高产复合酶菌株HD-1选育的研究

从产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)菌中分离出一支产酸性蛋白酶等多种水解酶的菌株No．3号。经铜蒸汽激光诱变,选育出一支高产复合酶的菌株FID-1,该菌在简单的固体发酵培养基上,28℃培养48hr,每克鲜曲的酶活力(U)为：酸性蛋白酶7500u、纤维素Cx 酶 9061U、纤维素CL酶3581U、果胶酶5471U、糖化酶5582U。酶活平均提高率为38.86％,最高幅度是78.6％。该菌经多次连续传代和贮存一年后,产酶性状稳定。该菌株是目前国内饲料用酶制帮生产株中,酶系最齐全,产酶水平位于前列的优良菌株。     

豆豉中发酵菌株的分离与鉴定

目的 从豆豉菌曲中分离并鉴定其发酵菌株.方法 将豆豉菌曲采用平板稀释的方法进行菌种分离后,采用革兰染色和16S rDNA序列分析进行菌株的鉴定.以黑豆为原料,分别接种分离的菌株进行豆豉的纯种发酵,观察并测定豆豉在发酵过程中的外观、温度、气味的变化.结果 筛选并鉴定获得10株分属魏斯菌、乳杆菌、芽胞杆菌和葡萄球菌等的菌株,且用枯草芽胞杆菌、发酵乳杆菌纯种发酵的豆豉在外观及气味等方面与自然发酵相近.结论 分离得到的枯草芽胞杆菌、发酵乳杆菌可取代自然发酵菌种,作为工业纯种发酵的参考菌株应用.     

空间飞行对假单胞菌产酶的影响

我们选育的产邻苯二酚双加氧酶的高产菌株假单胞菌No.40,1987年8月由我国“尖兵1号”卫星携带在空间飞行5天。完成飞行后,我们将此菌接种在牛肉汁斜面上,其生长情况及菌落形态与未飞行的对照菌相同。在100ml三角瓶摇床上培养,试验菌与对照菌的生长速     

菜青虫幼虫肠道细菌的分离及鉴定

目的为深入研究菜青虫肠道的营养生理,分析其取食消化机制,对菜青虫肠道细菌进行了研究。方法从自然种群的菜青虫肠道环境中按传统分离、纯化、培养,获得细菌5个菌株,对其茵体形态、染色反应、培养性状、生理生化反应进行了系统研究。结果鉴定结果l号菌株为李斯特菌属（Listeria）,2号菌株为皮杆菌属（Dermabacter）,3号菌株为丙酸杆菌属（Propionibacterium）,4号菌株为沙雷菌属（Serratia）,5号菌株为短状杆菌属（Brachybacterium）。结论在菜青虫肠道环境中分离出5个菌株,鉴定出分类地位。其菌株之间的数量具有明显差异,以皮杆菌属数量最多（2×10^8）,需进一步研究该菌的功能及其在菜青虫肠道中的作用。     

一株拮抗稻瘟病菌细菌的筛选与鉴定

生防微生物是一种具有开发创新和环境友好的防控稻瘟病策略,旨在发掘高效生防微生物资源。于2014年从湖南桃江山区一季稻感病品种湘早籼24号的感稻瘟病稻丛的健康稻株中分离出817株菌株,采用平板对峙法,筛选出1株对稻瘟病菌具有高效抑制作用的拮抗细菌JN005,通过菌丝生长速率法测定其活体菌代谢产物对稻瘟病菌的抑菌率高达84%;并对另外5种植物病原真菌、4种植物病原细菌和大肠杆菌及金黄色葡萄球菌等11种菌作了抑菌谱测定。结果表明,JN005菌株对禾谷镰刀菌、水稻稻曲病菌有较好的抑制作用,其抑制率分别为70.1%和73.6%。通过形态学观察、生理生化测定及16S r DNA序列系统发育分析,将JN005菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检测及耐药性分析

由细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起的细菌耐药性一直是临床相关感染性疾病治疗中的棘手问题。从不同病区患者标本中分离了96株大肠埃希菌和80株肺炎克雷伯菌,分剐采用双纸片协同试验和药物敏感试验检测了上述菌株产生ESBLs情况及对17种抗生素的耐药性。结果发现,27．1％（26／96）的大肠埃希菌株和22．5％（18／80）肺炎克雷伯菌株产ESBLs。ICU病房分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株ESBLs总阳性率（46．0％）与介入科病房和烧伤科病房分离菌株ESBLs总阳性率（28．6％和25．0％）无显著性差异（P〉0．05）,但明显高于呼吸科、骨科、其他病房及门诊部分离菌株ESBLs总阳性率（6．3％～14．3％,P〈0．01）。不产ESBLs大肠埃希菌株和肺炎克雷伯菌株对17种抗生素耐药率明显低于产ESBLs菌株。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对氨曲南均敏感,对氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星耐药率仅为15．8％-23．4％。上述实验结果提示,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床菌株中有较高的ESBLs阳性率,不同病区患者感染的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率有很大差异,氨曲南、氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星可作为治疗产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌感染性疾病的首选药物。     

萎缩芽胞杆菌CKL1促盐胁迫下燕麦生长活性及其功能基因分析

【背景】青海省特殊生境孕育了特殊微生物资源。【目的】探究适合生活于高原生境的芽胞杆菌菌源。【方法】采用平板对峙法、显色法对萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus） CKL1的拮抗、产吲哚乙酸活性进行测定,并检测耐低温、耐盐性及菌株对盐胁迫下燕麦品种（Avena sativa）“青燕1号”种子萌发、幼苗生长效应及叶绿素、脯氨酸、丙二醛的含量变化,利用二代测序技术对菌株进行基因组测序并分析相关功能基因。【结果】菌株CKL1对禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）、锐顶镰孢菌（Fusarium acuminatum）表现出显著的拮抗活性（抑菌圈直径>15 mm）;与Salkowski比色液反应变红,能在NaCl浓度为13%的LB培养基及4℃低温下生长,表现出一定的产吲哚乙酸、耐盐及耐低温活性;盐胁迫下,菌株CKL1对“青燕1号”种子萌发及幼苗生长具有显著促进作用,叶绿素及脯氨酸含量显著增加,丙二醛含量下降,增强了燕麦的抗盐性。菌株CKL1基因组全长为14 281 280 bp,与GO功能数据库比对注释到3 303个功能基因;基因组编码与脂肽类化合物itur...     

桦褐孔菌野生分离菌株的比较与栽培选育

通过菌丝形态比较、ISSR分析鉴定及人工驯化栽培选育,对1株野生分离菌株和4株保藏菌株进行比较。结果显示:5个菌株在菌丝形态和长势上差异显著,1号菌株(野生分离)菌丝洁白,长速最快;ISSR扩增图谱谱带差异明显,1号菌株与5号菌株在遗传相似水平85%时聚为1类,其他菌株各自聚为独立1类。驯化栽培试验结果表明:1号菌株出核较快,菌核大,产量高,较其他菌株产量差异显著。被试菌株为各自独立菌株,1号菌株经驯化适宜高产栽培,是重要珍稀野生种质资源。本研究可为野生桦褐孔菌菌株种质资源收集和为实现大规模栽培育种提供亲本资源。     

大伏革菌产纤维素酶条件优化及高效菌株筛选

真菌胞外纤维素酶活可作为高效生防菌株筛选的指标之一,通过测定野生大伏革菌(Phlebiopsis gigantea)菌株在最优条件下所产生纤维素酶活力高低来达到筛选防治针叶树根腐病高效菌株的目的。以大伏革菌菌株液体培养过程中纤维素酶活力为指标,通过单因素和正交试验结合的方法,筛选出大伏革菌最适产纤维素酶条件为(g/L):葡萄糖30.00,蛋白胨5.00,磷酸二氢钾3.00,硫酸镁1.50,装液量120 mL/250 mL,接种量5%(V/V),初始pH为4.0。测定野生大伏革菌菌株纤维素酶活力的大小显示:08077号菌株纤维素酶活力最大,13025号菌株最小。研究得出08077号菌株比芬兰商业化生物制剂Rotstop-F具有更好的防治中国小孔异担子菌的潜能。     

胞外青霉素酰化酶产生菌的自然分离

利用菌种的自然突变进行“出发菌株Ⅱ”的自然分离,从用肉眼选出的22株菌中,经初筛选选出650u／10ml以上高产菌株8株,再经过复筛选出780u／100ml的活力菌株2株,命名为“6‘＃、8’＃”。用于胞外酶的生产,月平均酶活5975u／100ml。经验证,“6‘＃、8‘＃”高产菌产菌适用于胞外青霉素酸化酶的生产。     

纤维素分解菌的选育及酶活测定

纤维素是地球上最丰富的有机物质,这些丰富的宝贵资源大部分被浪费了,而且由于部分地区焚烧秸杆造成了严重的环境污染。为了充分利用纤维素,纤维素分解菌的筛选研究逐步展开。通过新华滤纸为唯一碳源的杜氏培养基和刚果红纤维素培养基,从堆肥、污泥、马粪和土壤中分离得到7株纤维素分解菌。以5号菌株为出发菌株,经过紫外线诱变,用刚果红纤维素平板透明圈选育法得到8号菌株。为了评价筛选工作,对8株纤维素分解菌进行酶活测定。结果表明,8号菌株具有最高的CMC酶活和FPA酶活。     

Aspergillus flavus F52菌株鉴定及不同碳源对曲酸产量的影响

【目的】探明豇豆内生真菌F52的分类地位及不同碳源对曲酸产量的影响。【方法】采用形态观察及ITS序列分析对豇豆内生真菌F52进行分类鉴定;通过重结晶获得曲酸高纯度产物,采用核磁共振波谱、高分辨质谱及红外光谱对其进行结构鉴定;采用高效液相色谱检测不同碳源对曲酸产量的影响。【结果】该曲酸产生菌为黄曲霉Aspergillus flavus F52;葡萄糖与蔗糖组成的复合碳源曲酸产量最高,乳糖的存在不利于曲酸的生成;该菌株发酵液中曲酸含量可达24.44 g/L。【结论】Aspergillus flavus F52是一株具有产业化开发价值的曲酸高产菌株。     

斜卧青霉纤维素酶和木聚糖酶高产菌株的选育

以纤维素酶高产菌株斜卧青霉A50为出发菌株,通过紫外诱变原生质体获得1株木聚糖酶活力提高80%而纤维素酶活力没有改变的6号菌。蛋白质电泳和酶谱检测结果显示,纤维素酶谱基本无差别,而木聚糖酶谱显示6号菌比A50多了一条带。6号菌优化后的产酶培养基组成为:麸皮7%、葡萄糖0.1%,该条件下,纤维素酶活为19.7IU/mL,木聚糖酶活力为215.4IU/mL。     

石油降解表面活性剂产生菌的筛选与生长特性分析

为了筛选用于提高原油采收率的高效石油降解菌株,采用平板划线法从油藏采出水样中筛选得到3株产表面活性剂菌:11号菌、18号菌和20号菌。经革兰氏染色后观察,三种菌均为G+、短杆菌。生理生化试验结果表明:11号菌可能为芽孢菌属,18号菌、20号菌可能为假单胞杆菌属。不同碳源下三种菌的菌液浓度变化结果表明:均以蔗糖为碳源时菌液浓度变化较小,表面张力没有下降,产表活能力没有变化;以石油加蔗糖为碳源时,三种菌曲线变化较大,20号菌表面张力下降较多,其产表活能力比11号菌和18号菌强。     

曲酸生产菌的诱变选育

Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ ２３３６两次紫外诱变后筛选出突变苗株ＵＶ２１０１２－１。该菌株曲酸产量比出发菌提高了１．６８倍;遗传性状稳定,传代５次曲酸产量基本不下降,而且发酵周期也比出发菌株明显缩短。     

克拉维酸产生菌菌种的自然分离、纯化和鉴定

以克拉维酸产生菌棒状链霉菌21NB108号为出发菌株,经自然分离[1]、纯化处理后,再经摇瓶初筛、复筛获得高效价菌株N003号,其摇瓶复筛效价提高+11.96%经传代试验表明,该高产菌株遗传性能较为稳定。在罐上生产试验与出发菌株相比发酵效价提高20%。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中产AmpC酶的情况及其耐药性。方法收集产ESBLs肺炎克雷伯菌临床株126株,应用Tris-EDTA纸片法检测AmpC酶。用琼脂稀释法测定菌株对11种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。结果126株ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌中12株检出AmpC酶,检出率为9.5%。AmpC阳性菌株对头孢西丁、头孢他啶、氨曲南、氨苄西林/舒巴坦和阿莫西林/克拉维酸的耐药率达100%,对阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为83.3%和33.3%,其中头孢西丁、头孢他啶、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率显著高于AmpC阴性株（P〈0.05）。结论深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中检出AmpC酶阳性株,其耐药性强于单产ESBLs菌株。     

谷氨酸产生菌7338的选育

为了落实伟大领袖毛主席关于“深挖洞、广积粮、不称霸”的光辉指示,进一步提高谷氨酸发酵产酸率,以降低粮食单耗,增加产量,我们于1973年2—6月份,对原谷氨酸产生菌进行了人工诱变,选出1株产酸能力较强的7338号菌,后又开展了中型试验和扩大试验。初步肯定这一诱变菌株谷氨酸产率比原始菌株AS1.299提高10—15%,转化率提高5—10%。     

生淀粉降解酶菌株的选育和酒精发酵试验

从样品中分离到128株菌,从中选育到一株分解甘薯生淀粉能力强的45号黑曲霉菌株。以此菌株为出发菌株经过紫外线、氯化锂多次复合处理,得到154号突变株,其降解甘薯生淀粉酶活力为219.4u/g,比出发菌株提高49.7%o用于甘薯生淀粉糖化、酒精发酵,出酒率为36.3%,接近传统工艺。     

高粱丝黑穗病菌种内分化的RAPD分析

应用随机引物对来自不同地理来源、不同寄主和经寄主致病力测定的高粱丝黑穗病菌2、3号生理小种的10个菌株的DNA进行分析,所产生的RAPD结果表明,丝黑穗病菌S.reilianum具有丰富的种内遗传多样性,存在明显的分化现象。经聚类分析可将供试菌株大致分成两组,辽宁清原H2和黑龙江绥化H9菌株为一组。辽宁沈阳(H3)、阜新(H1)、营口(H10),山西榆次(H4),吉林四平(H5),黑龙江哈尔滨(H6),河北张家口(H8)等高粱丝黑穗病菌株以及辽宁沈阳的玉米丝黑穗病菌株(H7)为另一组,并且同一组内的DNA多态性亦有差异。高粱丝黑穗病菌2号生理小种和3号小种间在分子水平上存在差异明显。