胶体金免疫层析技术在兽医学中的应用

胶体金免疫层析技术是一种固相免疫标记技术,具有操作简单、反应灵敏迅速、判定结果直观、无需特殊设备和专业人员等优点。胶体金检测技术一直以来在人类医疗领域中应用较为广泛,近年来该项技术也逐渐应用到兽医临床检测等方面中。目前在兽医领域内,该项技术已经在细菌性疾病、病毒性疾病及寄生虫性疾病等多方面都有应用。本综述对胶体金免疫层析技术进行简述,并对该项技术在兽医领域中的应用加以总结和展望,以期能为今后胶体金的相关研究提供参考。     

膜层析技术在下游工艺中的应用

随着生物技术尤其是单抗药物的快速发展,我们发现工艺过程中会陆续遇到一些挑战,例如：药物使用剂量的增加需要更加经济稳定的工艺的支撑;在工艺设计之初就要考虑所选择方法的简便性和可放大性;同时法规也就药品中内毒素、残留DNA、HCP与潜在病毒等污染物的检测限度提出了更高的要求。面对这些挑战,需要更多的创新技术来解决相应的问题。在改进工艺的经济性和污染物控制上,大家谈论较多的技术是膜层析技术。     

血液制品的科研策略分析

血液制品以健康人血液为原料,通过采用生物工程技术或分离纯化技术制备的具有生物活性的一类特殊制品,是宝贵的人源性生物类药品。在医疗急救（如创伤失血、烧伤等）、战伤抢救以及某些特定疾病（如血友病等）的预防和治疗上,有着不可替代的作用。血液制品主要包括人血白蛋白、各类免疫球蛋白、凝血因子、特殊蛋白及因子、纤维蛋白黏合剂等五大类。血液制品产业知识密集,技术含量高,工艺及质量标准高,多学科高度综合和相互交叉渗透,所需投入高,具有高风险的特性。     

淋巴细胞分离液在植物细胞原生质体分离纯化中的应用

本文报道了用淋巴细胞分离液分离纯化植物原生质体的实例,并就其方法原理和运用技巧进行了讨论。     

提高血液制品病毒安全性的途径

近十几年中血液制品病毒安全性问题得到极大的重视,原料血浆的筛检方法、病毒灭活工艺及血液制品制造工艺都取得了很大的发展,使得ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＩＶ等病毒经血液制品传播的发生率大为减少。     

一种新型助滤剂在血液制品生产中的应用研究

目的:探讨新型硅藻土用于血液制品组份分离过滤的适用性。方法:对比新型硅藻土与传统硅藻土的电镜扫描物理结构、金属离子含量、比表面积、离心湿密度等物理表征数据,并考察其在血浆蛋白分离阶段各组份过滤效果及最终产品的质量。结果:新型硅藻土与传统硅藻土比较,具有颗粒孔隙致密、金属离子含量低、比表面积大和离心湿密度小的特点;在血浆蛋白分离阶段的过滤过程中,按照传统硅藻土用量的70%左右使用新型硅藻土时,过滤时可得到理想的滤液浊度、较快的过滤速率、更小的过滤压力和均匀的滤饼分布;所得最终产品的质量符合《中国药典》及公司内控标准。结论:新型硅藻土可替代传统硅藻土用于血液制品的规模化生产,同时降低使用量。该应用研究对于降低血液制品的生产成本和提高产品质量具有一定的实际应用价值和参考意义。     

生产无病毒危害的血液制品的战略

<正>分别使用FⅧ和FⅨ是治疗甲型和乙型血友病的标准疗法。但与输血浆组分物特别是输凝血因子浓缩物相关的一个不好解决的严重问题是;传播人类致病性病毒。该情况是由血友病人中诱发高感染率(50-90％)的AIDS病毒反映出来的。不仅AIDS能由输血液制品传播,血清性肝炎(乙肝)长期来一直被认为是与输血危险相关。自二十世纪七十年代初以来,还遇到一种新型的血清性肝炎一即所谓NANBH。后者只能用象转氨酶(ALT,AST)升高     

现代提取分离技术在食药用菌多糖分离纯化中的应用

详细综述了超声波法,酶解法,超滤法,透析法,色谱法等现代提取分离技术在食药用菌多糖分离纯化中的应用,简单阐述了各种技术的优缺点,并对其应用前景作了简要探讨。     

Sindbis病毒蚀斑方法的建立及其在血液制品病毒灭活实验中的应用

实验建立了Ｓｉｎｄｂｉｓ病毒在ＢＨＫ－２１细胞内蚀斑形成的方法,Ｓｉｎｄｂｉｓ病毒接种于ＢＨＫ－２１细胞内,３天半染色,结果显示蚀斑清晰可见,直径为２－４ｍｍ,病毒滴度已达高峰期,同时将此方法用于血液制品病毒灭活实验中,结果表明该方法准确、客观,Ｓｉｎｄｂｉｓ病毒在Ｓ／Ｄ低ｐＨ孵放法等灭活病毒实验中作为有脂质包膜类病毒的指示病毒具有相对稳定性,较为适宜并且能客观的体现出各种灭活方法灭活病毒的作用     

中国血液制品与国外的差距—访荷兰和德国血液制品企业后感

本文介绍了荷兰红十字会输血分离中心（CLB）和德国Centeon公司的基本概况及对其产品－血液制品质控的保障体系所采取的种种措施,找出了中国血液制品生产中的差距,为今后此项工作提出了改进的方向。     

利用串联亲和纯化技术分离大肠杆菌GroEL蛋白复合物

肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的致病菌,加深其致病机理的基础研究将为相关疫苗研究及疾病控制等提供新的思路和依据.串联亲和纯化(TAP)技术是最近发展的分离纯化天然状态蛋白质复合物进而研究蛋白质相互作用的新方法.用我们自己构建的原核表达串联亲和标签载体,在大肠杆菌O157∶H7中表达了标签融合蛋白GroEL-TAP,建立了非变性条件下制备蛋白复合物的方法,并且对串联亲和纯化过程中的相关实验条件进行了探索和优化,最终得到了高纯度的GroEL-TAP与天然GroEL形成的嵌合型多聚体复合物.这表明我们建立的串联亲和纯化技术能高度特异地纯化靶蛋白参与形成的复合物,为后续寻找O157∶H7中毒力蛋白参与形成的复合物奠定了实验基础.     

Chromatography on DEAE ion-exchange and Protein G affinity columns in tandem for the separation and purification of proteins.

A high-performance liquid-chromatographic method based on coupled DEAE anion-exchange and Protein G affinity columns has been developed for the simultaneous separation and purification of immunoglobulin G and albumin from mouse serum. The diluted mouse serum was injected directly into this system, and the proteins were eluted separately from the DEAE and Protein G columns, coupled in series, by the column-switching technique. The advantages of this method are that IgG and albumin can be separated and purified simultaneously, the expensive affinity column is protected from contamination by the impurities in the mouse serum, and it is fast, selective, robust, and reproducible.     

Simple separation of DNA in antibody purification

Producing monoclonal antibodies includes their efficient and simple purification. Growing hybridoma cells in media containing Prolifix, an alternative plant-based substitute for serum, provides supernatants containing large amounts of antibodies and defined low molecular weight additives. Antibodies can easily be separated from these compounds by fast ultrafiltration. However, DNA originating from lysed cells is present in substantial amounts and must be removed for most antibody applications. The present communication provides a fast, cheap, and efficient separation method by precipitating the DNA from a phosphate buffered solution with manganese chloride. Resulting antibodies have a high purity and an unchanged bioactivity. The method is especially valuable for antibodies which lose bioactivity by interactions with chromatographic matrices (as, for example, Sepharose) and can be used for various antibody isotypes.     

纳豆激酶集成化分离技术

综述了纳豆激酶的分离纯化技术的研究现状和发展趋势。通过对常规分离技术的分析,重点讨论了集成化分离技术的应用及其优势,包括集成化双水相分配技术、扩张床吸附技术以及耐盐性混合模式吸附技术等分离方法。并指出集成化分离技术在生产纳豆激酶以及其他活性蛋白方面,具有广阔的应用前景。     

Phase separation in the isolation and purification of membrane proteins

Phase separation is a simple, efficient, and cheap method to purify and concentrate detergent-solubilized membrane proteins. In spite of this, phase separation is not widely used or even known among membrane protein scientists, and ready-to-use protocols are available for only relatively few detergent/membrane protein combinations. Here, we summarize the physical and chemical parameters that influence the phase separation behavior of detergents commonly used for membrane protein studies. Examples for the successful purification of membrane proteins using this method with different classes of detergents are provided. As the choice of the detergent is critical in many downstream applications (e.g., membrane protein crystallization or functional assays), we discuss how new phase separation protocols can be developed for a given detergent buffer system.