpf,miR-10a和miR-10b在斑马鱼神经管中高表达;miR-10a/b-Mo下调miR-10a/b的表达后,背神经管中神经元数量明显变少;下调Mib1(mindbomb E3 ubiquitin protein ligase 1)能挽救miR-10下调引起的神经元表型异常;miR-10a/b下调后胚胎神经管中Mib1表达显著上调。上述结果表明,miR-10a/b通过抑制Mib1的表达来影响斑马鱼神经元的发育。     

miR-26a抑制转化生长因子β诱导的韧带成纤维细胞增殖

目的:研究miR-26a对转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的韧带成纤维细胞增殖的影响。方法:原代分离大鼠肩周韧带成纤维细胞,通过免疫荧光鉴定细胞纯度,应用脂质体细胞转染miRNA模拟物的方式过表达miR-26a,定量PCR的方法检测miR-26a模拟物的过表达效率,CCK8法检测细胞增殖能力的变化,生物信息学预测的方法分析miR-26a可能的作用靶基因。结果:免疫荧光检测发现原代分离细胞中,Vimentin阳性细胞在90%以上;转染miR-26a模拟物后,细胞内miR-26a水平显著高于阴性对照组(P0.05);TGF-β刺激明显促进韧带成纤维细胞生长(P0.01),而miR-26a则对TGF-β诱导的韧带成纤维细胞增殖具有显著的抑制作用(P0.01);生物信息学预测显示SMAD1/4、EIF4G2、PTEN和MARK1可能是miR-26a影响细胞增殖的作用靶基因。结论:miR-26a可抑制TGF-β诱导的韧带成纤维细胞增殖。     

miR-26a抑制转化生长因子beta诱导的韧带成纤维细胞增殖

目的:研究miR-26a对转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的韧带成纤维细胞增殖的影响。方法:原代分离大鼠肩周韧带成纤维细胞,通过免疫荧光鉴定细胞纯度,应用脂质体细胞转染miRNA模拟物的方式过表达miR-26a,定量PCR的方法检测miR-26a模拟物的过表达效率,CCK8法检测细胞增殖能力的变化,生物信息学预测的方法分析miR-26a可能的作用靶基因。结果:免疫荧光检测发现原代分离细胞中,Vimentin阳性细胞在90%以上;转染miR-26a模拟物后,细胞内miR-26a水平显著高于阴性对照组(P<0.05);TGF-β刺激明显促进韧带成纤维细胞生长(P<0.01),而miR-26a则对TGF-β诱导的韧带成纤维细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.01);生物信息学预测显示SMAD1/4、EIF4G2、PTEN和MARK1可能是miR-26a影响细胞增殖的作用靶基因。结论:miR-26a可抑制TGF-β诱导的韧带成纤维细胞增殖。     

C-myc对子宫内膜细胞增殖和凋亡的影响

为了通过子宫内膜细胞实验检测原癌基因C-myc对子宫内膜癌发生发展的影响,本研究用蛋白免疫印迹法分别检测C-myc转染组和空白对照组中C-myc蛋白的表达情况;细胞计数盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞活力;蛋白免疫印迹法分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白Bax以及Bcl-2的变化;Annexin/PI流式分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞凋亡率的变化。C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞中C-myc蛋白表达明显高于空白对照组;C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞活力显著低于空载体转染组(p0.05),Ki67蛋白的表达明显高于空载体转染组(p0.05);C-myc转染子宫内膜细胞后,促凋亡相关蛋白Bax的的表达显著高于空载体转染组(p0.05)以及抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显低于空载体转染组(p0.05);C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞凋亡率明显高于空载体转染组(p0.05)。本研究表明,C-myc能够促进子宫内膜细胞增殖并诱导细胞凋亡,子宫内膜细胞的增殖过度和凋亡失衡在子宫内膜癌的发生发展中具有重要意义。     

小鼠子宫内膜LIF基因表达与雌、孕激素的关系

白血病抑制因子（LIF）是一种多功能活性的糖蛋白,LIF基因在大多数妊娠第4天的小鼠子宫内膜进行着强烈的表达,然而LIF基因表达调控的机制目前尚不清楚。本实验对168只妊娠第4~5天的小鼠LIF基因表达和血清中雌、孕激素水平分别进行了检测,发现18只小鼠无LIF基因表达,其血清中雌、孕激素水平分别极显著（P＜0.01）和显著（0.01＜P＜0.05）低于其他表达的小鼠。提示：雌、孕激素对小鼠LIF基因表达过程中起着一定的作用,将为LIF基因表达调控机制的深入研究打下基础。     

雌激素和孕激素对不同发情方式小鼠子宫内膜中孕激素受体分布的影响

目的探讨雌（Estrogen,E2）、孕激素（Progesterone,P4）对同期发情与自然发情小鼠子宫内膜中孕激素受体（Progesterone receptor,PR）分布的影响。方法45只同日龄雌鼠,根据处理方式的不同随机分为5组：自然发情组（对照组）、同期发情组、卵巢摘除组、P4处理组和E2处理组,5组小鼠在见栓后第4、6、8天分别取样后,采用免疫组织化学法观察小鼠子宫内膜中PR的分布变化情况。结果免疫组织化学染色结果显示,5个处理组小鼠子宫内膜的三种细胞中都有PR存在;同期发情组小鼠子宫内膜中三种类型细胞PR的表达与自然发情组差异有显著性（P〈0.05）;P4处理组小鼠子宫内膜中三种类型细胞PR的表达在见栓第4、6天显著低于卵巢摘除组（P〈0.05）;E2处理组小鼠子宫内膜腺上皮和间质中PR在第4、6、8天时都显著高于卵巢摘除组（P〈0.05）,而在腔上皮中则显著低于卵巢摘除组（P〈0.05）。结论同期发情处理与自然发情小鼠的子宫内膜上PR的分布,都受E2和P4的特异诱导而变化。     

雌、孕激素对牛子宫内膜上皮细胞αvβ3体外诱导差异表达的影响

目的 研究体外培养的牛子宫上皮细胞内整合素αvβ3基因诱导差异表达的变化,以期为探究牛子宫容受态的标志蛋白提供参考。方法 运用RT-PCR方法分析不同浓度雌激素、孕激素以及雌、孕激素协同作用对牛子宫内膜上皮细胞中整合素αvβ3的诱导表达变化情况。结果 单独添加孕激素10~(-7)mg/mL时,整合素αvβ3表达量均最高,10~(-7)mg/mL组内αv和β3的表达量均显著高于对照组(P0.05)。单独添加雌激素10~(-10)mg/mL组,αv的表达量最高,而β3的表达量最低。协同添加雌、孕激素组中,整合素αvβ3的表达量均高于对照组,其中αv的表达量显著高于对照组(P0.05);β3的表达量与对照组相比差异不显著(P0.05)。结论 单独添加孕激素和协同使用雌、孕激素时,均可以促进牛子宫内膜上皮细胞中整合素αvβ3的mRNA表达量上升;单独添加雌激素的作用则与之相反。由此,整合素αvβ3在“种植窗”期的牛子宫内膜上皮中可作为一个潜在的子宫容受态参考标志基因。     

人子宫内膜上皮膜内颗粒的菱形排列

利用冰冻断裂技术,我们发现在人子宫内膜上皮的膜内颗粒有时呈菱形排列。形态上,它与出现在此上皮的典型间隙连接不同。由于人子宫内膜的菱形颗粒排列具有 1.在E断裂面见不到由浅窝组成的相称菱形排列及 2.接近菱形颗粒排列的细胞间隙缩小不一致等特征,它们可能为非典型的间隙连接。因为菱形颗粒排列既可单独存在也可与间隙连接结合,我们认为它们可能是间隙连接的前身,具有促使间隙连接增加数量及面积的功能。     

MicroRNA-146a抑制胶质瘤细胞增殖的研究

目的:检测胶质瘤中miR-146a的表达水平,并研究miR-146a对胶质瘤细胞增殖的影响。方法:应用实时定量PCR的方法检测胶质瘤组织和癌旁组织中miR-146a的表达水平,采用脂质体细胞转染miRNA模拟物的方式过表达miR-146a,MTT法检测转染后细胞的增殖率,利用在线软件targetScan预测miRNA可能的靶基因。结果:miR-146a在胶质瘤组织中表达明显降低(P<0.01),相对表达水平为癌旁组织的35%,细胞转染miR-146a模拟物后,miR-146a表达明显增加,癌细胞增殖率明显降低(P<0.01),仅为原细胞的47%。Notch1基因是miR-146a影响胶质瘤细胞增殖活力的可能靶基因。结论:miR-146a可能通过抑制Notch1基因的表达调控胶质瘤细胞的增殖。     

MicroRNA-146a抑制胶质瘤细胞增殖的研究

目的：检测胶质瘤中miR-146a的表达水平,并研究miR-146a对胶质瘤细胞增殖的影响。方法：应用实时定量PCR的方法检测胶质瘤组织和癌旁组织中miR-146a的表达水平,采用脂质体细胞转染miRNA模拟物的方式过表达miR-146a,MTT法检测转染后细胞的增殖率,利用在线软件targetScan预测miRNA可能的靶基因。结果：miR-146a在胶质瘤组织中表达明显降低（P〈0.01）,相对表达水平为癌旁组织的35%,细胞转染miR-146a模拟物后,miR-146a表达明显增加,癌细胞增殖率明显降低（P〈0.01）,仅为原细胞的47%。Notch1基因是miR-146a影响胶质瘤细胞增殖活力的可能靶基因。结论：miR-146a可能通过抑制Notch1基因的表达调控胶质瘤细胞的增殖。     

幽门螺杆菌感染诱导microRNA-146a表达的机制研究

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染引起人胃上皮细胞microRNA-146a(miR-146a)上调的分子机制。方法:分别用H.pylori重组蛋白、全菌蛋白、培养上清、感染相关炎性因子(IL-8、TNF-α、IL-1β)以及TLR配体刺激人胃上皮细胞,检测细胞miR-146a的表达;通过生物信息学软件预测和荧光素酶实验鉴定miR-146a启动子,分析诱导表达的相关信号通路。结果:除H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够明显诱导miR-146a表达上调(P<0.01)外,其他刺激因素均不能诱导miR-146a的显著表达;当采用RNAi技术将IL-8、TNF-α、IL-1β分别沉默,检测H.pylori诱导miR-146a表达时,各沉默组与对照组均无显著差异。软件预测显示miR-146a启动子序列中含有多个NF-κB结合位点;H.pylori能够显著增加miR-146a启动子荧光素酶报告载体的相对荧光素酶值;当启动子序列中的NF-κB结合位点发生突变,其相对荧光素酶比值显著降低(P<0.05)。结论:H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够诱导miR-146a表达明显上调;NF-κB信号通路在H.pylori感染诱导miR-146a的表达中发挥关键作用。     

幽门螺杆菌感染诱导microRNA-146a表达的机制研究

目的：探讨幽门螺杆菌（H.pylori）感染引起人胃上皮细胞microRNA-146a（miR-146a）上调的分子机制。方法：分别用H.pylori重组蛋白、全菌蛋白、培养上清、感染相关炎性因子（IL-8、TNF-α、IL-1β）以及TLR配体刺激人胃上皮细胞,检测细胞miR-146a的表达;通过生物信息学软件预测和荧光素酶实验鉴定miR-146a启动子,分析诱导表达的相关信号通路。结果：除H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够明显诱导miR-146a表达上调（P〈0.01）外,其他刺激因素均不能诱导miR-146a的显著表达;当采用RNAi技术将IL-8、TNF-α、IL-1β分别沉默,检测H.pylori诱导miR-146a表达时,各沉默组与对照组均无显著差异。软件预测显示miR-146a启动子序列中含有多个NF-κB结合位点;H.pylori能够显著增加miR-146a启动子荧光素酶报告载体的相对荧光素酶值;当启动子序列中的NF-κB结合位点发生突变,其相对荧光素酶比值显著降低（P〈0.05）。结论：H.pylori感染相关炎性因子IL-8、TNF-α、IL-1β能够诱导miR-146a表达明显上调;NF-κB信号通路在H.pylori感染诱导miR-146a的表达中发挥关键作用。     

miR-448通过抑制上皮间质转化抑制肺癌细胞增殖和运动能力

探讨mi R-448对肺癌细胞增殖和运动的影响及其分子机制。采用实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction)检测原发肺癌组织和癌旁正常组织mi R-448表达水平。转染mi R-448 mimic和inhibitor至肺癌A549细胞系,通过MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)、平板克隆形成和Transwell实验观察mi R-448表达对A549增殖和运动能力的影响;利用Western blot检测EMT(epithelial-mesenchymal transition)标志物蛋白表达水平,通过实时荧光定量PCR检测EMT相关转录因子m RNA表达水平。实时荧光定量PCR显示较癌旁正常组织相比,mi R-448在原发肺癌组织中表达降低。MTT和平板克隆形成实验显示,过表达mi R-448抑制A549细胞增殖和运动能力;降表达mi R-448增强A549细胞增殖和运动能力。Western blot显示降表达mi R-448能下调上皮标志物E-cadherin,上调间质标志物Vimentin表达水平。实时荧光定量PCR显示降表达mi R-448能上调EMT相关转录因子Twist1和ZEB1 m RNA表达水平。mi R-448可通过抑制EMT抑制肺癌进展。