厚叶景天组织传感器的研究

利用厚叶景天的叶和茎组织作为生物催化材料,分别同二氧化碳气敏电极和氨气敏电极组合,研制了L－精氨酸传感器及,L－赖氨酸传感器。两种传感器的线性范围分别为1.0×10^-4 1.O×10^-3mol/L和8．0×10^-5—3.0×10^-3mol/L．检测下限分别为3．2×10^-5mol／L和2.2×10^-5mol/L,响应斜率分别为42.2mV／dec和41．4mv／dec。考察了两种传感器的回收率．结果表明,L－精氨酸传感器和L－赖氨酸传感器的回收率平均值分别为98．6％和101.6％,标准偏差分别为4.6％和4.0％。     

2.5次微分伏安法对生物样品中丙二醛的测定

以0.1mol/L NH₄Cl溶液为介质, 用2.5次微分伏安法测定了丙二醛, 线性范围为1.0×10^-6至1.0×10^-3 mol/L, 检测限达1.0×10^-7 mol/L. 并测定了细胞培养液介质中新生SD大鼠心室肌细胞样品中的丙二醛.     

谷氨酸棒状杆菌尿素传感器的研究

基于腺酶催化尿素分解产生氨,以氨气敏电极为基础电极,用含脲酶丰富的谷氨酸棒状杆菌研制成测定尿素的微生物传感器.在30℃、pH8.0、0.1mol/L磷酸盐缓冲液中,该传感器的线性范围为1.1×10^-4～1.4×10^-2mol/L,斜率为51.2mV/decade,检测下限为1.0×10^-5mol/L,寿命可达45d.考察了传感器响应初速和底物浓度之间的关系,测定了微生物膜中脲酶的表观米氏常数K_m及最大响应初速v_m.     

腺苷敏感组织电极的研究

将一种含丰富腺苷脱氨酶的新鲜猪肝组织切片,通过“三明治夹心”法固定于氨气敏电极上,制成对腺苷具有特异响应的生物催化组织膜电极。电极测定腺苷浓度线性范围为1.4×10^-4—1.0×10^-2mol/L,检出限为5.0×10^-5mol/L。并对介质条件,pH影响,选择性以及动力学响应行为进行研究,电极寿命达一个月以上。电极用于合成样品测定,效果满意。     

螺旋藻过氧化氢酶的比较研究*

采用碘量法对毛乌素沙地碱湖的钝顶螺旋藻S1 与国外引进的钝顶螺旋藻S2 和极大螺旋藻S3 的过氧化氢酶 (CAT)进行了比较研究。结果表明 :S1 、S2 和S3CAT活性在 2 5℃、pH 7 0时分别为 41 0 7U/g·FW、 550 4U/g·FW和 370 3U/g·FW ;Km值分别为 5 0× 1 0 ^{- 2}mol/L、 5 4× 1 0 ^{- 2} mol/L和 3 8× 1 0 ^{- 2} mol/L ;最适温度分别为 2 5℃     

用Blue Sepharose CL-6B快速纯化天花粉蛋白

差光谱显示染料cibacron blue F3GA与天花粉蛋白(TCS)有特异性结合,复合物在可见光部分的最大吸收波长在690 nm,摩尔消光系数ε=2.6×10^-3(mol/L)^-1·cm^-1,解离常数K_d=1.8 μmol/L,0.5 mol/L NaCl可使复合物解离.根据这一特点,用Blue-Sepharose CL-6B凝胶从栝篓块茎中亲和纯化了TCS.此法快速、简便、高效,易于大量制备.     

栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质

栓菌420（Trametes sp. 420）漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）进行异源表达,产生两种重组漆酶：rLacDx（具有天然N-末端）和rLacDe（N-末端带有8个额外的氨基酸残基）。摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量分别为1.21×10⁵u/L、7.38×10⁴u/L ［以2,2′-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸（ABTS）为底物］。在高密度发酵条件下,rLacDx的产量增加到2.39×10⁵u/L,同时其生产周期降至7.5 d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似,且在50℃和pH3～10的范围内均稳定。然而,rLacDx对底物ABTS的比活力（1761u/mg）高于rLacDe （1122u/mg）,其表观K_m值(427μmol/L)低于rLacDe (604μmol/L)。     

紫罗酮和麦角固醇对酵母生长及产辅酶Q10的影响

研究了β-紫罗酮和麦角固醇对酵母生长及产辅酶Q₁₀的影响。研究发现,β-紫罗酮能促进菌体积累辅酶Q₁₀,当培养基中β-紫罗酮的添加量为0.208×10^-3mol/L时,菌体中CoQ₁₀的含量提高了28.3%;少量麦角固醇能促进菌体产辅酶Q₁₀,当麦角固醇的添加量为0.15×10^-4mol/L时,菌体中CoQ₁₀的含量提高了31.8%,而增加麦角固醇的添加     

促甲状腺激素单克隆抗体的制备

获得了抗促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体杂交瘤细胞20株,其中T₇₄A₁₀小鼠腹水滴度为1:50 000,亲和常数为7.15×10⁹L/mol,T₇₁B₁₁小鼠腹水滴度为1:150000,亲和常数为8.75×10⁹L/mol.两个抗体与人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促卵泡激素(FSH)和促黄体生成激素(LH)的交叉反应分别小于1.1×10^-6%、0.01%和0.016%.将T₇₄A₁₀和T₇₁B₁₁应用于TSH免疫放射分析中,得到了满意的结果.     

用荧光分光光度法测定组织和血液中一氧化氮

利用NO^－₂对4-羟基香豆素的荧光增强效应,建立了生物样本中NO荧光分光度测定法,其检测浓度范围为2×10^-5～2×10^-8 mol/L,采用该方法检测了大鼠大脑皮层和海马组织、细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞培养上清和血清中NO含量.     

二茂铁－交联剂修饰的葡萄糖传感器

用牛血清白蛋白-戊二醛交联剂把葡萄糖氧化酶固定在Nafion-二茂铁修饰电极上,最后在电极上修饰一层Nafion膜,制备成葡萄搪传感器,电活性物质如抗坏血酸、尿酸等对葡萄糖的测定无干扰.该传感器的线性范围为5.0×10^-4-1.3×10^-2mol/L,响应时间小于60s.     

牛小脑肌醇磷脂激酶PI(4)K高产率纯化与特征

对牛小脑膜区肌醇磷脂激酶进行了11 500倍纯化,过程包括：TritonX-100抽提,硫酸铵沉淀,阳离子交换层析(phosphocellulose),亲和层析(Heparin Sepharose CL-6B)和阴离子交换层析(DEAE10,FPLC)等.纯化程度可达95％以上,对SDS-PAGE电泳结果进行扫描分析测其分子质量为56 ku.纯化的肌醇磷脂激酶的特异活性为450 nmol/mg·min, 动力学性质表现为ATP的表观K_m值为7.9×10^-7 mol/L,PI的表观K_m值为6.6×10^-7 mol/L. 腺嘌呤核苷是该酶的有效抑制剂,3.5×10^-7 mol/L腺嘌呤核苷可使该酶活力降低约50％,而TritonX-100对该酶活力具有刺激作用,0.5% TritonX-100可使该酶表现为最高活力.     

人红细胞内乙酰胆碱/胆碱活度的微电极测量及临床意义

本文采用新发展的乙酰胆碱/胆碱(ACh/Ch)离子选择微电极对人体单个红细胞内的ACh/Ch活度进行了测量。实验对象是25位正常人及8位躁狂症病人的红细胞。正常人红细胞内ACh/Ch的活度值为24.O±8.3×10^-6mol/L,而躁狂症病人的红细胞内ACh/Ch的活度值为98.3±41.4×10^-6mol/L,是正常人的4倍。本文对ACh/Ch离子选择微电极的结构和特性参数亦作了描述。     

再生丝素固定的酶标免疫传感器的研究

所研究的酶标免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (兔IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG HRP)与其识别结合。利用H₂O₂ 将抗原抗体结合的电位响应信号放大采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低浓度可达 1.2×10^-10 mol/L ,标准曲线的线形范围在4.1×10^-7～1.2×10^-10 mol/L ,回归方程为: E=-1049+721g[IgG],响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 3 0min。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶标免疫传感器 ,在临床检测、环境监测、HLA个人身份鉴定等领域都有着广阔的应用前景。     

假单胞菌S-59对多种染料的脱色和降解

从受染料长期污染的污泥样品中分离到28株对多种染料具有脱色能力的细菌,其中一株假单胞菌S-59号菌对79种染料均有脱色作用。该菌对酸性红B 2GL (简称酸性红B)和活性桔K₂GV的脱色活力高达4.48—4.43mg(染料)·g^-1(细胞湿重)·h^-1。对阳离子红2GL和酸性红B在浓度为1×10^-1mol/L时其半脱色时间只有0.5小时。染料浓度在100 mg/L以上时会抑制菌的脱色率,而对菌生长的抑制作用则取决于不同     

白细胞、C反应蛋白与凝血指标在哮喘发作期患儿的临床意义

摘要 目的：探讨白细胞（WBC）、C反应蛋白（CRP）与常见凝血指标凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶时间（TT）、抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）、D二聚体（D-D）在哮喘发作期儿童的临床意义。方法：选取发作期哮喘儿童,根据发作严重程度分为轻度、中度、重度3组。比较指标的组间差异,Pearson相关计算WBC、CRP与凝血指标的相关性,Logistic评估中度或重度哮喘发作期的影响因素。结果：全血WBC在中度组（12.02 ×10⁹ /L ± 4.61 ×10⁹ /L）显著高于轻度组（9.56 ×10⁹ /L ± 3.21 ×10⁹ /L,P < 0.05）,重度组（12.91×10⁹ /L ± 3.14 ×10⁹ /L）显著高于轻度组（9.56 ×10⁹ /L ± 3.21 ×10⁹ /L,P < 0.05）;重度组抗凝血酶ATⅢ（109% ± 13%）高于轻度组（99% ± 13%,P < 0.05）。WBC与FIB正相关（r = 0.297, P = 0.018）,CRP与TT（r = -0.330, P = 0.008）、ATⅢ（r = -0.375, P = 0.002）负相关,与FIB（r = 0.496, P = 0.001）、D-D（r = 0.326, P = 0.009）正相关。Logistic回归显示校正性别年龄的WBC影响重度组的比值比（OR）为1.602。结论：WBC和儿童哮喘发作严重程度有关,哮喘发作期儿童体内炎症状态与凝血指标存在一定关联。     

油菜素内酯浸种对盐胁迫番茄种子萌发的影响及其生理机制

为揭示油菜素甾醇类化合物提高作物耐盐的效应和机理,研究了10^-11、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5 mol/L 2,4-表油菜素内酯（EBL）浸种处理对0、50、100、150、175 mmol/L NaCl胁迫7 d的番茄种子萌发、生长、溶质积累、抗氧化代谢的影响。结果显示：NaCl浓度越高的盐胁迫下,10^-9 mol/L EBL浸种可体现出越显著的促进番茄种子萌发的效应;在所有处理下,EBL浸种浓度过高,即10^-6、10^-5 mol/L EBL,均表现出对种子萌发的抑制效应。盐胁迫下种子萌发后,一定浓度的EBL浸种可表现出明显的增加种子胚根和下胚轴长,提高萌发种子鲜重和种子活力指数,其中10^-9 mol/L EBL浸种处理促进效果最适;EBL浸种浓度过高,则表现出抑制效应。150 mmol/L NaCl胁迫或非盐胁迫下,10^-9 mol/L EBL浸种均可降低萌发种子体内的O₂^·-、H₂O₂、丙二醛（MDA）和脯氨酸（Pro）含量;盐胁迫下,10^-9 mol/L EBL浸种可显著提高萌发种子可溶性糖（SS）和可溶性蛋白（SP）的含量。150 mmol/L NaCl胁迫或非盐胁迫下,10^-9 mol/L EBL处理可不同程度促进番茄种苗超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性的上升。综上所述,盐胁迫下,一定浓度范围内的EBL浸种可明显促进番茄种子萌发或成苗,其中以10^-9 mol/L EBL浸种的效果最好,主要是因为EBL施用可积极促进番茄种子萌发中物质转化,SS和SP等溶质积累增多,增强其渗透调节能力;同时SOD和POD酶活增强,缓解盐胁迫导致番茄种子萌发中的次生氧化胁迫。     

川续断提取皂甙促进骨质疏松模型中骨髓基质细胞成骨分化的作用机制研究

摘要 目的：探讨川续断提取皂甙（ASA）促进骨质疏松模型中骨髓基质细胞（rBMSCs）成骨分化的作用机制。方法：选取3月龄的雌性SD大鼠60只,随机分为卵巢切除组和假手术组,每组30只。采取卵巢切除法构建骨质疏松模型。建模成功后采用微型计算机断层扫描获得其松质骨微观结构的三维图像并进行分析。采用CCK-8法测定ASA对卵巢切除组rBMSCs增殖的影响。分析碱性磷酸酶（ALP）活性;荧光定量PCR检测成骨基因ALP、骨桥蛋白（OPN）、Runt相关转录因子2（RUNX2）的表达情况;蛋白免疫印迹试验检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表达情况。结果：与假手术组比较,卵巢切除组骨小梁数量、骨小梁厚度和骨体积分数下降,但骨小梁分离度升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。第4天和第7天,ASA(10^-5 mol/L)组、ASA(10^-6 mol/L) 组、ASA(10^-7 mol/L) 组和ASA(10^-8 mol/L) 组rBMSC增殖均显著高于ASA(0学艺术mol/L)组,以ASA(10^-5 mol/L)最为显著;而ASA(10^-1 mol/L) 组、ASA(10^-2 mol/L) 组、ASA(10^-3 mol/L) 组和ASA(10^-4 mol/L) 组rBMSC增殖显著低于ASA(0 mol/L)组,以ASA(10^-4 mol/L)最为显著,差异均有统计学意义（P＜0.05）。第7天和第14天,ASA(10^-5 mol/L)组、ASA(10^-6 mol/L) 组、ASA(10 ^-7 mol/L) 组和ASA(10^-8 mol/L) 组ALP活性均显著高于ASA(0 mol/L)组,且第14天ALP活性高于第7天,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,ASA组成骨相关基因ALP、OPN和RUNX2相对mRNA表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与ASA组比较,wortmannin组成骨相关基因ALP、OPN和RUNX2相对mRNA表达水平均显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,ASA组PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与ASA组比较,wortmannin组PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：ASA能促进骨质疏松模型rBMSCs增殖,增强ALP活性,增强ALP、OPN和RUNX2的表达,而PI3K通路抑制剂wortmannin降低了这些成骨作用,并降低了ASA诱导的PI3K、p-AKT水平,表明ASA通过PI3K/AKT信号通路促进骨质疏松模型rBMSCs成骨分化。     

微载体高密度培养Vero细胞的研究

微载体是动物细胞高密度培养的有效手段。首先在硅化的方瓶中对Cytodex 1、Cy-todex 3、Biosilon、Bellco Glass Microcarrier、CT-1、CT-3、MC-1、CT-28种国产和进口微载体进行了比较和筛选。确定以Biosilon作为Vero细胞高密度培养的首选微载体。用500mlWheaton搅拌瓶探索影响Vero细胞高密度培养的条件,表明50～60mg/ml的微载体浓度、1～2×10⁶/ml的细胞接种密度、适当的通气(95％O_2+5％CO₂)对该细胞的高密度培养具有重要意义。在200ml培养体积的Wheaton搅拌瓶中,微载体浓度为50～60mg/ml,细胞接种密度为9.24×10⁵/ml,搅拌速度为65～85r/min,经25d培养,Vero细胞密度可达2.34×10⁷/ml,表明50～60mg/ml的微载体浓度对培养细胞没有毒性。接着在1.5L CelliGen生物反应器中进行培养,细胞接种密度为4.98×10⁵/ml,培养体积为1.2L,日灌流量从0.20L逐渐加大到3.65L,经22d连接灌流培养,最终细胞密度可达2.05×10⁷/ml。     

高灵敏、高特异性心钠素放射免疫测定方法及应用

本法应用戊二醛连结α-人心钠素(α-hANF)和牛血清白蛋白,产生的复合物免疫家兔,获得抗α-hANF血清,其最终效价为1:35万,亲和常数K_a=4.94×10^-10mol/L。α-hANF应用氯胺-T氧化法进行 ¹²⁵I标记,再经DEAE-SephadexA25柱层析纯化,得到单碘 ¹²⁵I-α-hANF,比放射性为300μci/μg左右。最小检出量为1.8pg/管。与8种肽交叉反应为:α-rANF 98％、心房肽Ⅲ 40％,其它6种无交叉反应。样品变异系数,批内:4.4％,批间:16.3％。