磷脂酰胆碱特异性和磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C酶学性质及其在油脂脱胶中的应用

通过基因工程方法将具有磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)特异性磷脂酶C(PC-PLC)和磷脂酰肌醇(PI)特异性磷脂酶C(PI-PLC)基因分别在枯草芽孢杆菌WB800中进行胞外表达。对2种重组蛋白粗酶的酶学性质进行研究,并探究其用于油脂脱胶中的效果。结果表明:PC-PLC和PI-PLC均在30～45℃和中性偏酸的条件下具有较好的稳定性,2 h后残余活性仍在60%以上。Zn~(2+)、Mg~(2+)对PC-PLC的活性有促进作用,而Ca~(2+)对PI-PLC的活性有促进作用。油脂脱胶研究结果表明,PC-PLC的最适脱胶条件为50℃、pH 6.0、反应2 h、酶添加量为80 mg/kg;PI-PLC的最适脱胶条件为45℃、pH 7.0、反应2 h、酶添加量为60 mg/kg。PC-PLC和PI-PLC联合脱胶实验中大豆毛油中磷含量从531 mg/kg降至4.1 mg/kg,此时甘油二酯(DAG)含量增加0.95%。     

甘油二酯激活蛋白激酶C

钙依赖性蛋白激酶分为两类:一类与调钙素结合就激活,如肌球蛋白轻链激酶;另一类为蛋白激酶C,它分布很广,由磷脂酰丝氨酸及其他脂类激活。在细胞外信号刺激一定的受体后,膜的含肌醇的脂质短时分解产生甘油二酯(DG),它能在未激动的细胞内钙浓度下激活蛋白激酶C。DG 还能提高蛋白激酶C 对Ca~(2 )的敏感性。在有DG 时,当游离钙在10~(-7)mol 上下时,蛋白激酶C 就被激活。没有DG,即使有磷脂     

老化红细胞肌醇磷脂代谢的探讨

本文用密度梯度离心法,将红细胞分成年轻及老化两部分,分别测定了膜磷脂、甘油二酯及磷酸肌醇的含量,蛋白激酶C在膜内及胞浆内的分布及其对膜蛋白的磷酸化。实验结果表明老化及年轻红细胞磷脂含量,除磷脂酰胆碱明显降低外,其他均无差异。老化红细胞甘油二酯含量低于(P<0.01)年轻者,而磷酸肌醇两者含量相似。老化红细胞膜内蛋白激酶C活性远比年轻者高,而在胞浆内活性则相反。说明老化红细胞膜蛋白激酶C活性增高,可使红细胞膜蛋白4.1、4.2、4.5和4.9进行磷酸化,这些膜蛋白与维持红细胞形态及功能有关,可能它们的磷酸化是老化红细胞变形性降低,脆性增加的因素之一。     

磷脂酰肌醇系激素的作用机理

以cAMP作为“第二信使”的激素简称CAMP系激素。激素的作用与磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)代谢循环密切相关。以cGMP、Ca~(2 )为“第二信使”的激素简称为PI系激素。PI系激素有独特的作用方式,存在DG-C激酶系、Ca~(2 )-CDR系和cGMP-G激酶系三种传递机理,具有调节各种细胞机能的作用。两类膜受体激素的作用互相拮抗,互相制约,有可能以磷脂酰丝氨酸为交接点互相沟通。     

原肌球蛋白相关激酶B在肿瘤中的研究进展

原肌球蛋白相关激酶B(tropomyosin-related kinase B,TrkB)是一种神经营养性酪氨酸受体激酶,通过介导丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)、磷脂酶C-γ(phospholipase C-γ,PLC-γ)、磷脂酰肌醇3-激酶(pho...     

山茛菪碱对磷脂糖服混合脂质体多形性的影响

本文采用冰冻断裂电子显微镜技术研究了山茛菪碱对单葡萄糖甘油二酯与心磷脂或磷脂酰甘油混合脂质体多形性影响。山茛菪碱可促进单葡萄糖甘油二酯与心磷脂或磷脂酰甘油混合脂质体在25℃时形成脂质颗粒,当温度为55℃时山茛菪碱对上述混合脂质体形成脂质颗粒更为明显。     

山茛菪碱对磷脂糖服混合脂质体多形性的影响

本文采用冰冻断裂电子显微镜技术研究了山茛菪碱对单葡萄糖甘油二酯与心磷脂或磷脂酰甘油混合脂质体多形性影响。山茛菪碱可促进单葡萄糖甘油二酯与心磷脂或磷脂酰甘油混合脂质体在25℃时形成脂质颗粒,当温度为55℃时山茛菪碱对上述混合脂质体形成脂质颗粒更为明显。     

磷脂酰肌醇 -3 激酶不直接调控PC12 细胞的分泌

磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)是磷脂酰肌醇代谢过程中一种重要的酶,通过其代谢产物参与了对多种细胞生理活动的调节,如囊泡运输、细胞骨架重组、细胞存活、吞噬作用、细胞凋亡等.为研究其对细胞分泌功能的作用,使用磷脂酰肌醇-3激酶家族的特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)阻断磷脂酰肌醇-3激酶的活性,以EGFP-2xFYVE融合蛋白与磷脂酰肌醇-3-磷酸(PtdIns-3-P)的结合为指征,使用荧光显微成像技术检测渥曼青霉素对磷脂酰肌醇-3激酶的抑制作用,采用膜片钳膜电容测量方法及光解钙离子释放技术检测渥曼青霉素对PC12细胞分泌功能的影响.实验结果表明,wortmannin阻断了磷脂酰肌醇-3激酶的活性,抑制了磷脂酰肌醇-3-磷酸(PtdIns-3-P)的产生,并使FYVE与PtdIns-3-P解离,但渥曼青霉素处理之前和处理30 min后的PC12细胞分泌反应的幅度、动力学特性和分泌的钙依赖性均无显著差异,表明磷脂酰肌醇-3激酶对PC12细胞的分泌无显著的直接影响.     

吗啡及第二信使对鼠脑细胞膜蛋白质磷酸化的调节

 本文研究了几种蛋白激酶活化剂及吗啡对脑细胞膜蛋白质磷酸化的调节。cAMP刺激了一种68KDa蛋白质和几种60KDa相关的蛋白质的磷酸化作用,Ca~(++)刺激68KDa和50KDa蛋白质的磷酸化。μ吗啡受体的特异性兴奋剂D-脑啡肽(DAGO)增加68KDa蛋白质的磷酸化,而吗啡K受体的特异性兴奋剂,Bremazocyne抑制这一蛋白质的磷酸化。蛋白激酶c的特异性活化剂——磷脂酰丝氨酸(PS)和甘油二油酸酯(DO)不促进这一磷酸化。相反,却抑制cAMP、Ca~(++)、和DAGO所刺激的68KDa蛋白质的磷酸化。结果表明,在鼠脑细胞膜存在一种68KDa专一的蛋白激酶,其活性受吗啡及几种细胞内信使分子,如cAMP、Ca~(++)和DO的调节。     

具有谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌固定化细胞

本文研究了用海藻酸钙包埋法制备含谷氨酸脱羧酶固定化细胞的方法以及研究了制备的条件和影响其制备的因素。该法具有包埋细胞活力回收高,方法简便等优点。比较研究了固定化细胞和自然细胞谷氨酸脱羧酶的一些生物化学性质。其中固定化细胞最适pH和pH稳定性增加,最适温度及热稳定性下降;表观米氏常数增大;二价金属离子Zn~(++)、Cu~(++)、Mg~(++)、Fe~(++),Sr~(++)程度不同的抑制酶活性,Ca~(++)激活固定化细胞酶活性,EDTA无抑制作用。对固定化细胞和自然细胞酶活力活化的研究中发现这两种细胞经蒸馏水保温处理后酶活性都上升,且自然细胞酶活的上升较固定化细胞大;而用底物溶液处理后,自然细胞无变化,固定化细胞酶活下降。     

甘蔗叶片细胞器的Mg~(++)-ATP酶和Ca~(++)-ATP酶活性(简报)

在伸长盛期的甘蔗+1叶(最高可见肥厚带叶)的叶绿体、线粒体和细胞溶质中能普遍测出Mg~(++)-ATP酶和Ca~(++)-ATP酶活性。早熟高糖半产品种细胞溶质中的Mg~(++)-ATP酶和Ca~(++)-ATP酶活性都比较高。     

一个新发现的第二信使——肌醇磷脂

环核苷酸作为由细胞膜向细胞内传递信息的第二信使已为人们所熟知。最近又发现了一个新的第二信使——肌醇磷脂(inositol phospholipids),这一研究正在迅速开展。肌醇磷脂是存在于细胞膜上的多种磷脂之一,由甘油磷脂与肌醇结合而成。在肌醇磷脂激酶和ATP的作用下,在肌醇的第4、5位上磷酸化,成为4,5二磷酸肌醇磷脂(phosphoinositol 4,5-diphosphate,PIP_2),这是第二信使的前体。当细胞膜上某些受体(如脑内的乙酰胆碱受体,肾上腺皮质细胞上的血管紧张素受体,血小板上的ADP受体等)受刺激发生构型变化时,存在于细胞膜内的磷脂酶C即被活化,而使PIP_2发生水解,生成二酰基甘油(diacylglycerol,DG)和三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP_3)。     

6_m2细胞转化与肌醇磷脂代谢相关性研究

肌醇磷脂代谢与V-mos癌基因转化细胞的相关性,迄今为止未见报导。本文用6m2细胞(Moloney鼠类肉瘤病毒(含V-mos)温度敏感突变株(MoMuSVts110)转化的NRK细胞)为模型,探讨了肌醇磷脂代谢与细胞转化的相关性。在33℃ (转化型温度)时,细胞内PIP(磷脂酰肌醇-4-磷酸)含量明显高于39℃(正常型温度),显示出转化型6m2细胞中存在一个提高的PI激酶活性。同时可见DG(二酰甘油)和IP_3(肌醇三磷酸)含量和蛋白激酶C(PKC)活性均明显高于正常型细胞。当细胞由39℃转至33℃10min,PIP、DG、IP_3含量和PKC活性均明显增加,并伴随有PKC活性由胞质向质膜上的转移。实验结果表明肌醇磷脂代谢参与了6m2细胞转化过程。文中对其作用机理进行了讨论。     

酪氨酸蛋白激酶型受体亚族的研究概况

已知许多生长因子的效应通过高亲和性受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinase,RTK)所介导。RTK信号通路,与已确认的第二信使系统即cAMP系统、Ca~(2 )系统和肌醇磷脂信号系统相互作用,相互协调以进行生物体正常生理活动。10年来,先后证实有9类RTK亚族(图1),各亚族成员以其独特的结构特点区别于其他亚族。 尽管RTK亚族间存在差异,但就信号发放途径而言,在很大程度上表现出共同性。配体结合胞外区城后,激活胞浆的酪氨酸激酶,导致下游大量共同发信号分子活化。经常受到激活的这类蛋白质有:磷脂酶C-γ(PLC-γ)、     

山莨菪碱对肌质网Ca~(2+)-ATPase活力和转运功能的影响

本文研究了山莨菪碱对肌质网Ca~(2 )-ATPase活力及转运功能的影响.对膜结合及分离纯化的Ca~(2 )-ATPase,体系中加入不同量的药物都对酶的活力及转运效率无明显影响.当将药物与肌质网或纯化的Ca~(2 )-ATPase预保温后,山莨菪碱则表现出在低浓度使酶激活,高浓度抑制酶的活力.但都导致SRCa~(2 )转运效率降低.对用保温,超声及去污剂透析三种不同方法重建的脂酶体,结果表明:山莨菪碱通过作用于膜脂后,在低浓度激活Ca~(2 )-ATPase、高浓度抑制酶的活力.比较药物对不同类型纯磷脂重建的脂酶体活性的影响发现:山莨菪碱对含有酸性磷脂的脂酶体Ca~(2 )-ATPase的作用较不含酸性磷脂的要大.     

肿瘤酶学的研究现状及展望

近年来,关于酶在细胞癌变中所起的作用以及酶与癌基因产物的关系在国内外是十分重要的课题。从细胞增殖和癌变中酶的作用方面来考察,有两种重要的信息传递系统引人注目。一类是通过Ca~(++)和肌醇—1、4、5—三磷酸(IP_3)作为第二信使的系统;另一类是通过蛋白质的酪氨酸残基磷酸化进而引起细胞内反应的系统。参与第二信使系统的酶以蛋白激酶—C为代表,参与酪氨酸残基磷酸化系统的酶是酪氨酸(蛋白)激酶。蛋白激酶—C (一)蛋白激酶—C的激活蛋白激酶—C是存在于细胞液中的丝氨酸蛋白磷酸化酶。它被激活后则转移到膜上而起     

粉防已碱与红细胞膜ATPase相互作用的研究

粉防已碱是一种新的钙调蛋白拮抗剂,专一性抑制人红细胞膜上依赖CaM的Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase。在较高浓度下,它也不同程度地抑制Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase基本活性、Na~+-K~+-ATPase和Mg~(2+)-ATPase的活性。 除CaM外,不饱和脂肪酸和有限水解均导致膜Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase的活化,所有这些活化作用被Tet在大约相同的浓度范围内抑制,表明Tet除与CaM结合外,也与膜Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase结合。 Tet具有抗抵渗溶血的性能,反映了拮抗CaM与药物的膜稳定性间存在相关性。     

双胸蚓胶原酶的萃取、纯化、性质及化学组成的研究

从双胸蚓组织中分离出水解胶原的酶(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)。其中酶Ⅱ是一不具亚基结构的大分子糖蛋白,酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸,缺乏胱氨酸。最适pH6～7,最适温度35～45℃,80℃10分钟酶失活。Ca~(++)、Mg~(++)、Ba~(++)、Mn~(++)促进酶活性,Co~(++)、Hg~(++)、EDTA、巯基化合物及正常人血浆抑制酶活性。胶原酶解产物在PAGE图谱上表现为泳动较快的新带。     

尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究 Ⅱ.酶学与血液学活性的研究

对四个凝血酶样成分(TLP)的酶学性质的比较研究表明,它们都具有凝结(血)活性和精氨酸酯酶活性。其凝结活力TLP_4>TLP_3>TLP_1>TLP_2,Ca~(++)有激活作用,但不被肝素、EDTA所抑制;精氨酸酯酶活力以TLP_1、TLP_2较高,Ca~(++)、EDTA无明显的激活或抑制作用;TLP_1对热比较稳定,TLP_4对于酸碱变化比较稳定。经动物体内试验表明,TLP_1、TLP_2具有较强的去纤抗凝作用,TLP_3、TLP_4不显示抗凝作用,而显示出较强的促凝血作用。结果表明,尖吻蝮蛇毒与美洲矛头蝮蛇毒一样,同时含有去纤酶(Defibrase)和蛇毒凝血酶(Hemocoagulase)。这一结果对该蛇毒的研究与应用是很有意义的。     

磷脂酰肌醇—3激酶／蛋白激酶B信号系统

质膜民分磷脂酰肌醇被其３位激酶（ＰＩ３Ｋ）活化后,可以使蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ）由细胞浆定位于胞膜,继而被磷酸化激活。ＰＫＢ是原癌基因ａｋｔ的产物,具有丝／苏氨酸蛋白激酶活性,介导细胞代谢、生长、增殖等效应。ＰＩ３／ＰＫＢ系统是近年来发现的一个生长因子信号转导通路。