细菌胶原酶和胶原降解酶及在人类疾病中的作用

胶的是皮肤、腱和软骨的主要成分,导致这类蛋白隆 丢失的任何过程与健康均有密切关系。许多人类致病菌均能产一胶原降解酶,且可能是疾病病因的主要因素。本文根据其导致人类疾病所表现的解剖位置,讨论细菌溶胶原酶在肌肉和软组织、皮肤、口腔等组织中的致病性。     

成年小鼠原代皮肤成纤维细胞的分离培养及其生物学特性

目的:建立一种周期短、成本低的成年小鼠原代皮肤成纤维细胞分离培养方法,并探索其生物学特性。方法:取8~12周龄BALB/c小鼠背部、尾尖、耳部皮肤,配制2种血清的细胞培养液,采用组织块贴壁法、酶消化法、酶消化组织块贴壁法进行原代皮肤成纤维细胞的培养,通过显微镜观察比较原代细胞的数量、形态、培养周期及纯度;通过免疫荧光、CCK-8、UVB辐照、流式细胞术进行生物学特性鉴别。结果:背部皮肤组织块贴壁使用Gibco胎牛血清培养7 d无细胞游出,CLARK特级胎牛血清细胞游出较多。背部皮肤经酶消化法得到细胞贴壁少;经组织块贴壁法细胞生长慢,培养周期长;酶消化组织块贴壁法细胞游出速度快、数量多、呈长梭形。尾尖取材量少,得到细胞少;耳部皮肤取材方便,但细胞纯度低。CCK8增殖曲线呈S型;相较于对照组,UVB辐照后细胞凋亡率增高17%。结论:CLARK特级胎牛血清、背部皮肤取材、酶消化组织块贴壁法是培养成年小鼠原代皮肤成纤维细胞最优的方案,可增加细胞得量、缩短培养周期,降低成本。     

皮肤癣菌病发病机制研究进展

皮肤癣菌病是由皮肤癣菌引起的角化组织感染（皮肤、毛发和甲）,是人群中发病率最高的感染性皮肤病。在皮肤癣菌感染皮肤过程中,蛋白水解酶是皮肤癣菌的主要毒力因子,这种酶需要在合适的pH及温度下才能发挥它的活性而致病;而机体是否被感染则取决于宿主的皮肤机械屏障功能、免疫反应等。     

防晒黑的酶

一种在细胞分裂中起关键作用的酶——硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin reduclase)还表现出保护皮肤免受紫外线损伤并控制晒黑的特点。明尼苏达州的 Karin Schallreuter 及其同事发现:该酶通过吸收并摧毁紫外线产生的游离氧基来保护皮肤。游离基与紫外线照射引起的皮肤损伤以及癌症有关。硫氧还蛋白还原酶通过调节黑色素(使日晒皮肤变黑的黑色色素)的产生来控制晒黑。为     

明胶酶谱实验方法的优化

目的:优化明胶酶谱实验方法,并检测不同浓度凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌的明胶酶B(MMP-9)活性的变化。方法:用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分开上清中各蛋白条带,经2.5%Triton X-100洗脱、明胶酶缓冲液孵育、考马斯亮蓝染色液染色及脱色液脱色后,经光密度扫描记录,应用ImageJ软件进行密度计量分析。结果:凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌MMP-9具有浓度依赖性。结论:利用优化的明胶酶谱实验方法可做出高质量的明胶酶谱图片,对检测明胶酶活性有重要意义。     

马拉色菌致病相关因子的研究进展

马拉色菌是人类和温血动物皮肤的常驻菌,亦是一种条件致病性真菌,它可以引起花斑癣、马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎等多种疾病。脂酶、蛋白酶、磷脂酶和脂氧合酶等为马拉色菌主要侵袭性酶。马拉色菌与角质形成细胞共培养可引起角质形成细胞多种形态学改变、细胞因子含量变化和细胞凋亡。     

静脉滴注蝮蛇抗栓酶致过敏性哮喘1例报告

静脉滴注蝮蛇抗栓酶致过敏性哮喘１例报告山东省新太市血栓病门诊部尹承春患者李某,女,４９岁,患高粘血症,无呼吸道感染,哮喘、心脏病、药物过敏等病史,静脉滴注清栓酶０．５ｕ加入０．９％生理盐水２５０ｍｌ,每分钟５０滴,用前皮肤敏感试验３０分钟观察反应呈阴...     

明胶酶谱实验方法的优化简

目的：优化明胶酶谱实验方法,并检测不同浓度凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌的明胶酶B（MMP-9）活性的变化。方法：用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分开上清中各蛋白条带,经2．5％TritonX-100洗脱、明胶酶缓冲液孵育、考马斯亮蓝染色液染色及脱色液脱色后,经光密度扫描记录,应用ImageJ软件进行密度计量分析。结果：凝血酶刺激人皮肤成纤维细胞分泌MMP一9具有浓度依赖性。结论：利用优化的明胶酶谱实验方法可做出高质量的明胶酶谱图片,对检测明胶酶活性有重要意义。     

葡萄球菌类毒素的组成

葡萄球菌细胞外代谢产物的研究,多年来大部分集中在毒素及个别酶方面。证明了α-溶血素有溶血、皮肤坏死、致死、平滑肌麻痹等作用;杀白血球素能破坏自血球。目前认为这是     

葡萄球菌分类和鉴定的研究进展

<正> 葡萄球菌常存在于空气、水、土壤、物品、人和动物中,是人体皮肤、呼吸道和胃肠道等的正常菌群。过去长期认为只是金黄色葡萄球菌才有致病作用,而凝固酶阴性葡萄球菌是人类无害的共栖菌。近些年来,由于葡萄球菌分类和鉴定的研究取得了突出的成就,临床上已承认凝固酶阴性葡萄     

神经鞘脂病的酶学诊断方法——用培养的人皮肤成纤维细胞检测

 神经鞘脂病是一类神经鞘脂分解代谢障碍的遗传性疾病,酶学检测是确诊的一种主要手段。在通常采用的标本中,培养的人皮肤成纤维细胞是最理想的酶源。本文改良七种用人工底物检测酶活性的方法,通过控制细胞传代和细胞生长时相的措施,用自己培养的34个正常人的皮肤成纤维细胞建立对GM_1-神经节苷脂累积症,GM_2-神经节苷脂累积症,异染质型脑白质营养不良症,krabbe氏病,Gaucher氏病,Niemann-Pick氏病和Fabry氏病等七种相对常见的神经鞘脂病的酶学诊断正常值。并就标本供体的年龄,培养细胞的传代与细胞所处的生长时相对酶活性的影响进行探讨。     

胚鼠皮肤神经末梢与羊水接触关系及其一氧化氮合酶阳性神经末梢分布

为阐明小鼠胚胎期皮肤的神经末梢是否与羊水有接触关系及胚胎期皮肤一氧化氮合酶(NOS)阳性神经末梢的分布和发育状况,利用逆行轴浆运输的原理将荧光金在体注射到胚胎的羊水中,用荧光显微镜观察神经元被标记情况。同时分别取胚胎11天、13天、15天、17天、19天、21天和出生后1天的小鼠的四肢,冰冻切片,做NADPH-d酶组织化学法,在光镜下观察并摄片。实验结果显示,在脊神经节等部位发现有荧光金标记的神经细胞,主要为圆形或不规则形。而皮肤NOS阳性神经末梢在小鼠胚胎11天出现表达,并随时间而增加,主要位于表皮层,直接裸露在羊水中。结果提示胚胎期羊水与皮肤神经末梢有一定的接触关系,有可能参与胎儿神经末梢的生长发育,羊水中物质是否对周围神经有生长诱向作用值得进一步探讨。     

中华大蟾蜍卵母细胞发育过程中乳酸脱氢酶同工酶表现

近年来国外已有人用LDH同工酶研究硬骨鱼胚胎发育中基因表达情况。我们研究了蟾蜍成体几个主要器官(肝、脑、肾、脾、心肌、皮肤和骨骼肌等)的LDH特征酶谱和卵母细胞几个发育时期的酶谱差异。采用聚丙烯酰胺盘状电泳,结果表明成体各主要器官酶谱多为A基因占优势,仅肾例外,为A_4、D-4远高于其它谱带。心肌为另一情况,除靠近阴极的A_4区带活性稍低外,其余酶活差别不大。半年左右多次重复,器官酶谱无甚差异。与     

马齿苋提取物制备工艺、安全性及抗敏功效的研究

以透明质酸酶抑制率为考察指标,通过正交实验,确定了最佳醇提工艺:乙醇浓度为75%(体积分数),料液比1∶10,提取温度60℃,提取时间1 h,提取液过滤脱色浓缩冷冻干燥后,得到马齿苋醇提物。同浓度下的马齿苋醇提物的透明质酸酶抑制率远高于水提物,红细胞溶血实验说明马齿苋水提物和醇提物的刺激性低,安全性高。人体斑贴实验表明,马齿苋醇提物能减轻或抑制常见致敏源对皮肤的刺激作用,减弱皮肤炎症反应,增强皮肤的屏障功能。     

~（60）CO照射对小鼠皮肤表皮树突状细胞影响的研究

本工作观察了６０Ｃｏ照射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后．不同时间其腹部皮肤表皮树突状细胞的变化。用ＡＴＰ酶组织化学和免疫组织化学方法显示、光镜下鉴定和计算树突状细胞数。结果６０Ｃｏ照射后小鼠腹部皮肤表皮内ＡＴＰ酶阳性树突状细胞明显低于正常小鼠组,Ｐ＜０．０５;６０Ｃｏ照射１天后,Ｔｈｙｌ＋阳性树突状细胞明显增加,４天后减少,Ｐ＜０．０５;照射后,Ｉａ阳性树突状细胞均较正常组减少,４天后减少更加明在,Ｐ＜０．０５、提示６０Ｃｏ照射可降低皮肤表皮树突状细胞的数量,由此影响皮肤免疫功能。     

多疣狭口蛙皮肤分泌物中FSH和LH的分离及在不同繁殖期的表达

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳、葡聚糖凝胶层析、酶联免疫等实验方法,对多疣狭口蛙Kaloula verrucosa繁殖前期、繁殖期、繁殖后期的皮肤分泌物进行初步的成分分离,并对其不同时期皮肤分泌物成分中卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)及黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)进行了免疫检测和定量比较.结果 表明:多疣狭口蛙皮肤分泌物中FSH的含量在其繁殖前期处于三个时期中的最高,繁殖期次之,繁殖后期最低;而LH则是在繁殖期含量最高,繁殖前期含量略偏低,到繁殖后期含量最低.     

体外皮肤刺激模型的生物标志研究进展

皮肤刺激试验是人类健康相关产品危险性评价的常见项目,传统皮肤刺激试验采用实验动物进行,成本高周期长,给动物造成一定程度的痛苦。近年来,多种替代动物试验的体外模型被开发和应用。体外试验主要通过定量检测细胞活性和代谢变化的生物标志物预测体内的效应,应用最广泛的生物标志物是细胞活性、炎性因子、胞质酶等,在生物技术的推动下,新的特异性标志物被开发和验证。     

HGF基因真核表达质粒的构建及其细胞表达

目的:构建真核表达质粒p EGFP-N1-HGF并观察干细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在人皮肤成纤维中的表达。方法:从扩增人的间充质干细胞中提取全长RNA为模板,设计合成引物,用RT-PCR法扩增出HGF基因片段,然后将HGF基因片段连接于真核表达质粒p EGFP-N1中。双酶切鉴定及测序分析后,用脂质体包裹转染体外培养的人的皮肤成纤维细胞,通过荧光显微镜观察其转染效果,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HGF蛋白的表达。结果:经酶切鉴定及测序验证p EGFP-N1-HGF构建正确,经转染的人皮肤纤维细胞中观察到较强的绿色荧光并且可以表达一定量的HGF。结论:成功构建了真核表达质粒p EGFP-N1-HGF,为基因治疗脱发疾病提供实验基础。     

蕲蛇酶致严重血小板减少性出血的治疗体会

目的总结蕲蛇酶致严重血小板减少性出血的治疗措施。方法回顾性分析2012年1月~2015年10月我科在使用蕲蛇酶过程中导致严重血小板减少性出血患者的临床资料。结果使用蕲蛇酶治疗的2308例患者中,出现皮肤黏膜散在出血点、牙龈少量渗血29例,占1.26%,均未经特殊处理,停药观察3~5天自行恢复;出现严重血小板减少、全身皮肤黏膜广泛出血3例,占1.30‰,经积极抢救治疗,预后良好出院。结论蕲蛇酶是治疗血栓栓塞性疾病的有效药物,在临床应用过程中应严格掌握适应证、禁忌证,同时要注意观察,一旦发现出血倾向,应立即停用并严密观察,严重出血者应及时给予干预及抢救。     

日本血吸虫尾蚴钻穿宿主皮肤的方式

本文报道了日本血吸虫尾蚴钻穿宿主皮肤的全过程和早期童虫在8种动物皮肤中动态分布的结果。阐明了血吸虫尾蚴钻穿宿主皮肤是依靠其体内头腺及/或钻腺分泌物的酶促作用、头器伸缩的探查作用及全身肌肉运动的机械作用而协同完成的。指出了尾蚴入侵皮肤界面和童虫在皮肤内移行常以倾斜角度前进,并非完全呈垂直方向或沿毛囊皮脂腺的通道。观察到童虫钻破皮肤血管壁进入血管腔的情景,这有力地提供了血吸虫童虫从皮肤进入血液循环系统的直接证据。