核糖核酸酶抑制因子与衰老关系的研究

本文研究了红细胞核糖核酸酶抑制因子(RI)活力在小鼠和人增龄时的变化。在3、7、17和34周龄?性小鼠(BALB/C,ICR和DBA/2)的实验中,观察到红细胞RI活力随小鼠周龄的增加而显著下降。用20—60岁健康人为研究对象,发现红细胞RI的活力变化与增龄具有线性相关。y=-43.25x+5290,r=0.477,P<0.001,n=58。 本文提出;红细胞RI活力随增龄而下降,能反映生物年龄的变化,并对RI在细胞代谢的意义及与衰老的关系进行了讨论。RI的研究为阐明衰老机理提供了一条途径。     

人胎盘核糖核酸酶抑制因子研究

人胎盘核糖核酸酶抑制因子研究崔秀云,田余祥（大连医科大学,大连１１６０２３）关键词人胎盘核糖核酸酶抑制因子人胎盘核糖核酸酶抑制因子（ｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａｌｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＰＲＩ）是一种酸性胞溶性蛋白质,分子量为５０ｋ...     

宫颈癌患者核糖核酸酶抑制因子基因突变的分析

目的通过对宫颈癌患者血液核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因RNH的突变分析,探讨RNH基因与肿瘤生长的关系。方法针对RNH全基因序列设计21对引物,PCR扩增后采用SSCP对突变进行检测。结果正常人和宫颈癌患者均扩增出相应的21个条带,未发现异常;经过SSCP分析未发现所收集的18例宫颈癌患者血液中的RNH基因有突变发生。结论尚不能肯定RNH基因的突变是否与肿瘤无关,也不能肯定其他肿瘤没有发生突变。需缩小检测片段进一步实验。     

核糖核酸酶抑制因子对血管生成素功能的调控

血管生成素（angiogenin,ANG）能有效促进血管生成和肿瘤细胞增殖,在肿瘤发生发展中起重要作用.其主要分子机制是通过核转位和激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,刺激rRNA转录和核糖体生成.ANG也被发现在肌萎缩侧索硬化症（ALS）和帕金森病（PD）患者中存在基因编码区的功能突变,表明其在运动神经元生理方面发挥作用,其缺陷是神经退行性疾病的一个危险因素.核糖核酸酶抑制因子（ribonuclease inhibitor,RI）是胞内酸性蛋白质,由460个氨基酸残基组成,分子质量约为50 kD,当其与核糖核酸酶A（RNaseA）结合形成复合物后,可抑制RNaseA 的90％以上活性,从而有效调节细胞内RNA水平. ANG具有低核糖核酸酶活性, 是RNase超家族一员,与RNase A有着高度保守的同源顺序. 序列、结构和酶学等分析表明,RI也能够与ANG紧密结合,且得到体外实验的证明. 研究发现,RI具抑癌基因功能;RI与ANG在细胞内共定位;Co IP和GST pull down证实其相互作用,获取了RI与ANG在体内结合的直接证据;RI与AKT磷酸化表达负相关.在膀胱癌细胞及临床标本中证实了RI与 ANG和PI3K/AKT通路分子表达的相关性及与肿瘤细胞生长与转移的关系．在细胞和动物模型研究表明,RI调节ANG活性的功能及其分子机制,即RI通过结合ANG而封锁其核转位和调控PI3K/AKT/mTOR信号通路及其相关通路交互应答（cross talk）的能力,从而抑制肿瘤生长及转移. RI是一个有希望的抗肿瘤蛋白新药和血管生成抑制剂,可望成为基因治疗的靶基因.     

核糖核酸酶抑制因子(RI)的融合表达与复性

应用PCR技术从核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor ,RI)的克隆载体pT7 ri中扩增出ri片段 (1 5kb) ,亚克隆到融合表达载体pGEX 2T中 ,并转化感受态大肠杆菌BL2 1.异丙基半乳糖苷 (IPTG)诱导表达的GST RI经SDS PAGE证明分子量约 76kD ,表达量约占菌体蛋白总量 2 0 % .以包涵体形式表达的目的蛋白经尿素变性 ,透析复性得到的产物具有较高的抑制RNaseA的活性(15 0U ml) .复性的融合蛋白于 2 4℃经凝血酶作用 16h ,可被切割成 5 0kD的RI和 2 6kD的GST .     

核糖核酸酶抑制因子的制备及其在红细胞中的检测

应用Sepharose-RNase亲和层折柱从人胎盘中分防核糖核酸酶抑制因子(RI),纯化约1000倍,得率为43％。纯RI与Freund佐剂1:1稀释,免疫家免,获得抗血清,效价为1:8。经琼脂糖双扩散法和免疫分析,证明红血球中有特异性RI。存在于红细胞胞浆中,红细胞膜上不存在RI。     

人核糖核酸酶抑制因子基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建含有人核糖核酸酶抑制因子（hRI）基因的重组腺病毒载体。方法以含有全长cDNA的pT7-RI为模板,PCR扩增hRI,经T载体克隆后,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack—CMV上,在BJ5183细菌内和pAdEasy-1同源重组。筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增。通过观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。结果酶切鉴定及PCR结果证明hRI基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度为1．5×10^10 pfu/ml。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含hRI基因的重组腺病毒载体。     

高表达人核糖核酸酶抑制因子的乳腺癌细胞株的建立及其鉴定

目的建立稳定高表达人核糖核酸酶抑制因子（hRI）的真核细胞系：乳腺癌细胞系,为进一步研究hRI抗肿瘤、抗氧化的作用机制奠定实验基础。方法将hRI通过逆转录病毒载体（pLNCX-hRI）经过病毒包装细胞（PA317）包装后的高滴度病毒上清,感染乳腺癌（MCF-7）细胞系,经G418筛选后,运用RT-PCR、Western blot等方法进行鉴定hRI在MCF-7中的高表达。结果hRI克隆到乳腺癌细胞（MCF-7）基因组,并随着基因组稳定高表达hRI。结论利用逆转录病毒载体感染真核细胞后获得高表达hRI的肿瘤细胞株,从而为进一步研究真核细胞内hRI的抗肿瘤作用机制提供条件。     

小麦类核糖核酸酶基因（WRN1）cDNA在自然衰老和黑暗诱导衰老条件下的表达

从普通小麦(Triticum aestivum L.)中分离了一个类核糖核酸酶(WRN1)基因的cDNA。WRN1的转录受自然衰老和黑暗诱导衰老的负调控。在幼嫩组织中WRN1也有表达。由于在两个保守的位置上组氨酸被替换,WRNl很可能已经失去了核糖核酸酶的活性。Southern分析表明,在普通小麦基因组中,WRN1以一个小基因家族的形式存在。     

分化抑制因子与肿瘤相关性研究进展

分化抑制因子(inhibitor of differentiationl Id)是广泛表达的螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)家族成员中参与负性调节的转录因子,在真核生物中,Id蛋白在发育、调控细胞增殖和分化、肿瘤血管形成、侵袭性以及转移等方面有着重要的作用.最近的研究表明,Id表达不仅和肿瘤形成、进展以及预后相关,而且有望成为肿瘤治疗的新靶点.综述了Id在肿瘤发生发展过程中可能的机制、作用以及在肿瘤靶向治疗中的前景.     

海藻糖降解酶抑制因子的研究

研究了一系列因素对食尼古丁节杆菌D-97胞内海藻糖降解酵的抑制作用,发现有效霉素(井冈霉素)和乙酸能有效抑制海藻糖降解酶的活性,抑制率最大分别达到87．13％和85．16％．同时研究了它们对海藻糖转化率的影响,发现有效霉素能提高海藻糖转化率,最大增幅达17．44％,而乙酸却降低了转化率。     

西方长寿与衰老研究史精要

长寿是一个美丽的梦想,衰老是一个神秘的谜团.旨在回顾西方文明从远古至20世纪初,从民间到学术界,探索长寿之路,破解衰老之谜,冥思苦想苦苦追寻的漫漫历程,并按历史的足迹,将这错综复杂的过程分为八个历史时期予以阐述.     

绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子表达载体pEGFP-C1-hri的构建及鉴定

目的构建表达绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子的表达载体pEGFP—C1—hri,为探讨人核糖核酸酶抑制因子抗肿瘤作用的分子机制打下基础。方法用亚克隆法,将目的片段从表达载体pGEX-6p-1-hri克隆到pEGFP-C1上,用双酶切筛选得到阳性重组质粒pEGFP—C1—hri,用脂质体法将其瞬时转染到小鼠黑色素瘤细胞B16中,在荧光显微镜下检测其表达。结果pEGFP—C1—hri中插入了hri序列,绿色荧光高效表达于B16细胞浆中。结论pEGFP—C1—hri表达载体已成功构建。     

N端缺失突变对核糖核酸酶抑制因子活性的影响

人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的50 kD的酸性蛋白质,富含亮氨酸和半肤氨酸.作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来胰RN白s。侵袭.HRI主要结构是由7个富含亮氨酸的重复序列组成,7个亮氨酸重复单位有规律环状排列使N端、c端在空间上较为接近.用PcR方法在HRI cl〕NAS,端去除30个核普酸,并将此缺失突变的HRI的cl〕NA片段构建于质粒pPIcgK,电击转化入毕赤酵母(Pi峨i。 Pasto汀S)Gslls中,进行分泌型表达.对表达产物进行亲和层析纯化.实验结果表明,N端缺失突变的HRI与RN白s。A的亲合力较野生型HRI降低1倍,但依然具有竞争性抑制RNas。A的活性,表明HRIN端10个氨基酸残基缺失后并未丧失其抑制活性.     

白血病抑制因子

白血病抑制因子(leukemia inhibitory fa-ctor,LIF)是一类具有广泛生物学功能的细胞因子。60年代末,人们发现一种能诱导M1白血病细胞系分化为正常细胞的分化诱导因子,被称为D-因子。但由于当时研究条件限制,未能对这种因子的生理和生化特性有更多的了解。1984年,Tomida等人从小鼠成纤维细胞株L 929细胞和小鼠Ehrlich腹水瘤细胞条件培养液中分别提取出能诱导M1细胞分化的D-因子。1988年,Hilton等人从小     

双点突变核糖核酸酶抑制因子在毕赤酵母中的表达及对抗氧化能力的影响

人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的50 kDa的酸性蛋白质,富含亮氨酸和半胱氨酸。作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来的胰RNase的侵袭。HRI有32个半胱氨酸残基,且多数半胱氨酸残基是成对的并在序列上相连。文章用丙氨酸同时取代cys328/cys329,并将此双突变的HRI的cDNA片段构建于质粒pPIC9K,电击转化入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,进行分泌型表达。对表达产物进行亲和层析纯化及抗氧化活性检测。实验结果表明,双点突变后的HRI对RNase A的亲和力几乎没有影响,但其抗氧化能力却增加7～9倍。此种抗氧化能力的提高可能是因为在cys328-cys329之间不能形成二硫键而稳定了HRI的三维结构所致。     

转染人核糖核酸酶抑制因子基因对B16黑色瘤细胞及肿瘤转移的影响(英)

人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor, RI)是一种细胞质中分子质量为50 ku的酸性糖蛋白.RI能抑制核糖核酸酶A（RNase A）的活性, RNase A与血管生成因子（angiogenin,Ang）的氨基酸有着高度保守的同源序列.Ang是RNase A超家族的一员,RI通过与RNase A和Ang的紧密结合而抑制其活性.血管生成及新血管的形成, 是肿瘤发生和转移的必要条件.所以抗血管生成将是一种很有希望的对抑制肿瘤生长和转移的有效方法.实验显示RI能有效地抑制肿瘤诱导血管的生成.RI由含有许多亮氨酸重复序列的多肽组成.含有这样重复序列的100多种蛋白质显示了广泛的功能,包括细胞周期调节,DNA修复,对细胞外基质相互作用以及抑制酶活性等.RI被认为是胚胎发育,创伤愈合及肿瘤发生中新血管形成的一种调节因子.RI定位于染色体的11p15.5,与ras基因邻近,在肿瘤病人中经常存在染色体11p15.5部位的变异和异常.RI可能与细胞的生长和分化有关, 因此,RI 可能还具有尚未知的生物学作用.为了进一步了解RI的潜在功能以及探讨RI与肿瘤浸润、转移的关系, 将人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通过逆转录包装细胞PA317,并转染到B16小鼠黑色瘤细胞中, 用转染空载体和未转染的B16细胞作为对照.通过PCR, RT-PCR, 蛋白质免疫印迹, 免疫荧光分析鉴定,获得稳定表达人核糖核酸酶抑制因子的细胞株.结果显示, 转染的RI基因在体外能显著地抑制细胞增殖和细胞迁移,增加了细胞的粘附以及改善细胞的恶性形态,B16,B16 pLNCX,B16 pLNCX-RI 3种细胞的倍增时间分别为(24.98±0.16) h, (25.62±0.28) h, (32.64±1.11) h.与对照组相比,转RI的细胞粘附率增加17.8%和19.5%而迁移降低了61.4%和60%.转RI的细胞比对照组细胞较平展,核仁和分裂相较少,胞质嗜碱性减弱,提示细胞增殖活性降低和恶性表型的改善. 将3种B16细胞静脉注射到C57BL/6小鼠中, 结果表明, 转染RI基因的实验组显著地抑制了肿瘤的转移, 与两个对照组相比,荷瘤小鼠有更长的存活时间, 少得多的转移节结, 更低的肿瘤血管密度和肺重量.结果显示,RI的表达可能与黑色瘤的转移有关, 提示RI能显著地抑制肿瘤的转移,可能由于其与抑制血管作用,增加细胞粘附,降低细胞迁移及增殖有关.