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苏云金芽孢杆菌Cyt蛋白研究进展 总被引:5,自引:1,他引:4
苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)是目前世界上应用最广泛、最成功的微生物杀虫剂 ,也是公认的无公害生物农药。苏云金芽孢杆菌最主要的杀虫活性物质是杀虫晶体蛋白 (InsecticidalCrys talProteins,ICPs) ,包括晶体蛋白 (Cry)和Cyt蛋白 (Cyt)两大类。这两类蛋白在氨基酸序列及其基因同源性上相距甚远 ,但它们均能在靶标害虫中肠内被激活成毒素 ,并在昆虫中肠细胞膜上形成孔道 ,进而引起中肠细胞胶样渗透裂解 (colloid osmoticlysis) ,最… 相似文献
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苏云金芽孢杆菌的电穿孔及其工程菌的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对苏芸金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)和蜡状芽孢杆菌 (Bacilluscereus,Bc)等部分菌株的电穿孔转化进行了研究 ,主要从电穿孔的供体质粒和受体菌株等方面讨论了各种因素对该方法的影响。同时利用电穿孔方法对部分Bt的高效野生株进行遗传改良 ,希望获得含有cry1Ac和cry1C高效基因组合的对鳞翅目棉铃虫、甜菜夜蛾都有效的广谱工程株。利用质粒 pSB1 40 2 (cry1C) ,pAMY(cry1Ac) ,pNQ1 2 2 (Cmr)对所有的供试菌株进行电穿孔转化 ,不同菌株表现出不同的转… 相似文献
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苏云金芽胞杆菌YBT1520杀虫晶体蛋白基因的属性 总被引:2,自引:1,他引:2
通过Southern杂交发现高毒力苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)TBT-1520菌株含有两个杀虫晶体蛋白基因片段,其5’=末端所在HindⅢ片段分别为6.8kb和4.6kb,它们对应的基因分别命名为cry218和cry4.6。经PCR鉴定,该菌含有cry1Aa、cry1Ab和cry1Ac基因,以及cry2基因,其中cry218属于cry1Ac。分析了cry1Ac基因 相似文献
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苏云金杆菌遗传工程杀虫剂 总被引:2,自引:0,他引:2
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称 Bt)是一种对昆虫有致病作用的细菌。其杀虫活性物质主要是杀虫晶体蛋白质(Insecticide crystal protein,ICP)。由于该杀虫剂对人、畜无害,无致癌和致畸作用,是一种有着广泛应用前景的微生物杀虫剂。 根据1998年最新的分类,把ICP基因分为25类cry基因和2类cyt基因,每类ICP基因产生针对不同昆虫的晶体蛋白质。例如,cry3A基因产生杀鞘翅目昆虫的晶体蛋白质,而cry1基因所产生的活性物质主要用于防治鳞… 相似文献
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1 引言苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis简称Bt)是目前世界上产量最大、应用最为成功的微生物杀虫剂 ,除了已筛选出多种Bt菌株直接发酵培养外 ,还培育出转基因工程菌及转基因植物 ,使Bt的使用范围大为扩大。Bt在形成芽孢时产生的伴孢晶体是Bt杀虫活性的主要来源 ,它可能由几种晶体蛋白即δ -内毒素组成 ,包括Cry和Cyt两大类。一般认为 ,δ -内毒素的作用过程要经溶解、酶解活化、与受体结合、插入和孔洞或离子通道形成等五个环节[1] ,涉及到多种毒素和作用位点 ,单一因素的改变对其敏感性影响不大 … 相似文献
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将对鞘翅目昆虫有特异毒性的苏云芽孢杆菌cry3A基因电转化到只对鳞翅目昆虫有毒性的苏云金芽孢杆菌野隆型菌株YBT803-1中,获得转了BMBY-001。SDS-PAGE分析及镜检结果表明,cry3A基因可在该菌株中高效表达,但出发菌株中原有的cyr1Ab、cry1Ac及cry2的表达则受到不同程度的影响。生物测定结果显示,转子BMBY-001对柳蓝叶甲(鞘翅目)具有较高毒力,LC50为0.413μ 相似文献
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转双基因抗虫棉对棉铃虫的抗性 总被引:10,自引:4,他引:6
将苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白 (insecticidalcrystalprotein ,ICP)基因转入棉花植株中获得的抗虫棉花 (下略为Bt棉 ) ,为棉花害虫综合防治开辟了新的途径。Bt棉除具有丰产性、纤维品质好和对靶标害虫的良好控制作用等特性外 ,更重要的应用价值在于其高杀虫效果与维护生态环境的协调发展的良性作用上[1] 。但研究结果已表明 ,害虫对BtICP的抗性适应 ,将严重威胁Bt棉的使用寿命[2 ] 。已有的报道证明 ,将两种不同作用机制的杀虫基因转入植物并同时表… 相似文献
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白超量表达的机制 总被引:4,自引:0,他引:4
杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌主要杀虫成分,进一步提高杀虫晶体蛋白的表达量是苏云金芽杆菌高效工程菌构建的主要途径。本文讨论了cry基因启动子活性、mRNA稳定性、不同cry基因间的协同表达发及伴了孢晶体的形成等几个方面在转录水平或转录后水平上对杀虫晶体蛋白表达的影响。 相似文献
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为了证明苏云金芽胞杆菌以色列亚种20kDe蛋白质对CytA蛋白溶细胞作用的影响, 根据20kDe蛋白质和cytA蛋白基因的核苷酸序列,用AMPLIFY程序设计了一套带有酶切位 点的引物,经PCR扩增分别获得了20kDe蛋白质和cytA蛋白基因。将其基因与表达载体 pUHE24连接并转化到大肠杆菌XLI和DHS 分别获得含20kDa蛋白质基因的克隆子 LZ29;含cytA基因的克隆子LZcytA和含有二者基因的重组子LZ20A.在IPTG诱导下,测定 了不同克隆株基因表达产物对大肠杆菌细胞生长的影响。结果表明:LZ20的细胞生长不受影 响;LZcytA的细胞被杀死;LZ20A的细胞生长也不受影响。这表明20kDa蛋白质基因与cytA 蛋白基因重组后,20kDa蛋白质基因表达产物可保护CytA蛋白对大肠杆菌的溶细胞作用,而 巳这种作用并不因不同大肠杆菌受体而改变。 相似文献
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苏芸金杆菌cry基因的遗传学分析及基因工程进展 总被引:4,自引:2,他引:2
苏芸金杆菌cry基因的遗传学分析及基因工程进展李扬,任改新(南开大学生命科学学院微生物系,天津300071)1引言苏芸金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis简称Bt)是一种微生物杀虫剂,在农林、卫生害虫的综合防治中占有极其重要的地位。... 相似文献
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苏云金芽胞杆菌杀蚊基团在鱼腥藻中克隆和表达的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
将苏云金胞杆菌以色列亚种的杀蚊晶体蛋白基因cry11A亚克隆到大肠杆菌-蓝藻的穿梭质粒载体pERL25C然后用三亲本杂交的方法将重组质粒转移到一种具有固氮能力且可被蚊幼虫蚕食的鱼腥藻(Anabaena)PCC7120中,Southernblot及Westernblot分析表明cry11A基因在鱼腥藻PCC7120中得以克隆和表达,但生物测定未能检测到转基因鱼腥藻对库蚊(Culex)的毒性,可能是因 相似文献
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农杆菌介导的苏云金杆菌抗虫基因cryIA(b)和cryIA(c)在水稻中的遗传转化及蛋白表达 总被引:11,自引:0,他引:11
通过农杆菌介导法用含有抗潮霉素和 G U S 基因的双元载体将杀虫结晶蛋白基因cry I A( b) 和cry I A(c) 导入到籼、粳稻幼穗愈伤组织中,然后经过在含有不同浓度潮霉素的培养基上进行数次筛选,获得一批 Bt 转基因株。经 P C R、 Southern 杂交及 Western 印迹分析证实此二基因已整合进水稻中,饲虫试验结果表明,转基因株具有100 % 杀虫率。 相似文献
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构建了来自根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) T-DNA 的细胞分裂素基因(T-cyt)启动子驱动下的GUS基因的表达质粒,并用以转化烟草(Nicotiana tabacum cv. W 38)和马铃薯(Solanum tubero-sum L. cv. Desiree),研究其在转基因植物中表达的定位。结果表明,T-cyt启动子在转基因植株的根、茎、叶、块茎和萌发的种子中均可表达。其中在茎和块茎中的表达是不均一的:在维管束部分表达较强,在侧芽或叶柄的生长点及块茎的芽生长点表达活性较高。此外,在培养基中加入0.1 m g/LBAP,转基因烟草茎中GUS基因的表达活性增强,而对NAA 没有明显的反应。看来某些外源植物激素对T-cyt启动子的活性有一定的诱导作用 相似文献
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198 9年自云南昆明市石林的红棕壤中分离到数株苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringien sis,Bt)菌株[1] ,对其中的一株YK30 0 4进行了生物学特性、杀虫特性研究及分类鉴定。1 材料与方法1.1 供鉴定的Bt菌株由云南昆明市石林的红棕壤中分离的苏云金芽孢杆菌YK30 0 4菌株。1.2 标准Bt菌株血清型H1 H4 1、H4 4 H55及H57 H69标准Bt菌株由法国巴斯德研究院DrLecadet提供 ,其余为本实验室保存。1.3 生物测定用昆虫小菜蛾 (Plutellaxylostella) 3龄幼虫 ;斜纹夜盗蛾 (Pr… 相似文献
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苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因在小麦基因组中的甲基化修饰 总被引:7,自引:1,他引:7
通过花粉管通道法将苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)毒蛋白基因(Bt.toxingene)转进了小麦品种京花5号与86Al。利用点杂交、Southern杂交和PCR等技术鉴定了转化植株的当代和子代,证实了Bttoxingene的导入与对小麦染色体的整合。利用对腺嘌呤(A)与胞嘧啶(C)甲基化敏感与否的限制性内切酶组(medhylation-(un)sensitiverestrictionenzymegroup,MREG)酶切和RCR扩增(MREG-PCR),对转化子代中的Bt基因片段甲基化形式进行了研究。结果表明,整合在小麦基因组中的Bt基因的A和C的甲基化形式发生了变化 相似文献
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苏云金芽孢杆菌无晶体突变株的逐级升温筛选及其转化性能 总被引:22,自引:7,他引:15
逐级从42 ℃到44 ℃和46 ℃升温培养、并用0-05 % SDS 处理苏云金芽孢杆菌YBT1463 ,获得了一系列内生质粒被部分或完全消除的无晶体(Cry -) 突变株,对4 种Cry - 突变株的转化性能及导入的外源质粒的稳定性进行了研究。用限量培养基和42 ℃培养筛选到Cry - 突变株后,升温至44 ℃,从Cry - 突变株得到内生质粒被进一步消除的突变株;然后升温至46 ℃来培养其中突变株BMB170 ,并用0-05 % 的SDS进行处理,最终筛选到1 株无质粒突变株BMB171 。用pHT3101 、pBMB1736 、pBTL1 和pHV1249 等4 种外源质粒进行的转化及稳定性研究表明,转化频率的大小及导入质粒的稳定性与用作受体菌的Cry - 突变株携有的内生质粒数之间呈现一定的相关性,Cry- 突变株的转化频率显著高于出发菌株,其中BMB171 的转化频率最高达107 转化子/μg DNA,且所导入的外源质粒的稳定性也高于其它Cry - 突变株及出发菌株YBT1463 。 相似文献
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以Genebank中收录的来自Bacillusthuringensissubsp .israelensis(Bti)的cytA基因序列为依据 ,设计了特异性的引物 :cytA1和cytA2 ,对从四川成都分离的韭蛆病原菌B .tTN 189用PCR方法扩增到 982bp的cyt基因片段。利用设计的酶切位点将此片段用HindⅢ /XbaⅠ进行双酶切后 ,与克隆载体 pbluescriptSK( /- )连接 ,转化E .coliJM 10 9,通过蓝白菌落的筛选 ,挑出转化子 ,并通过PCR和酶切验证了转化子的正确性。将重组子命名为pbl c… 相似文献
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利用合成的寡聚核苷酸片段,从质粒pOS1000中分离出具有适合克隆位点的苏云金芽孢杆菌(Bacilusthuringiensis)δ内毒素cryIA(c)全长基因。将该基因与大肠杆菌表达载体pKK2233重组,并引入大肠杆菌JM109中,经IPTG诱导,获得了超量表达的CryIA(c)蛋白。将cryIA(c)全长基因插入链霉菌表达载体pHZ1272中,得到重组质粒pHZ1256,将该质粒引入变铅青链霉菌(Streptomyceslividans)JT46中,经硫链丝菌素诱导,通过Westernbloting测定表明,重组变铅青链霉菌JT46(pHZ1256)已表达出相应的CryIA(c)蛋白。杀虫试验表明,大肠杆菌和链霉菌所表达出的δ内毒素CryIA(c)对小菜蛾均有毒杀作用,其致死率分别为93%和57%。 相似文献