稻鸭与稻鱼生态系统土壤微生物量N和土壤酶活性动态

在一个水稻生长季节,采用田间采样与室内分析的方法,利用氯仿熏蒸培养法、苯酚钠比色法、TTC比色法、高锰酸钾滴定法和茚三酮比色法测定和研究了稻鸭与稻鱼生态系统稻田土壤微生物量N(MBN)和土壤脲酶、脱氢酶、过氧化氢酶和蛋白酶活性的动态变化,及其与土壤养分和水稻吸N量的相关性.结果表明,(1)随着水稻的生长,土壤微生物量N表现为先上升随后下降,于成熟期有所回升趋势;土壤微生物量N与土壤速效N、全N和全P不相关;由于水稻与微生物对养分的竞争,土壤微生物量N与水稻吸N量不相关;稻田养鸭,养鱼显著地提高了土壤微生物量N.(2)土壤脲酶、脱氢酶和蛋白酶活性都表现出先上升后下降趋势,而过氧化氢酶活性变化不大;稻鸭与稻鱼共作显著地提高了土壤脲酶、脱氢酶和蛋白酶活性,而对过氧化氢酶活性影响不大;线性相关分析表明,在一个稻季内,土壤脲酶和脱氢酶活性与土壤速效N负相关,土壤脲酶、脱氢酶、过氧化氢酶和蛋白酶活性与土壤全N和全P不相关;土壤脲酶、脱氢酶和蛋白酶活性与水稻吸N量呈显著相关.(3)稻田土壤微生物量N与土壤酶不相关.     

戊二醛交联法制备固定化酶的改进研究

本文对以交联聚丙烯酰胺为载体的戊二醛交联法制备固定化酶进行了两点改进t (1)将戊二醛进行醛基保护,避免发生交联反应; (2)将载体的酰胺基经酰肼化反应,使其转化成较活泼的酰肼基。然后将含有活泼酰肼基的载体用保护了醛基的戌二醛进行载体,活化反应,再偶联脲酶、L－门冬酰胺酶,可缩短反应时间、提高偶联酶量及酶活性。     

一种简便、灵敏的ATPase活性测定法

现有的ATPase活性测定方法是利用分光光度法,偶联丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的反应,测定NADH在340nm处光密度的减少,求出ATP的水解量,以及利用~(32)γ-ATP同位素测定或用比色法测定ATP水解的Pi等,后一方法因实验条件简单,仍是最常用的分析方法。Fiske建立的钼蓝比色法虽经改进,灵敏度仍较低。Itaya发现磷钼酸与孔雀石绿生成的复合物,有很高的克分子消光系数,可用于灵敏测定Pi。但用于ATPase分析时,酸性钼酸催化的底物ATP非酶促水解,将严重干扰对酶活性的测定。Lanzetta利用柠檬酸淬灭新生Pi(如     

黄豆豆渣中脲酶的提取精制及其影响因素研究

为拓展脲酶的国产化途径,对黄豆豆渣中脲酶的提取进行了研究。建立了从黄豆豆渣中提取脲酶的全套流程,利用盐析法和有机溶剂沉淀法,通过浸提及离心等试验操作手段,将黄豆豆渣中的脲酶进行提取精制,产率为0.1%。同时确定了脲酶的最佳提取条件:其最佳浸提温度为50℃,最佳丙酮浓度为50%,最适pH为7.0。利用纳氏试剂比色法的原理,测得该脲酶在最佳实验条件下的米氏常数Km值为4.11×10^(-2)mol/L,1 m L脲酶溶液中的酶活力为18.63 U。从黄豆豆渣中提取脲酶,既可解决脲酶的国产化问题,又可提高黄豆豆渣的附加值,研究结果具有良好的工业价值和经济效益。     

诱发肝癌过程中脂类和磷脂酶动态变化的相关性

研究了二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程１,２－甘油二酯（ＤＡＧ）,磷脂和磷脂酶的动态变化及其相互关系,高效薄层层析发现肝中ＤＡＧ在第８周出现第一高峰,以后维持高于正常的水平,１４周进一步增高,但以后下降,磷脂组分测定发现只有磷脂酰胆碱（ＰＣ）和肌醇磷脂类（ＰＩｓ）在诱癌过程中降低,有可能成为ＤＡＧ的来源,但ＰＣ可能是主要的,因ＰＩｓ减少的量远小于ＤＡＧ增加的量,进一步用酶偶联比色法测定ＰＣ专一性磷脂酶     

晋西北不同土地管理方式对土壤碳氮、酶活性及微生物的影响

晋西北丘陵区受干旱大风气候以及人为活动的影响,土壤肥力较低,土壤质量退化严重,不同的土地利用和管理方式,因植被覆被、人为活动等不同,对土壤质量产生影响不同。为了更好地了解晋西北地区不同土地管理方式对土壤质量的影响,于山西省北部忻州市五寨县,研究不同管理方式对土壤肥力、土壤酶活性、微生物群落结构及多样性的影响,以及微生物与土壤环境因子的关系,为晋西北地区土地管理和生态建设提供参考。研究中设置4种土地管理方式:苜蓿样地(MX)、免耕样地(MG)、翻耕样地(FG)和荒地(HD),采用野外采集土壤样品、室内测定和分析的研究方法,其中土壤pH值利用电位法测定,土壤有机碳(OC)采用重铬酸钾氧化-分光光度法测定;土壤硝态氮、铵态氮利用全自动间断化学分析仪测定,其原理为紫外分光光度和靛酚蓝比色法。土壤过氧化氢酶、蔗糖酶、脲酶和磷酸酶活性分别采用KMnO_4滴定法、3,5-二硝基水杨酸法、苯酚钠-次氯酸钠比色法、磷酸苯二钠比色法测定,采用高通量测序测定土壤细菌和真菌的群落组成,利用统计分析软件SPSS和Canoco以及QIIME、USEARCH和Uclust生物信息软件分析不同土地管理方式对土壤质量的影响。结果表明,不同土地管理方式对土壤化学性质、土壤酶活性、细菌和真菌的群落结构及多样性均有影响。苜蓿和免耕2种土地管理方式可显著提高表层土壤养分并增加土壤酶活性;4种土地管理方式共有9个细菌门和11个真菌门,细菌相对丰度较大的为变形菌门、放线菌门和酸杆菌门,真菌的子囊菌门相对丰度最大;苜蓿和免耕样地土壤细菌和真菌群落丰富度和多样性都较高,荒地土壤细菌和真菌群落丰富度较低,但多样性较高;RDA分析结果表明,土壤pH、NH~+_4-N和NO~-_3-N含量和过氧化氢酶活性对细菌群落影响较大,pH、有机碳含量、蔗糖酶、脲酶和过氧化氢酶活性对真菌群落影响最大。苜蓿和免耕2种土地管理方式能够提高土壤质量,是晋西北地区较为适宜的管理措施。     

稻草覆盖、间作三叶草茶园土壤酶活性与养分的关系

通过小区实验,分析了稻草覆盖与间作三叶草后的丘陵茶园土壤过氧化氢酶、脲酶、蔗糖酶、磷酸酶活性变化,并采用相关分析、通径分析、主成分分析探讨了酶活性和土壤养分的关系。结果表明：稻草覆盖与间作三叶草能显著提高丘陵茶园土壤有机质、全N及速效P、速效K含量,间作三叶草明显增加土壤过氧化氢酶、转化酶含量,而稻草覆盖明显增加磷酸酶和脲酶活性。相关分析表明,土壤过氧化氢酶、脲酶、蔗糖酶、磷酸酶均与全氮、有机质、速效N呈极显著或显著正相关。通径分析表明,与4种酶关系最直接的是有机质或全N。主成分分析表明,土壤过氧化氢酶、脲酶、蔗糖酶、磷酸酶活性在第1主成分内的权重分别为0.842、0.937、0.873和0.847,可见,过氧化氢酶、脲酶、蔗糖酶、磷酸酶活性可用于评价丘陵茶园土壤C、N肥力。     

溶葡球菌酶的比色测定及某些性质的研究

溶葡球菌酶是一种专一地溶解葡萄球菌的溶菌酶。和蛋清溶菌酶一样,通常采用比浊法进行测定,底物或为葡萄球菌、或为该菌的细胞壁、或为该菌细胞壁的肽聚糖。本文报道一种简便灵敏的溶葡球菌酶比色测定法,以偶联了KNR艳蓝染料的葡萄球菌(死)细胞或偶联了KNR艳蓝染料的该菌细胞壁肽聚糖为色源底物,根据酶作用后释放出的可溶性KNR生成物计算酶活性。本文采用该比色测定法检定了溶葡球菌酶的某些动力学性质。     

黄河三角洲滩地不同造林模式的土壤酶活性

该文对东营市垦利县柽柳(Tamarix chinensis)林、枣(Ziziphus jujuba)园、旱柳(Salix matsudana)林、刺槐(Robinia pseudoacacia)林、白蜡(Fraxinus chinensis)林、桑(Morus alba)园土壤酶活性及其与土壤化学性质和土壤微生物的关系进行了分析。结果表明:在土壤空间上,脲酶和过氧化物酶活性随土层的增加而减小,多酚氧化酶和过氧化氢酶的活性在土层之间变化不明显。过氧化氢酶与脲酶和多酚氧化酶显著相关,脲酶与多酚氧化酶呈负相关。不同造林模式对土壤过氧化氢酶和过氧化物酶影响不大,对脲酶和多酚氧化活性有显著的影响。各种造林模式增加了脲酶的活性,均高于柽柳林;减小了多酚氧化酶的活性,除刺槐林外,均显著低于柽柳林;而造林模式对过氧化物酶和过氧化氢酶的影响较小。土壤酶活性与土壤养分有一定的相关,其中脲酶与全氮、有机质显著正相关,与速效氮正相关;多酚氧化酶与速效钾正相关,而过氧化氢酶与全氮、速效磷和有机质呈负相关,与土壤pH值相关性不显著;与微生物的相关系数不大,其中脲酶与固氮菌、纤维素分解菌显著正相关,与细菌正相关;多酚氧化酶与固氮菌和细菌负相关;过氧化氢酶与固氮菌显著负相关,与纤维素分解菌负相关。脲酶和多酚氧化酶可以作为滩地土壤质量评价的指标。     

酶-DNS比色法测定酵母海藻糖的研究

确定了以酶-DNA比色法定量测定酵母海藻糖的方法,并对可能影响测定的因素进行了研究。结果表明：酶-DNA比色法无设备条件要求限制,且快速,准确,特异性强。     

一株芽孢杆菌产生脲酶条件及脲酶提取研究

研究了一株芽孢杆菌(Bacillus sp.)产生脲酶的条件及脲酶提取。结果表明,芽孢杆菌适宜的生长及产酶温度为35～37℃,产酶受底—尿素的诱导。静止培养有利于产酶,Ni²⁺对产酶没有影响,脲酶粗提物经硫酸铵盐析、热处理,Sephadex G-200及DEAE-纤维素柱层析提取步骤脲酶比活力提高了近70倍,回收率15.5%.     

应用酶学旧方法发现新酶

日本 KATATA 报道,传统的微生物筛选方法仍不失为工业上发展新酶的一个重要方法,这已被十一月份召开的 Taniguchi 基金会第七届国际生命科学会议上的情况所证实。日本大阪三得利公司的 Teruo Amachi 描述了一个令人瞩目的发现——一种新的真菌过氧化物酶。这种酶将有可能被生物学家用来做为以过氧化氢偶联反应为基础而进行的测定。过氧化氢氧化还原酶能够偶联过氧化氢和各种底物的能力已经被应用于诊断和实验室研究上,包括免疫吸附分析(ELISAS)、核酸杂交和神经联系示踪等方面。在这些测定中,最     

两步连续离子交换制备色谱分离纯化聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子

建立了两步连续离子交换制备色谱分离、纯化聚乙二醇与重组人粒细胞集落刺激因子 (Recombinanthumangranulocytestimulatingfactor,rhG_CSF)偶联物的方法。首先用阳离子交换色谱将偶联蛋白质和非偶联蛋白质分开 ,然后使用阴离子交换色谱去除过量的游离聚乙二醇杂质 ,并分离纯化偶联蛋白异构体分别得到单聚乙二醇化、双聚乙二醇化和三聚乙二醇化的rhG-CSF。它们经十二烷基磺酸钠_聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)分析均为单带。采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF)分析三种偶联蛋白质的分子量 ,分别为 23.8kD、28.6kD、33.8kD。用噻唑蓝 (MTT)比色法 ,以粒细胞集落刺激因子的依赖细胞株NFS_6 0为靶细胞 ,测定重组人粒细胞集落刺激因子及其与聚乙二醇的偶联物的体外细胞生物学活性 ,单聚乙二醇化、双聚乙二醇化和三聚乙二醇化的rhG_CSF体外活性保留率分别为 92 %、75 %、4 3%。     

增温对青藏高原高寒沼泽草甸不同时期土壤酶活性的影响

为研究青藏高原多年冻土区土壤酶活性对气候变暖的响应特征,选择北麓河地区高寒沼泽草甸为研究对象,利用开顶式生长室(OTC)进行模拟增温试验,在7月份、12月份分别对增温和对照样地土壤进行分层取样,并对不同深度土壤脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶和磷酸酶的活性进行分析测定。结果表明:在夏季7月份,增温作用下近地表月平均气温升高4.55℃,不同深度的土壤脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶和磷酸酶活性均有降低趋势,但未达到显著水平(P>0.05)。土壤蔗糖酶活性与土壤水分和根系生物量呈显著相关关系;在冬季12月份,增温作用下近地表月平均温度升高6.64℃,不同深度的土壤脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶和磷酸酶活性均有所提高,且在20—50 cm深度的土壤蔗糖酶和磷酸酶活性和40—50cm深度的土壤脲酶和过氧化氢酶活性变化均达到显著水平(P<0.05)。四种土壤酶活性与土壤温度和水分均呈显著相关关系。在深度变化上,夏季增温样地四种土壤酶活性总体随土层深度增加而降低,而冬季随土层深度增加而显著升高(P<0.05)。增温处理下,不同土层深度冬季四种土壤酶的活性总体均大于夏季,且在40—50 cm深度上差异显...     

不同施氮量对桑园红壤耕层酶活性的影响

在广西红壤典型气候区研究施用氮肥对桑园土壤过氧化氢酶、脲酶、酸性磷酸酶和转化酶酶活性的影响,为广西红壤区桑园合理施氮和耕地保育提供科学依据。试验设置3个施氮量水平(N1:120.75 kg N/hm2,N2:172.5 kg N/hm2,N3:207 kg N/hm2),在冬季测定不同氮肥处理下耕层土壤酶活性,并与桑叶产量进行相关分析。结果表明,土壤脲酶和转化酶活性均随着施氮量的增加而增加,过氧化氢酶和酸性磷酸酶活性在中等施氮量(N2处理)下较大。土壤转化酶和脲酶活性呈显著的正相关关系、转化酶和磷酸酶活性呈显著的正相关关系,土壤脲酶、磷酸酶、转化酶活性与桑叶产量呈极显著相关。合理施用氮肥能提高桑园土壤转化酶、磷酸酶、脲酶活性,土壤脲酶和蔗糖酶活性可作为评价桑园土壤肥力质量的指标之一。     

大肠杆菌II型丙酮酸激酶的纯化分析及其作为偶联酶的应用

目的:分析大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶(pyruvate kinase Ⅱ,PKⅡ)的酶学特性及其作为偶联酶的可行性.方法:PCR法从大肠杆菌基因组克隆pkⅡ,构建入原核表达载体pSKB4,经IPTG诱导表达、纯化获得PKⅡ.利用乳酸脱氢酶偶联法分析其催化ADP、GDP、UDP、CDP磷酸化的能力以及不同pH、温度对其活性的影响,并利用PKⅡ作为偶联酶对球形红细菌硫酸盐活化复合体(sulfate activating complex,SAC)及其突变体进行了活性分析.结果:原核表达、纯化、分析大肠杆菌PKⅡ,发现其对ADP、GDP、UDP的催化效率与兔肌肉PK类似,且由大到小分别为:A＞G＞C＞U;而对CDP的催化效率为兔肌肉PK的6倍.PKⅡ的最适pH为7.0,在20 ～ 50℃范围内活性稳定,且18个月的-80℃低温及24 hr的室温存放基本不影响其活性.PKⅡ的高催化效率以及稳定性表明其可作为偶联酶进行NDP的测定.利用PKⅡ作为偶联酶对球形红细菌SAC及其突变体的活性测定表明S410和K409参与了5 7-腺苷磷酰硫酸的磷酸化.     

用细胞化学G6P酶观察大白鼠心肌细胞的偶联结构

大白鼠心肌细胞的特殊结构——偶联是由肌浆网小管和肌膜或横管所组成。G6P酶作为肌浆网的标志酶可以显示偶联的肌浆网小管。在Z线处的偶联有多种形态:二联管、三联管、四联管等。此外,还有横管分支小管和肌浆网小管也组成偶联,平行于肌原纤维,它能连接一个肌节二侧的Z线处偶联,形成了一个立体交织的偶联网。丰富的偶联网是心脏肌肉收缩同步化的物质基础。另外,G6P酶在肌浆网上定位,表明肌浆网与糖原分解有着密切的关系。     

粘虫谷氨酰胺转胺酶(MsTGase)活力测定条件的正交优化及其在幼虫体内的分布

【目的】本研究旨在优化Grossowicz氧肟酸比色法测定粘虫Mythimna separata谷氨酰胺转胺酶(Ms TGase)活力的组合条件,以Ms TGase酶活力为依据分析其在不同龄期幼虫体内的分布规律。【方法】取4龄粘虫幼虫,通过组织匀浆和沉析纯化制备Ms TGase,采用Grossowicz比色法测定Ms TGase酶活力,并对Grossowicz比色法的多重实验因素进行正交优化,进一步结合差速离心法分析不同龄期幼虫体内和亚细胞组分(细胞核和细胞碎片,线粒体,微粒体以及胞质溶胶)中Ms TGase酶活力。【结果】结果表明,酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度及钙离子浓度等实验因素都对Ms TGase酶活力测定结果产生显著影响,其影响大小顺序为:酶浓度>温度> p H>底物浓度>Ca2+浓度。Ms TGase酶比活力测定的最优化条件:酶浓度20 mg/m L、底物浓度0. 04 mol/L、反应体系pH值6. 5、测定温度37℃,不添加钙离子。在1-5龄幼虫中以4龄幼虫的Ms TGase酶活力最高,其比活力也显著高于其他龄期的,且在1-5龄幼虫胞质溶胶中Ms TGase酶活力分别占各亚细胞组分酶活力总和的39%,25%,48%,60%和61%。【结论】所获得的最优化条件适用于粘虫Ms TGase酶活力测定。Ms TGase在粘虫体内呈显著的龄期表达特征和亚细胞分布规律。     

微孔比色法在猪胰腺PLA_2制备中的应用

微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物,在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应,并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值．同时应用此法及滴定法检测酶活力,从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ）,对热、酸稳定,活性依赖Ｃａ２＋的ＰＬＡ２．两种方法检测结果具有可比性,而微孔比色法同时可测多个样品,有节约样品,灵敏度较高等优点．微孔比色法特别适用于大量的样品测定,如拮抗剂筛选、临床样品及制备酶时层析级分的检测等．     

微孔比色法在猪胰腺PLA2制备中的应用

微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物,在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应,并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值。同时应用此法及滴定法检测酶活力,从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ）,对热、酸稳定,活性依赖Ｃａ＾２＋的ＰＬＡ２。两种方法检测结果具有可比性,而微孔比色法同时可测多个样品,有节约样品,灵敏度较高等优点。微孔比色法特别适用于大量的样品测定,如拮抗剂筛选、临床样