皮质酮快速抑制PC12细胞乙酰胆碱诱发电流影响及机制探讨

目的和方法：本研究采用全细胞膜片箝技术,观察皮质酮（Ｂ）对ＰＣ１２细胞上乙酰胆碱诱发电流（ＩＡＣｈ）的快速作用并初步探讨其可能机制。结果：ＰＣ１２细胞上ＩＡＣｈ是通过烟碱受体（ｎＡＣｈＲ）引起的。箝制电压为－８０ｍＶ时,ＡＣｈ（３０μｍｏｌ／Ｌ）诱发一内向电流;细胞外灌流同时给予ＡＣｈ和Ｂ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）时,Ｂ对ＩＡＣｈ的抑制作用较弱;用Ｂ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对细胞进行预处理,可提高Ｂ对ＩＡＣｈ峰值的抑制率,作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性;细胞外用ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（４×１０－５～４×１０－３ｍｏｌ／Ｌ）或蛋白合成抑制剂放线菌酮（１０－４～１０－３ｍｏｌ／Ｌ）孵育细胞１～２ｈ阻断基因机制,但均不影响Ｂ对ＩＡＣｈ的快速抑制作用。结论：Ｂ对ＰＣ１２细胞上ＩＡＣｈ有快速抑制作用,此作用可能是由非基因组机制介导的。     

哺乳动物细胞凋亡中的功能元件研究进展

在哺乳动物细胞中,程序性细胞死亡（ＰＣＤ）的功能元件包括死亡受体、适配体蛋白、效应元件及调节元件。凋亡信号由适配体蛋白传导至效应元件－Ａｓｐ特异性半胱氨酸蛋白酶（Ｃａｓｐａｓｅ）,活化的Ｃａｓｐａｓｅ水解一系列关键底物,最终导致细胞解体。Ｂｃｌ－２家族、ＩＡＰｓ家族、ＡＲＣ和ＦＬＩＰｓ等蛋白因子通过与适配体蛋白及Ｃａｓｐａｓｅ的相互作用来调控ＰＣＤ进程。     

球形幽门螺杆菌分子生物学研究

为研究幽门螺杆菌（ＨＰ）球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使３株ＨＰ发生球形变异,对弯曲形和球形ＨＰ作了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹及４个毒力基因片段ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱显示球形ＨＰ分子量在７４×１０４以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形ＨＰ１２５×１０４蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形ＨＰ分子量为１１×１０４和６３×１０４的蛋白条带反应增强。ＰＣＲ及ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果表明球形ＨＰ的ｈｐａＡ,ＶａｃＡ,ＣａｇＡ和ＵｒｅＡ４个毒力基因片段未发生缺失,但在ｈｐａＡ或ＶａｃＡ基因中存在点突变     

佛波酯促进CRBH7919细胞中磷脂酰胆碱水解及其酶学基础

用佛波酯（佛波醇－１２－豆蔻酸－１３－乙酸酯,ＰＭＡ）作用大鼠咒９细胞,发现ＰＭＡ能促进ＣＲＨＢ７９１９细胞中磷脂酰胆碱（ＰＣ）水解,此效应出现在ＰＭＡ作用细胞１５分钟后,且具有ＰＭＡ浓度依赖性。分析ＰＣ水解产物,发现ＰＣ主要水生成胆碱而不是磷酸胆是一步测定膜结合磷脂酰胆碱专一性的磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）活性,结果显示１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ作用细胞１０分钟即激活ＰＣ－ＰＬＤ,至３０分钟ＰＣ－ＰＬ     

提高SCA2编码区CAG三核苷酸重复的PCR扩增效率

以遗传性脊髓小脑共济失调Ⅱ型基因（ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ａｔａｘｉａ ｔｙｐｅⅡｇｅｎｅＳＣＡ２）编码区内的ＣＡＧ三核苷酸重复为研究对象（Ｇ＋Ｃ含量为６９．２％）,比较了热启动ＰＣＲ、碱基替代ＰＣＲ、添加增效剂（１％－１２．５％二甲亚砜、１％－２５％甘油、１％－１２．５％甲酰胺）与常规ＰＣＲ的扩增效率,发现热启动ＰＣＲ、碱基替代ＰＣＲ及添加增效剂（１％－１０％二甲亚砜、５％－２０％甘油、     

硫酸化对金顶侧耳多糖构象及生物活性的影响

从金顶侧耳子实体中分离纯化一半乳甘露聚糖ＰＣ－３。该多糖在水中为无规线团构象,与Ｃｏｎ Ａ可相互结合并产生沉淀,对柯萨奇病毒ＣＢ５有一定的抑制作用,ＰＣ－３经硫酸化修饰后,由于同性电荷的排斥作用,使糖链的无规线团扩展呈伸展状态,局部可能形成螺旋。硫酸化的ＰＣ－３与Ｃｏｎ Ａ不能结合成多糖－蛋白复合物,但显著地提高了抗病毒ＣＢ５的活性。     

白细胞介素12抗肿瘤作用前景看好

白细胞介素１２抗肿瘤作用前景看好白细胞介素１２（ＩＬ－１２）是一种具有多种生物学作用的细胞因子，其抗肿瘤作用引人注目。先前已发现，ＩＬ－１２可通过活化Ｔ细胞发挥抗肿瘤作用。最近美国波士顿儿童医院Ｆｏｌｋｍａｎ等的研究则表明，ＩＬ－１２可抑制或阻止新血...     

癌基因mdm2及其产物

ｍｄｍ２（ｍｕｒｉｎｅ ｄｏｕｂｌｅ ｍｉｎｕｔｅ２）基因定位于人染色体１２ｑ１３－１４,转录产物为－５．５ｋｂｍＲ－ＮＡ,在人体正常组织中有广泛表达,其编码区为１４７６ｂｐ,ＭＤＭ２蛋白定位在细胞核中,半寿期很短,利用单抗或多抗发现和有５种与ｍｄｍ２相关,但分子量不同的蛋白,ＭＤＭ２蛋白在体内外都能与突变型或野生型Ｐ５３蛋白结合,抑制Ｐ５３蛋白介导的反式活化作用。ｍｄｍ２可作为一种癌基因使Ｐ５３     

细胞程序死亡与bcl－2基因

细胞程序死亡,是有别于细胞坏死的另一种重要的衰老,死亡形式,它在胚胎发育,肿瘤发生,免疫系统的克隆选择中起重要作用,ｂｃｌ－２是调控ＰＣＤ的基因,但不能抑帛有类型的ＰＣＤ,最近发现,ｂｃｌ－Ｘ基因编码大小不同的两种蛋白,分别具有刺激和抑的ＰＤＣＣＤ的功能,ｂｃｌ－２通过抑制ＰＣＤ可导致细胞癌变,因而ｂｃｌ－２被看作第三类癌基因。     

R-藻蓝蛋白的分离及其结构表征

本文对传统藻胆蛋白的分离方法进行改进,利用柱层析法直接从新鲜多管藻提取分离出纯的Ｒ－藻蓝蛋白。分别用凝胶柱层析法和电泳法测定了其分子量。结果表明：通常实验条件下：Ｒ－藻蓝蛋白的最稳定聚集态是三聚体,其分子量为１２２．８ＫＤ,它由分子量分别为１８．１ＫＤ（α）和２０．５ＫＤ（β）两个亚基组成,其分子组成为（αβ）３。利用吸收和荧光光谱研究了Ｒ－藻蓝蛋白的光谱性质。Ｒ－ＰＣ的三聚体在可见光范围有两个明显的吸收峰,分别为５４６ｎｍ和６１４ｎｍ,与同系的Ｃ－ＰＣ和ＰＥＣ明显不同,表明各类色团光谱特性在三聚体状态基本不变,说明三聚体内色团间无强相互作用。Ｒ－ＰＣ荧光发射峰位于６４０ｎｍ,与同系的Ｃ－ＰＣ和ＰＥＣ基本一致,说明三聚体保证了高效的能量传递。单体的荧光发射呈现双峰（５６６ｎｍ,６４３ｎｍ）,说明单体内能量传递效率不高。从光谱性质可知,在ＰＣ家族中,Ｒ－ＰＣ具有最高的光能捕获效率     

信号传导途径新热点：直接效应物模式

信号传导途径新热点：直接效应物模式跨膜信号传导途径的通常模式,是生长因子与受体作用后,使其受体的酪氨酸蛋白激酶活化。活化后的酪氨酸蛋白激酶使磷脂酶ＣＹ活化;或是酪氨酸蛋白激酶使某些蛋白质因子磷酸化,转而引起原癌基因产物ｃ－Ｒａｓ蛋白活化。蛋白激酶Ｃ与...     

缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）在大肠杆菌中…

本文用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子ｃＤＮＡ基因,并克隆在质粒ｐＡＥＴ３ｄ中,在Ｔ７启动子指导下,在大肠杆菌ＢＬ２ＬｙｓＥ中获得了和一个６组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合Ｍ－ＣＳＦ表达量占菌体总蛋白的１２％,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螯合新和层析一步纯化,所得的融合（Ｈｉｓ）６－Ｍ－ＣＳＦ在还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上基     

柯萨奇B组病毒在Hep—2细胞内增殖特性的研究

采用ＩＦＡ、ＲＴ－ＰＣＲ法观察了柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）５型在Ｈｅｐ－２细胞内的增殖动态。ＣＢＶ感染细胞后４ｈ可检出病毒ＲＮＡ,８ｈ可检出病毒抗原,１２ｈ可观察到细胞病变,２０ｈ可检出病毒颗粒。结果为ＣＢＶ增殖特性的研究提供了新的资料,并指出ＰＣＲ是监测ＣＢＶ增殖的敏感方法。     

显示基因表达差异的PAGE—银染技术

ｄｄＲＴ－ＰＣＲ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ　ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ－ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术是Ｌｉａｎｇ和Ｐａｎｄｅｅ~（［１］）于１９９２年首先建立的一种在ＲＮＡ水平上显示基因表达差异,进而分离目的基因的有效方法。与其它分离基因的方法相比,ｄｄＲＴ－ＰＣＲ方法具有许多优点~（［２］）,目前已经成为筛选未知差异表达基因的最为有效的方法之一。ｄｄＲＴ－ＰＣＲ是３种技术的有机结合：（１）通过错定引物Ｔ１２ＭＮ（Ｍ＝Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ,Ｎ＝Ａ、Ｃ…     

糖皮质激素快速抑制高钾离子诱导嗜铬细胞瘤细胞内游离钙浓度升高 …

本研究应用钙离子特异光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ,使用Ｍｉｒａｃａｌ影像系统检测了糖皮质激素对高钾离子升高嗜铬细胞瘤细胞（ＰＣ１２细胞）内游离钙浓度（［Ｃａ＾＋］ｉ）作用的影响。结果表明：（１）皮质酮抑制高钾离子诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高与其预处理细胞时间的长短有关,预处理３ｍｉｎ时,皮质酮开始产生抑制作用;预处理５ｍｉｎ时,其呈现的抑制作用最;预处理２５ｍｉｎ时,抑制作用基本消失。（２）     

蛋白激酶C的激活转位和它介导的信号通路

蛋白激酶Ｃ是一系列丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族,已发现了至少十二种同功酶。在静止细胞中,它主要以非活化形式存在于胞浆中,由受体－Ｇ蛋白耦联的ＰＬＣβ激活便裂细胞膜上的磷脂而释放ＤＡＧ;与ＰＫＣ的结合引起了ＰＫＣ的别构激活;而通过其它信号途径激活的ＰＬＤ水解胞膜的磷脂酰胆碱（ＰＣ）产生的磷脂酸经磷脂酸酯酶产生的ＤＡＧ可能是ＰＫＣ持续激活的必要条件。在体外实验中,ＰＫＣ的持续激活是一些细胞分化所必须的。蛋白激酶Ｃ的激活首先引起了它转位到膜,有时转位到核,并在转位后继续保持磷酸化活性,同时对它的下游底物进行磷酸化导致它们的活化。ＰＫＣ可活化ＲａｆＳｅｒ／Ｔｈｒ蛋白激酶及ＮＦ－ｋＢ,介导细胞对外界的反应,包括对核基因表达的调节,引起细胞生长或分化等。由于Ｒａｆ可与活化的Ｒａｓ—ＧＴＰ结合从而定位到胞膜,说明蛋白激酶Ｃ与Ｒａｓ介导的Ｒａｆ－１／ＭＥＫ／ＭＡＰＫ信号通路间存在着“对话”。     

嗜热蓝藻优雅粘囊藻藻胆体的特性和别藻蓝蛋白的亚基组成

研究了优雅粘囊藻藻胆体的特性。从聚丙烯酰胺凝胶电泳、吸收光谱和二阶导数图谱可证明,它的ＰＢＳ含有一种红色藻胆蛋,两种Ｃ－藻蓝蛋白和三种别藻蓝蛋白。但是,用ＰＡＧＥ和羟基磷灰石柱层析分离和纯化所得藻胆蛋白,一般仅得到一种Ｃ－ＰＣ和一种亚基组成特殊的别藻蓝蛋白ＡＰＣ。这种ＡＰＣ吸收光谱和荧光发射相同于已报告的ＡＰＣ６６０ｎｍ。但是它的亚基组成是（αα＇ββ＇）２而不是（α＇α２β２β＇）Ｌｃ＾１０或α     

大肠杆菌AroG蛋白F209S突变体对苯丙氨酸反馈抑制作？…

在大肠杆菌中,８０％的３－脱氧－Ｄ－阿拉伯－庚酮－７－磷酸（３－ｄｅｏｘｙ－Ｄ－ａｒａｂｉｎｏ－ｈｅｐｔｕｌｏｓｏａｔｅ ７－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＤＡＨＰ）合酶由ａｒｏ基因编码。分别以大肠杆菌Ｋ１２及其抗苯丙氨酸类似物的突变体总ＤＮＡ为模板,以ＰＣＲ方法扩增得到ａｒｏＧ基因及其突变。基因测序结果表明抗苯丙氨酸灯似物的突变体,其ａｒｏＧ基因核苷酸６２５位发生了Ｔ→Ｃ的点突变,从而使ＡｒｏＧ蛋白的２０     

酵母金属硫蛋白对g12细胞抗γ射线损伤的作用

用胞质阻断法微核试验和单细胞凝胶电泳法检测酵母金属硫蛋白（ＢＤ１０１－Ｃｕ－ＭＴ）对＾６０Ｃｏ－γ射线诱发的ｇ１２细胞微核形成和ＤＮＡ链断裂的影响。结果表明１０和５０μｇ／ｍｌ ＤＢ１０１ Ｃｕ－ＭＴ处理,对１或３Ｇｙγ射诱发的双核微核细胞率和１Ｇｙγ射线诱发的彗星细胞频率及核ＤＮＡ迁移距离的增加有明显的抑制作用。提示酵母金属硫蛋白对γ线诱发ｇ１２细胞的遗传损伤有扣抗作用。     

嗜热蓝藻优雅粘囊藻藻胆体的特性和别藻蓝蛋白的亚基组成

研究了优雅粘囊藻藻胆体（ＰＢＳ）的特性。从聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）、吸收光谱和二阶导数图谱可证明,它的ＰＢＳ含有一种红色藻胆蛋白,两种Ｃ－藻蓝蛋白和三种别藻蓝蛋白。但是,用ＰＡＧＥ和羟基磷灰石柱层析分离和纯化所得藻胆蛋白,一般仅得到一种Ｃ－ＰＣ和一种亚基组成特殊的别藻蓝蛋白ＡＰＣ。这种ＡＰＣ吸收光谱和荧光发射相同于已报告的ＡＦＣ６６０ｎｍ。但是它的亚基组成是（αα′ββ′）２而不是（α′α２β２β′）Ｌｃ１０或（αβ）３。