毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种抗病毒蛋白y3特性和氨基酸序列分析

食用菌中含有多种抗病毒蛋白,可用于植物保护．利用离子交换层析技术和凝胶层析技术,从食用菌毛头鬼伞中提取到抗植物病毒蛋白y3．实验结果表明,y3是一种糖蛋白,利用Western杂交方法可以在发酵菌丝体和子实体中同时检测到,说明可能是组成型表达．根据其N端氨基酸序列,使用RACE-PCR克隆技术,获得了蛋白的氨基酸序列和部分cDNA序列．浓度为2.0 μg/ml时,蛋白y3对烟草花叶病毒(TMV, 20 μg/ml)侵染心叶烟的抑制率为50％,实验同时表明,y3还可抑制病毒在寄主普通烟Nicotiana tabacum var. K326中的复制．     

毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种碱性蛋白的纯化及其活性

用离子交换层析(CM-sepharose FF)和凝胶层析(Superdex^TM 75)方法,从新鲜食用菌毛头鬼伞(Coprinus omatus)子实体中分离纯化出一碱性蛋白y3,经SDS-PAGE初步确定其分子量约为14．4kD。活性检测结果显示：当其浓度为12．5μg／mL时,对烟草花叶病毒(TMV)在心叶烟枯斑寄主上的侵染抑制率达83．0%;y3对兔血凝集活性滴度为2^5,对人血凝集活性滴度为26,其浓度分别为1．562μg／mL和0．78lμg／mL;利用胃癌细胞株MGC-803检测y3体外抗肿瘤活性,其IC50为12μg／mL。y3 N-端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP,为一新的蛋白序列。在SWISS-PORT上登录号为P83477。     

YP3：食用菌榆黄蘑中新的植物病毒抑制物蛋白

食用菌中含有多种抗病毒蛋白,可用于植物保护.采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和SephacrylTMS-200凝胶层析方法,从食用菌榆黄蘑新鲜子实体中提取到一单亚基蛋白,命名为YP3.利用SDS-聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳初步估计其分子量大约为27.6 kDa.氨基酸组成分析表明该蛋白非常类似其它的抗植物病毒蛋白,并且几乎不含糖.其N-末端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP,在GenBank中没有找到同源序列.浓度为0.24 mg/L时蛋白YF3对烟草花叶病毒(TMV 20 mg/L)侵染心叶烟的抑制率为50%.同时还发现YP3对供试的细菌和真菌没有抑制活性,对胃癌细胞株MGC-803、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株SPC-A1的细胞增殖具有一定的抑制作用,其IC50大约为20 mg/L.     

鸡腿菇栽培工艺的研究

采用正交法对鸡腿菇栽培的培养料、覆土材料和pH值等条件进行了探讨。结果表明:鸡腿菇栽培的最佳条件是:培养料为玉米芯,覆土材料为菌糠腐熟土,pH值为7。对鸡腿菇栽培工艺的优化提供了实验依据。     

毛头鬼伞真菌具有抗烟草花叶病毒活性的y3基因的克隆及对烟草的转化

【目的】蛋白质Y3具有抗烟草花叶病毒(TMV)活性并由y3基因编码。本文的目的是从真菌毛头鬼伞(Coprinus comatus)中克隆y3基因全长并在植物体中展现其对TMV的抑制活性。【方法】我们利用试剂盒5′-Full RACE Core Set(TaKaRa)扩增了y3基因cDNA5′-端未知序列,通过RT-PCR获得了全长序列,并把该全长序列与CaMV 35 S启动子和NOS终止子一起插入多克隆位点(MCS)构建了植物表达载体pCAMBIA1301-y3,用于农杆菌介导的烟草转化。【结果】y3基因全长534碱基对,包含1个开放阅读框(ORF),编码一条含130个氨基酸残基的肽链(GenBank检索号:GQ859168;EMBL:FN546262)。其cDNA序列和由它推到的氨基酸序列均与已发表的y3基因部分片段有高度相似性(94%)。Northern杂交分析证实了y3基因在转基因烟草中得到表达。接种TMV的转基因植株表现出抗TMV的活性。【结论】我们克隆了y3基因全长并得到了转基因植株。在转基因植株中,由于y3基因的表达改善了植株的抗病毒活性。y3基因的克隆和表达无疑为该基因的进一步研究奠定了基础。     

毛头鬼伞(Coprinus comatus)多糖的理化性质及体外抗氧化活性

毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体经热水浸提、乙醇沉淀、脱蛋白和真空干燥后得到毛头鬼伞多糖。经定性化学反应和光谱鉴定,毛头鬼伞多糖不含蛋白质、核酸、酚类物质和糖醛酸,为非淀粉类中性多糖,均分子量为947 kD,完全酸水解后经气相色谱分析确定其糖基组成及其摩尔组成比为葡萄糖∶甘露糖∶半乳糖=10.5∶1.7∶1。通过对脱氧核糖体系产生的羟基自由基(.OH)的清除作用和邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O2-.)的清除作用,对毛头鬼伞多糖体外抗氧化活性进行的研究结果表明:该多糖具有一定的抗氧化活性。     

鸡腿菇子实体多糖的分离纯化、理化性质及抗氧化活性

本研究对水溶醇沉法提取的鸡腿菇粗多糖脱蛋白方法进行了比较,最终确定Sevage法为最优的脱蛋白方法。经DEAE-纤维素52离子交换及Sephadex G-200分子层析柱分级、纯化,最终得到2个主要的多糖组分Ccp-I-A和Ccp-I-B。理化性质测定结果表明,二者均为白色絮状固体,能溶于水,不溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂;与斐林试剂,CTAB、硫酸-咔唑、碘-碘化钾及三氯化铁反应均为阴性。GC测定结果可知Ccp-I-A主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为2.03∶9.52∶1;Ccp-I-B主要由岩藻糖和半乳糖组成,其摩尔比为1∶5.21。另外,Ccp-I-A和Ccp-I-B对DPPH和·OH显示出良好的清除能力,而且,相比于Ccp-I-B,Ccp-I-A的清除能力更高,当浓度为300μg/mL,其对DPPH和·OH的清除能力可分别达到72.1%和55.3%。     

一种食用菌提取物y3对烟草花叶病毒的钝化作用及其机制

测定了从食用菌毛头鬼伞(Coprinus comatus)中提纯的y3蛋白对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的钝化作用,结果表明y3对TMV有较强的体外钝化作用,在心叶烟枯斑寄主上对TMV的抑制中浓度约为2.0μg/mL;y3在pH9.0时较稳定;TMV与y3混合后用RNase处理,测得侵染率为61.74%,比未用RNase处理的对照降低了38.26%,说明y3具有一定的体外脱衣壳作用;另外电镜观察发现y3可使部分TMV粒体发生裂解,变短.     

一种食用菌提取物y3对烟草花叶病毒的钝化作用及其机制

测定了从食用菌毛头鬼伞(Coprinus comatus)中提纯的y3蛋白对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的钝化作用,结果表明y3对TMV有较强的体外钝化作用,在心叶烟枯斑寄主上对TMV的抑制中浓度约为2．0μg／mL;y3在pH9．0时较稳定;TMV与y3混合后刚RNase处理,测得侵染率为61．74％,比未用RNase处理的对照降低了38．26％,说明y3具有一定的体外脱衣壳作用;另外电镜观察发现y3可使部分TMV粒体发生裂解,变短。     

The Co-effect of Vanadium and Fermented Mushroom of Coprinus comatus on Glycaemic Metabolism

The effect of fermented mushroom of Coprinus comatus rich in vanadium (CCRV) on glycaemic metabolism was studied in this paper. Alloxan-induced hyperglycemic mice were used in this study. The insulin secretion and glycogen synthesis of the mice were analyzed. At the same time, the gluconeogenesis of the normal mice was also determined. The alloxan-damaged pancreatic beta-cells of the mice were also studied in this paper. After the mice were administered (i.g.) with CCRV, the level of insulin secretion and glycogen synthesis of alloxan-induced hyperglycemic mice elevated (p<0.05, p<0.01) and the gluconeogenesis of the normal mice was inhibited (p<0.01). Also, the alloxan-damaged pancreatic beta-cells of the mice were partly recovered gradually after the mice were administered (i.g.) with CCRV 15 days later. These may account for the causes of CCRV-induced significant decreases of the blood glucose in hyperglycemic mice.