几种蛇毒抑菌作用的比较

本文通过平板扩散实验观察了蛇岛蝮蛇毒、长白山白眉蝮蛇毒、江浙蝮蛇毒及中华眼镜蛇毒对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌作用。结果表明四种蛇毒对试验菌株均有不同程度的抑菌作用;其中白眉蝮蛇毒对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为０．６３ｍｇ／ｍｌ,对大肠杆菌为５．０ｍｇ／ｍｌ。抑菌作用与蛇毒中Ｌ—氨基酸氧化酶的活力有相关性。利用ＣＭ—ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５ＳｅｐｈｄｅｘＧ—７５一对江浙蝮蛇毒的抑菌成份进行初步的柱层析分离,从纯化的各组份看,Ｌ—氨基酸氧化酶活力高的其抑菌活性也高。     

蝮蛇毒和眼镜蛇毒对全血化学发光的影响

目的研究蝮蛇毒和眼镜蛇毒对吞噬细胞的免疫抑制作用。方法以氢化可的松为阳性对照物,用化学发光法测定样品清除非细胞体系产生的活性氧,以及样品对酵母多糖诱导的全血化学发光的抑制作用。结果蝮蛇毒和眼镜蛇毒对非细胞体系产生的Ｏ·２和Ｈ２Ｏ２的清除作用都较弱;对全血化学发光有抑制作用,特别是酵母多糖起刺激作用之前加入蛇毒的抑制作用强于酵母多糖起作用之后加入蛇毒的抑制作用。这提示,这两种蛇毒使吞噬细胞的吞噬免疫功能下降,造成吞噬细胞的呼吸爆发减弱,导致活性氧产生不足,化学发光强度下降。眼镜蛇毒的这种免疫抑制作用比氢化可的松还强。结论蝮蛇毒和眼镜蛇毒具有氢化可的松样的免疫抑制作用,其中眼镜蛇毒可能具有作为临床免疫抑制剂使用的价值。     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮蛇毒中纯化出两个出血毒素。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸分别占２３％和２４％。ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具     

湖南尖吻蝮蛇毒出血毒素的圆二色性和化学修饰

用远紫外ＣＤ谱研究了湖南产尖吻蝮蛇毒的两个出血毒素（ＤａＨＴ－１、ＤａＨＴ－２）的溶液构象,计算得ＤａＨＴ－１的α螺旋、β折叠、无规卷曲的含量分别为３６．９％、３５．５％、２７．６％;ＤａＨＴ－２的α螺旋、β折叠、无规卷曲分别为２３．４％、３１．３％、４５．３％。随ｐＨ的增大或减小,峰位蓝移,酸性条件下的变化比碱性条件下的变化大。构象单元含量计算表明：α螺旋减少,无规卷曲增多,β折叠基本未变。温度和ｐＨ对ＣＤ谱的影响相似,５０℃时峰位蓝移,α螺旋减少,无规卷曲增多．ＥＤＴＡ对ＣＤ谱影响显著,０．０２ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ便导致两个出血毒素呈极度的无序状态。ＥＤＴＡ完全抑制,半胱氨酸部分抑制,胰蛋白酶不影响它们的出血活性。     

八种常见国产蛇毒对白血病细胞杀伤作用研究

用体外细胞培养的方法,观察了我国常见的八种蛇毒（眼镜蛇毒、蝮蛇毒、眼镜王蛇毒、竹叶青蛇毒、蝰蛇毒、烙铁头蛇毒、银环蛇毒及金环蛇毒）对人白血病Ｔ淋巴细胞系ＣＥＭ细胞、人单核细胞白血病Ｕ９３７细胞及人早幼粒细胞白血病ＨＬ６Ｏ细胞的生长曲线、存活率及分裂指数的影响。结果发现八种常见蛇毒中眼镜蛇毒对白血病细胞的杀伤作用最强,蝮蛇毒次之（与空白对照组相比,Ｐ值均小于０．０１）,其余六种蛇毒的作用则很弱。但无论是眼镜蛇毒还是蝮蛇毒,其杀伤淋巴细胞白血病、单核细胞白血病及早幼粒细胞白血病细胞的作用之间无显著差异。     

纯化眼镜蛇毒蛋白对乙酰胆碱受体通道的阻断作用

在培养的抓蟾胚胎神经和肌肉细胞上用膜片箝技术研究了从中国华南产眼镜蛇毒分离出的神经毒组分对乙酰胆碱受体（ＡＣｈ－Ｒ）通道的影响,发现它在微终板电位和单通道水平上都有明显的阻断作用。完全阻断神经肌肉接点传递的剂量约为２．０μｇ／ｍｌ,对乙酰胆碱受体通道的半阻断量约为０．２３μｇ／ｍｌ。这表明它与α－银环蛇毒有相似功效。     

恩拉霉素抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

以ＨｅｐＧ２．２．２．１５细胞株为模型,以其分泌的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ及细胞存活率为观察指标,综合评价天然多肽类抗生素恩拉霉素体外抗ＨＢＶ效果。结果表明恩拉霉素对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的５０％抑制浓度ＩＣ５０分别为２７μｇ／ｍＬ和３４μｇ／ｍＬ,治疗指数（ＴＩ）分别为５．９和４．６。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ结果显示,５０μｇ／ｍＬ恩拉霉素对细胞内游离ＨＢＶＤＮＡ抑制率为５６．８％。     

尖吻蝮蛇毒出血毒素DaHT—3的红外光谱测定

目的观察蛇毒出血毒素结构的变化对功能的影响。方法利用傅利叶变换红外光谱仪对尖吻蝮蛇毒出血毒素（ＤａＨＴ－３）在溶液中酰胺Ｉ带吸收光谱的研究,探测了此出血毒素在溶液中的自然构象和加入ＥＤＴＡ螯合剂除去金属离子后构象的变化。结果此出血毒素在水溶液中的自然构象分别是：α－螺旋为３１．８％、β－折叠为５６．１％、转角为１２．１％;而在去除金属离子情况下α－螺旋和β－折叠减少,转角和无规卷曲增加,即加入螯合剂后其α－螺旋、β－折叠、转角和无规卷曲分别变为１１％、２６．４％、４６．２％和１６．５％。由于结构的变化,它的出血活性和蛋白水解酶活性均被丧失。结论金属离子,特别是锌离子在维系蛇毒出血蛋白酶分子中的二级结构中起着很重要的作用。     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

尖吻蝮蛇毒磷脂酶A2基因的克隆与序列分析

从尖吻蝮蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ,经ＲＴＰＣＲ扩增磷脂酶Ａ２的基因,以江浙蝮蛇的酸性磷脂酶Ａ２基因为探针杂交筛选克隆,分离得到４种磷脂酶Ａ２基因。经双向测序测定了这些磷脂酶Ａ２同功酶基因的全序列,并由此推导出编码的氨基酸序列。运用计算机软件推算了它们的等电点,按照等电点和结构特征将它们分别命名为尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２Ｉ（Ａ．ａＡＰＬＡ２Ｉ）、尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２ＩＩ（Ａ．ａＡＰＬＡ２ＩＩ）、尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶Ａ２（Ａ．ａＢＰＬＡ２）和尖吻蝮蛇毒Ｌｙｓ４９磷脂酶Ａ２（Ａ．ａＬｙｓ４９ＰＬＡ２）。其中Ａ．ａＡＰＬＡ２Ｉ的１～１０位氨基酸残基序列同以前分离得到的尖吻蝮蛇酸性磷脂酶Ａ２已测定的１～１０位氨基酸残基序列完全一致。Ａ．ａＬｙｓ４９ＰＬＡ２基因则由于其推导出的４９位氨基酸残基由Ｌｙｓ代替了Ａｓｐ而区别于以前克隆到的磷脂酶Ａ２基因。最后运用计算机软件比较了它们的同源性。这一组磷脂酶Ａ２基因的克隆,将为进一步研究磷脂酶Ａ２的结构与功能的关系提供更多的信息。     

蕲蛇酶抗栓作用机理的初步分析

动物实验结果示,蕲蛇酶能裂解纤维蛋白原成为可溶性纤维蛋白,降低血中纤维蛋白原浓度,抑制血小板聚集,对抗在酶诱导的血浆凝块订的血浆凝块回缩,因而发挥防血栓形成作用。对纤维蛋白平板试验无直接溶纤作用,但能增加实验动物血中ｔ－ＰＡ活性。可能通过促使血管内皮细胞释放ｔ－ＰＡ而发挥溶栓作用。     

江浙蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化

目的：从江浙蝮蛇蛇毒中纯化出无出血毒的纤溶酶。方法：经DEAE-SepharoseFF离子交换树脂和Superdex75PG凝胶过滤树脂,从江浙蝮蛇蛇毒中纯化出2种可直接溶解纤维蛋白的蛋白酶：F1,F2。结果：它们20μg皮下注射小鼠都无出血反应,F1,F2SDS-PAGE电泳纯度在95%以上。结论：纯化的两个纤溶酶为进一步基础研究和临床应用奠定了基础。     

蕲蛇酶对动物实验性血栓的防栓和溶栓作用

采用大鼠颈动脉－颈外静脉回路循环形成的血小板性动脉血栓,用兔脑粉浸出液诱导的大鼠下腔静脉血栓以及用凝血酶诱导的兔耳缘静脉血栓,作为实验性动脉及静脉血栓模型,并分别用阿斯匹林和尿激酶作为阳性对照药,以观察蕲蛇酶对血栓形成的影响。不同剂量的蕲蛇酶（６００,３００和１５０μｇ／ｋｇｉｖ）能使大鼠动脉和静脉血栓形成减少,并呈量效关系。蕲蛇酶对家兔耳缘静脉血栓形成亦表现抑制作用并促进血栓消褪。３００和６００μｇ／ｋｇ对家兔已形成的动脉和静脉血栓,能促使消褪,提示蕲蛇酶亦有溶栓作用     

尖吻蝮蛇毒中精氨酸脂酶的分离纯化与性质研究

目的：从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出精氨酸脂酶并进行性质研究。方法：利用亲和层析、DEAE—Sepharose FF、Superdex 75柱对尖吻蝮蛇毒进行分离纯化。结果：分离纯化出的2个精氨酸脂酶活性组份分子量分别为36000、30000,它们的HPLC纯度也都达到97％以上。结论：为其临床应用打下了基础。     

蝮蛇毒致小鼠肾损伤模型的建立

目的探索一种建立蝮蛇毒致肾损伤动物模型的方法。方法将清洁级12周龄雄性昆明小鼠72只,随机分为9组,每组8只,A、B、C组为不同时间的对照组（A-3h,B-3d,C-5d）;D、E、F组为蝮蛇毒1mg／kg肌注组（D-3h,E-3d,F-5d）;G、H、I组为蝮蛇毒2mg／kg肌注组（G-3h,H-3d,I-5d）。按照分组要求计算每组小鼠中每只小鼠需肌注的蝮蛇毒的总量．配制2种不同浓度的蝮蛇毒液．D、E、F、G、H、I组小鼠分别肌注不同浓度的蝮蛇毒液0．15ml,A、B、C组小鼠右臀部注射生理盐水0．15ml以进行对照。结果肌注蝮蛇毒后的小鼠均出现中毒症状,但各组小鼠均无死亡。E、F、H、I组小鼠的肾功能与正常对照组比较有明显差异（P〈0．05）。D、E、F、G、H、I组小鼠均有如下病理学改变：肾被膜下出血．肾皮质充血．肾小球充血。肾小囊扩大．肾小管周围毛细血管充血．肾小管肿胀。小管细胞变性等。结论肌注蝮蛇毒是一种建立蛇毒致小鼠肾损伤动物模型的较好方法。     

皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅳ的纯化与初步鉴定

从皖南尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）毒液中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素（简称ＡａＨⅣ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为４４ｋＤ,等电点为ｐＨ５．０．从５００ｍｇ粗毒中可获得２０ｍｇＡａＨⅣ纯品．ＡａＨⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量（ＭＨＤ）为０．４μｇ．     

蕲蛇酶对大白鼠和家兔实验性脑血栓的溶栓作用

采用血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷（ＡＤＰ）加肾上腺素（Ａｄ）从家兔颈内动脉或大白鼠颈总动脉注入,以形成脑血栓,２ｈ后各组动物分别从静脉给予不同剂量蕲蛇酶（１５０、３００和６００ｍｇ／ｋｇ）,阳性对照药潘生丁（１０ｍｇ／ｋｇ）及空白对照生理盐水（１ｍｌ／ｋｇ）。以脑组织对伊文思蓝通透性改变及脑组织切片计算血栓数目为指标,判断蕲蛇酶对血栓的影响。结果不同剂量蕲蛇酶组对大鼠或家兔的实验性脑血栓均比生理盐水组血栓消褪加快,形成的血栓数目减少,脑组织伊文思蓝含量亦明显减少;潘生丁组亦显示促血栓消褪的效果     

浙江蝮蛇蛇毒凝血酶在家兔体内的抗凝作用的研究

浙江产蝮蛇（Agkistrodon halys Pallas）毒类凝血酶经静脉注射家兔（0.25毫克/公斤）可使血浆凝血酶时间显著延长,这是由于血浆纤维蛋白原的水平下降及其性质上的变化引起的。表现在对Ristocetin的亲合力显著降低。此凝血酶时间之延长可被甲苯胺兰部分纠正。葡萄球菌猬集试验表明体内有大量纤维蛋白降解产物（FDP）产生。体外实验表明该酶不激活FXⅢ。 上述结果说明,类凝血酶的体内抗凝作用除由于纤维蛋白原含量降低及性质上有变化外,还与给药后体内大量纤维蛋白降解产物的形成有关。     

尖吻蝮蛇毒及其降压组分降压机制的探讨

用离子交换及凝胶过滤的方法,从尖吻蝮蛇毒中分离纯化出具有显著降压作用的组分,经聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳及等电聚焦电泳证实为单一区带,其等电点为６．８,分子量为３１０００,ＬＤ５０为７．３５±０．５１ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ小白鼠）。该组分能使兔和大白鼠颈动脉血压降低,其降压作用在一定的剂量范围内呈较明显的剂量依赖性,同时观察大白鼠肠系膜微循环微动脉管径的变化,发现大白鼠颈动脉血压降低与微动脉扩张有关。兔血液流变学实验表明该组分能加快红细胞电泳速度、降低全血及血浆粘度等,提示该降压组分的降压作用可能与其扩张微小血管及降低血液粘度有关。