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1.
2.
鱼类培养细胞干扰素的诱导 总被引:21,自引:0,他引:21
对紫外线灭活的草鱼出血病病毒(GCHV)-F9株,在几种鲤科鱼类培养细胞中诱导产生干扰素的能力及影响干扰素产量的各因素进行了研究。纯化的GCHV在紫外线照射5分丧失感染性,但获得了在CAB等5种鲤科鱼类培养细胞中高铲诱导产生干扰素的能力。干扰素的诱导需要病毒高复数感染细胞。干扰素主要在诱导后14小时时内产生。培养上清中的新生牛血清对干扰素的产量有抑制作用。而在PH6.2-7.8范围内对干扰素产量无 相似文献
3.
蛋白激酶C参与缺氧预处理的血管平滑肌细胞保护 总被引:3,自引:0,他引:3
已知缺氧预处理不仅对心肌细胞,而且对血管床亦有保护作用;但对血管壁细胞是否有直接保护作用,目前尚不清楚。本工作在培养的家兔血管平滑肌细胞(VSMC)缺氧复氧(A/R)损伤模型上观察缺氧预处理(anoxicpreconditioning,APC)的影响。发现APC能提高A/R后VSMC存活率,减轻细胞脂质过氧化损伤和钙超载,使用蛋白激酶C(PKC)激动剂PMA能模拟,而抑制剂H7或polymyxinB能完全消除APC的上述保护作用。提示APC对VSMC的A/R损伤具有保护作用,其机理可能与PKC激活有关 相似文献
4.
用我室建立的HPLC法测定分化诱导剂,视黄酸(RA)和双丁酰环磷酸腺苷(db-cAMP),及增殖促进剂,佛波醇肉桂酸乙酸酯(PMA)对SMMC-7721人肝癌细胞N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V和III(GnT-V,GnT-III)的影响,发现对照细胞在培养5天后GnT-V略见升高。经RA和db-cAMP处理后,可通天降低GnT-V的活力,但不论对照或处理细胞均未测出GnT-III的活力。PMA可增高GnT-V和GnT-III的活力,对GnT-III的增加较GuT-V发生较早亦较强。以上结果和我室报道的RA或db-cAMP减少而PMA增加SMMC-7721细胞表面N-糖链的天线数相符,也和大鼠化学诱发肝癌中GnT-III和V的增高相一致。 相似文献
5.
采用荧光分光光度计法检测维甲酸(RA)、1,25(OH)2VD3及佛波酯(PMA)诱导CCL229细胞分化后[Ca2+]i变化,并观察内质网(ER)特异的Ca2+-ATPase抑制剂Thapsigargin(TG)、IP3受体抑制剂Heparin对RA诱导[Ca2+]i变化的影响,从而探讨RA诱导[Ca2+]i变化与ER的关系。结果显示:RA和1,25(OH)2VD3在数秒内引起[Ca2+]i显著升高。在EGTA和Verapamil预处理细胞条件下,TG不能抑制RA引起Ca2+从细胞内钙池中外流,RA作用后TG仍能升高[Ca2+]i。另外,Heparin也不能完全抑制RA升高[Ca2+]i。提示RA诱导大肠癌细胞升高[Ca2+]i可能通过ER上IP3敏感性和非敏感性钙池,亦可能细胞内存在除ER外对RA敏感的钙池。 相似文献
6.
初乳中含有丰富的生长因子,可促进体外培养的NIH-3T3细胞的DNA合成,含0.5%(V/V)初乳的培养液与含5%小牛血清的培养液有相同的促进生长作用。初乳每毫克蛋白促细胞DNA合成的能力比牛血清高30倍。人初乳中生长活性物质较为丰富,含有两类生长因子--初乳酸性生长因子(CAGF)和初乳碱性生长因子(CBGF)。这两种因子对尿素和盐酸稳定,其中CAGF不被巯基乙醇失活,而CBGF可被巯基乙醇失活 相似文献
7.
犬瘟热病毒细胞膜受体的鉴定 总被引:16,自引:0,他引:16
犬瘟热病毒(CDV)敏感细胞Vero用SDS或RIPA溶解缓冲液溶解,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定犬瘟热病毒疫苗株(CDV-ondestepoort)的细胞受体。结果发现,在Vero细胞上有两组CDV结合蛋白质,即高分子量组蛋白质(127kD、120kD、110kD)与低分子量组蛋白质(27kD和30kD)。这些CDV结合蛋白组分的性质及在CDV致病中的作用有等进一步研究。 相似文献
8.
腺病毒载体介导的肝癌细胞专一性自杀基因表达 总被引:5,自引:0,他引:5
构建由肝癌细胞专一的afp基因表达调节元件控制自杀基因HSV-tk的穿梭质粒,将它与缺陷型腺病毒载体重组,得到AdrAFPTK病毒。经PCR及Southern杂交等证实它们含afp元件和tk基因。空斑形成试验表明病毒效价达1×1015pfu/L。同时构建由CMV启动子控制tk基因的类似载体作为对照。将这两个重组腺病毒分别感染AFP阳性(HepG2)或阴性(HeLa,BRL-3A)细胞株(m.o.i.=100),以丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)处理后,用MTT法测定杀伤细胞的效应。结果,AdCMVTK感染这三种细胞后,GCV半杀伤浓度分别为1.3、2、<1μmol/L;但是,AdrAFPTK感染的HeLa和BRL-3A细胞的GCV半杀伤浓度都>1000μmol/L,而对HepG2细胞只有<1μmol/L,表现出极高的细胞专一性。重组腺病毒AdrAFPTK可望用于肝癌的专一性基因治疗 相似文献
9.
从病人外周血单个核细胞中检测HHV-6:分离培养和基因扩增 总被引:4,自引:0,他引:4
收集婴幼儿急疹及淋巴系统增生性疾病患者外周血单个核细胞进行体外培养,从7例婴幼儿急疹及2例淋巴系统增生性疾病患者中分离出一种病毒,此病毒能在PHA激活的人脐血单个核细胞中传代生长,产生典型CPE:形成气球样巨细胞。电镜下观察,感染细胞中可见直径180nm左右,有包膜,疱疹样病毒颗粒;血清学试验证明分离株与HSV-1,2、HCMV、及EBV无抗原交叉,而与HHV-6GS株间存在抗原一致性;多聚酶链反应表明该分离株HHV-6特异性DNA阳性;综合以上结果,初步认为该分离株为HHV-6。同时还用pCR法对所收集的标本直接检测HHV-6特异性DNA。PCR法与病毒分离法相比较,前者HHV-6检出率为88.8%(16/18).后者为38.9%(7/18)。 相似文献
10.
通过培养的人主动脉平滑肌细胞(hASMC)及脐静脉内皮细胞(hUVEC),应用^3H-TdR参入、Northern blot分析、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、放射免疫分析(RIA)、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对hASMC和hUVEC DNA合成的作用及对血小板源生长因子(PGDF)、PGDF受体、转化生长因子β(TGF-β)、内皮素-1(ET-1)或 相似文献
11.
植物抗病毒基因工程的某些现状侯丙凯于惠敏(山东大学生物系,济南250100)(山东教育学院生化系,济南250013)CURRENTRESEARCHONTRANSGENICPLANTSFORCONFERRINGVIRUSTOLERANCE¥HouBin... 相似文献
12.
将间接ELISA、非放射性分子杂交和RT-PCR三种方法应用于水稻草矮病毒(RGSV)的检测。结果表明,利用自制的融合蛋白GST-NC的抗血清检测RGSV的灵敏度为1mg鲜重的病株叶片或84ng提纯病毒,利用地高辛(DIG)标记的DNA探针NC的点杂交方法检测RGSV的灵敏度为50μg病叶或6ng病毒,而RT-PCR的检测灵敏度则为10μg病叶或2ng的病毒,对上述三种方法的灵敏度和可操作性也进行 相似文献
13.
RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸 总被引:3,自引:0,他引:3
采用异硫氰酸胍-酚-氯仿(AGPC)一步法提取病毒RNA,并依据肾综合征出血热病毒(HFRSV)核蛋白(NP)编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nestedPCR)检测HFRSVRNA方法,应用此法对HFRSV感染的VeroE6细胞培养液及HFRS患者血清中的病毒RNA进行检测。结果显示,感染细胞培养液及35例HFRS患者血清均为阳性,正常的VeroE6 相似文献
14.
血管平滑肌细胞增殖与Cdk抑制蛋白p27的表达 总被引:4,自引:1,他引:4
p27蛋白是细胞周期素依赖性激酶(Cdk)抑制蛋白家族中的一种,主要对外部促进或抑制细胞增殖的信号起反应。本研究应用流式细胞仪(FCM)双标记的方法观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管加压素(AVP)和血小板源生长因子(PDGF)对血管平滑肌细胞(VSMCs)细胞周期百分比和p27蛋白表达量的影响。静止状态培养的VSMCs加入AngⅡ,AVP,PDGFBB后,在不同时间收集细胞,用碘化丙啶(PI)标记细胞DNA,以确定细胞所处的周期。用p27蛋白的单抗和标记了FITC的二抗标记细胞,通过流式细胞仪测定被激发出的荧光量来确定细胞p27蛋白表达的相对量。结果显示,AngⅡ刺激VSMCs增生,其蛋白含量增加了436%(P<001),但不抑制p27蛋白的表达;AVP可轻度抑制p27的表达,有轻度促进VSMCs增殖和增生的作用(P<005);PDGF明显抑制p27的表达,引起细胞增殖。本研究结果提示,p27蛋白抑制VSMCs通过G1期进入S期,是抑制VSMCs增殖的重要调节因子。 相似文献
15.
丙型肝炎病毒基因组的翻译及其产物的加工 总被引:22,自引:0,他引:22
丙型肝炎病毒(HCV)是一种单正链RNA病毒,其5’非编码区(5’NCR)是决定病毒蛋白表达的关键区。基因突变与报道基因表达技术研究表明5’NCR有一内部核糖体进入位点(IRES)。类似于微小RNA病毒属。HCVRNA翻译成为一条多蛋白分子,对蛋白酶的裂解加工后形成10余种结构和非结构蛋白。研究HCVRNA的翻译及产物加工,对HCV及其抗原表达载体有重要意义。 相似文献
16.
抗草鱼出血病病毒多肽的结构分析 总被引:3,自引:0,他引:3
将草鱼出血病病毒(GCHV873)颗粒与随机噬菌体九肽库在体外作用,三轮筛选后,从300个转化的单菌落中获得16个与病毒高亲和力的噬菌体克隆。接着经过抗病毒试验获得6个能强烈抑制病毒复制的阳性噬菌体克隆,能使病毒TCID50下降5个数量级。通过对阳性噬菌体克隆随机插入区域的核苷酸序列分析,推导出多肽的氨基酸序列。发现6个能强烈抑制病毒复制的阳性克隆中多肽的氨基酸序列完全一致(NH2LeuTrpValGlyGlyGlyArgAsnAla),该结果提示多肽的抗病毒能力与多肽特异性氨基酸组成及结构有关。因此,抑制GCHV873复制特异性多肽的氨基酸序列的确定及结构分析,不仅为人工合成抗草鱼出血病病毒的多肽奠定了基础,同时也为抗病毒多肽制剂的研制提供了依据。 相似文献
17.
脑内血管紧张素Ⅱ系统在穹窿下器升压反应中的作用 总被引:7,自引:0,他引:7
文献报道脑内存在血管紧张素Ⅱ系统。与此一致,本工作用氨基甲酸乙脂麻醉、箭毒制动、人工呼吸的大鼠观察到:(1)穹窿下器(SFO)、室旁核(NPV)或NPV的投射区:延髓头端腹外侧区(RVLM)、导水管周围灰质(PAG)、蓝斑(LC)内注入血管紧张素Ⅱ(AⅡ)均引起升压反应;(2)SFO升压反应可被双侧NPV或RVLM内预先注入[Sar1,Thr8]AⅡ(STAⅡ,AⅡ拮抗剂)明显衰减,NPV升压反应也可被RVLM内注入STAⅡ削弱;(3)双侧PAG用STAⅡ预处理后,AⅡ引起的NPV或SFO升压反应均明显减小;(4)NPV升压反应还可被双侧LC内预先注射STAⅡ衰减,但SFO升压反应不受影响。结合我们以往工作曾显示兴奋PAG或LC均可作用于RVLM引起升压反应,目前的结果表明:SFO内的AⅡ能神经元通过NPV内AⅡ能神经元,不仅可直接作用于RVLM引起升压反应,而且还可间接通过PAG作用于RVLM起升压作用,但LC不参与SFO升压反应。 相似文献
18.
作用于HBV(adr亚型)RNA的tRNA—包埋锤头状核酶的研究 总被引:3,自引:2,他引:1
设计了针对HBV(adr亚型)RNA的二个锤头状核酶(RS3和RC2),并将其插入tRNA反密码环中(RtS3和RtC2),以增加其稳定性。实验表明,虽然插入tRNA中的核酶与裸露核酶相比,催化活性有所下降,但在胎牛血清和HepG2细胞抽提液中的稳定性却明显提高。因此,tRNA-包埋核酶有可能提高在体内的抗病毒能力。 相似文献
19.
用逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)导入恶性肿瘤细胞,随后可应用药物9-(1,3-二羟基-丙氧基-甲基)鸟嘌呤(ganciclovir,GCV)选择性地杀死肿瘤细胞.将HyTK基因替换逆转录病毒载体GlNa中的neo基因,构建成重组逆转录病毒载体GTK,转染混合包装细胞(双噬性PA317细胞和单噬性GP+E-86细胞),通过“乒乓效应”获得高滴度重组病毒.用该重组病毒转染小鼠恶性黑色素瘤细胞系B16细胞,用hygromycinB筛选出阳性细胞克隆(HyTK+),经PCR方法检测证明HyTK基因已成功地导入肿瘤细胞中,且不含可复制的辅助病毒.分别用不同浓度的GCV作用于HyTK-及HyTK+的B16细胞,光镜下观察24h和48h后细胞形态及进行活细胞计数.结果表明,GCV浓度大于0.1μmol/L时即对B16/HyTK+细胞有显著的杀伤作用 相似文献
20.
应用原代培养人胎小肠上皮细胞(IEC),观察了谷氨酰胺(GLN)对缺氧复氧(A/R)损伤人IEC的影响。结果:缺氧60min复氧30min后,细胞内乳酸脱氢酶(LDH)漏出量显著上升,细胞存活率显著下降。预先应用1~5mmol/LGLN可使A/R损伤IEC细胞存活率升高和细胞内LDH漏出量减少,GLN作用的最佳剂量为2mmol/L。提示GLN对人IEC具有直接的保护作用,这可能是其整体保护作用机制之一。 相似文献