α-D-甘露糖残基在猪透明带中的分布及其在受精中的作用

为证明α-D-甘露糖残基在猪透明带中的分布及其在受精中的作用,用异硫氰酸荧光素络合小扁豆凝集素(fluorescein isothiocyanate-labelled Lens culinaris,FITC-LCA,一种D-甘露糖特异结合植物凝集素)标记去除卵丘细胞的体外成熟猪卵母细胞,用于观察LCA的标记情况及体外受精,并用甘露聚糖进行体外受精的竞争抑制实验及检测对精子顶体反应的影响.结果显示,LCA均匀标记于整个透明带且呈强荧光反应;LCA标记能够显著减少透明带表面精子结合数量并几乎完全阻断卵母细胞的受精能力;甘露聚糖能够显著降低透明带精子结合数量和卵母细胞的受精率;甘露聚糖在精子培养的不同时间段上都能明显增加顶体反应的精子数量.这些结果表明,猪透明带糖蛋白上的α-D-甘露糖残基是精子受体的重要组成部分,它能够诱导精子发生顶体反应,促进精子侵入透明带.     

人精子甘露糖受体参与诱导卵母细胞皮质颗粒反应

目的研究人精子甘露糖受体与卵母细胞皮质颗粒反应的关系。方法以亲和层析法纯化的人精子甘露糖受体(purified mannose receptor,pMR)作用去透明带金黄地鼠卵,继而用罗丹明偶联的兵豆凝集素(Tetramethylrhodam ine Isothiocyanate Labeled Lentil,TRITC-LCA)标记。通过荧光显微镜观察被标记的皮质颗粒及卵母细胞表面甘露糖基的变化情况。结果pMR作用卵母细胞后,卵母细胞内的皮质颗粒减少且细胞表面的甘露糖基数量增加。结论pMR作用于卵母细胞表面后,可触发皮质颗粒反应,并使皮质颗粒部分内容物转移到卵母细胞表面。     

安络小皮伞中水溶性多糖的研究I．甘露聚糖FP1的纯化与结构研究

从安络小皮伞水溶性多糖中分离纯化得一甘露聚糖FP1。分子量约为24万。经红外光谱、+H-NMR谱和亲和层析指明为β-甘露聚糖。结构分析采用高碘酸氧化、Smith降解、完全甲基化GC、GC—MS与13C—NMR分析,分子的主链是芦β-D-(1→6)连接的甘露糖,支链为β-(1→3),β(1→2)甘露糖,分别连接在主链的O-3和。O-2上。     

牛体外受精的程序及超微结构研究

牛体外成熟卵母细胞体外受精后３小时精子入卵,８小时原核形成,２４小时的核多到卵中央。精子发生顶体反应的部位主要在透明表面,方式是顶体外膜自身囊经,发生顶体反应的粗子可斜向或垂直穿过透明带。卵丘细胞可吞噬大量精子,在阻多精受精中发挥重要作用。高尔基得合体,线料体、环状片层和滑面内质网等在原核周围形成细胞器集团。牛体外受精卵的雌雄原结合比体内受精的要延迟,胞吐到卵周隙中的皮质颗粒内容物扩散不完全。     

哺乳动物受精过程中精子和透明带的初级及次级结合

在哺乳动物的受精过程中,获能的精子穿过卵丘细胞层到达卵子透明带后,精子头部便结合在透明带的表面上.精子和透明带的结合可以分为初级结合和次级结合两个阶段,初级结合是指二者在顶体反应之前的结合,次级结合是指二者在顶体反应之后的结合.精子和透明带的结合是精子顶体反应和精子入卵的先决条件,是哺乳动物受精过程中非常重要的环节,涉及到精子以及透明带的多种蛋白质分子之间的相互作用.这方面的研究工作主要是以小鼠为实验对象进行的,在其他哺乳动物中也有很多报道.本文将主要以小鼠为例,概述哺乳动物受精过程中精子和透明带结合的分子机制,并兼述在二者的结合过程中透明带糖蛋白ZP3对精子顶体反应的诱导作用.     

小鼠精子睾丸后成熟过程中单克隆抗体MSH27抗原表位的显露

MSH2 7是一株抗小鼠精子的单克隆抗体 ,此抗体及其纯化的抗原分子在体外受精实验中均可以阻止精卵膜融合 ,因而推测其抗原在精卵膜融合过程中具有重要的作用 .这里探讨了抗原分子在精子睾丸后成熟过程中MSH2 7识别表位的显露条件 .MSH2 7抗原分子在睾丸中产生 ,定位于精子顶体后区的质膜上 ;但MSH2 7所识别的抗原表位只在顶体反应后的精子上表露 .在受精过程中 ,精子必须完成顶体反应并穿过卵子的透明带才能接近卵子质膜并与之融合 .同时还研究了顶体反应和穿透明带作用对MSH2 7表位显露的影响 .在附睾成熟过程中 ,随着精子在附睾中的转运 ,它们发生顶体反应的能力不断增加 ;精子抗原表位的显露呈现顶体反应依赖性 ,且两者呈现线性回归关系 .钙离子载体A2 3 187诱发顶体反应后 ,MSH2 7染色阳性的精子远远少于顶体反应的精子 ;但穿过透明带后绝大多数精子 ( 98% )呈现MSH2 7染色阳性 .总之 ,在睾丸后成熟 (附睾成熟、获能、顶体反应 )和精子穿透明带的过程中 ,对整个精子群体来讲 ,单抗MSH2 7所识别的抗原表位的显露和精子最终获得穿入卵子质膜的能力是同步发生的 .     

精子头后部质膜融合蛋白fertilin的研究进展

精子头后部(或赤道区)表面fertilin糖蛋白由相关的两个跨膜亚基α和β构成异二体形式。这两个亚基前体均含有金属蛋白酶区(met-alloprotease domain)和整联蛋白配体区(disin-tegrin domain),属于ADAMs gene家族。α和β前体分别在睾丸和附睾中从上述两区域连接处水解后,得到成熟型亚基。受精时,穿过透明带的顶体反应后精子借助β亚基的disintegrin肽段与卵母细胞表面的整联蛋白结合,同时fertilin结构发生变化,暴露出α亚基上潜在的融合肽段(90—111aa),并介导精子与卵母细胞发生质膜融合,最终完成受精过程。     

半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素可与甘露聚糖结合。本文以ＰＴＬ与＾１２５Ｉ标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对ＰＴＬ的糖结合活性的影响,并对ＰＴＬ的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或ＥＤＴＡ对其糖结合活性无显著影响,但Ｋ＾＋可明显增加ＰＴＬ的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制ＰＴＬ与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。ＰＴＬ专一与高甘露糖型糖链结合。     

半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素(PTL)可与甘露聚糖结合。本文以PTL与~(125)I标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对PTL的糖结合活性的影响,井对PTL的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或EDTA对其糖结合活性无显著影响,但K~+可明显增加PTL的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制PTL与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。PTL专一与高甘露糖型糖链结合。     

猪卵母细胞的体外受精及多精受精

对用于猪体外受精(IVF)的研究方法和技术,如传统的液滴IVF、透明带下注射精子受精(SUZI)、卵母细胞质内单精注射受精(ICSI)及细管IVF等进行了简述。与其它动物相比,进行猪卵的体外受精研究,多精受精现象特别明显。大量的研究表明,猪卵的多精受精不但与其品种特性有关,而且与卵母细胞成熟的程度、透明带的异常、受精时获能精子的浓度、输卵管分泌物、受精液蛋白添加成分、NaHCO3浓度、咖啡因、pH值以及温度等因素密切相关。     

哺乳动物透明带糖蛋白及其生物活性

透明带在哺乳动物的受精过程中发挥着重要作用,透明带化学成分及其生物活性的研究对于了解精卵识别、顶体反应的诱导等过程的分子机理具有重要意义．近10年来的研究表明透明带主要由糖蛋白（ZPGPs）组成,是在细胞质内合成后转移至透明带的.大多数动物的ZPGPs为4～5种,不同种类动物的ZPGPs的氨基酸序列存在高度同源性.在受精过程中,ZPGPs具有精子受体和诱导顶体反应的双重作用,ZPGPs含有N－连接和O－连接寡聚糖,这些寡糖链是ZPGPs行使生物活性不可缺少的部分．     

精子介导GFP基因在小鼠早期胚胎中的表达

利用 DIG 末端标记技术和免疫组化技术分析了小鼠精子体外结合内化外源DNA的效率。试验结果表明,不同小鼠个体的精子结合外源DNA的阳性率有明显差异（P<0.01）,平均为13%。利用考马斯亮蓝染色评价了小鼠精子顶体反应发生的情况,筛选出TYH培养液为较合适的体外受精液。利用小鼠体外受精技术,将体外转染GFP基因并获能的小鼠精子与成熟卵母细胞进行体外受精,受精卵进行体外培养,表达GFP胎的阳性率为4.7%。验证了精子介导制备转基因小鼠胚胎的可行性,并建立了利用精子载体法制备转基因小鼠胚胎的平台。     

哺乳动物精子中的ZP3结合蛋白研究进展

哺乳动物卵透明带糖蛋白ZP3(zona pellucida3)是介导精卵初级结合、诱发精子发生顶体反应的关键分子。目前已在精子中发现多种ZP3结合蛋白。95kD酪氨酸激酶受体可能通过其酪氨酸激酶活性介导ZP3诱发的顶体反应。β—1,4—半乳糖基转移酶与ZP3的糖基结合后,通过激活下游信号分子诱发顶体反应。精子蛋白sp56可能介导了顶体反应期间顶体基质与ZP之间的相互作用。透明带粘附素(zonadhesin)也是在顶体反应发生之后才与ZP发生相互作用。这些精子蛋白介导的下游信号事件将是下一步研究的热点。     

精子介导GFP基因在小鼠早期胚胎中的表达

利用DIG末端标记技术和免疫组化技术分析了小鼠精子体外结合内化外源DNA的效率。试验结果表明,不同小鼠个体的精子结合外源DNA的阳性率有明显差异(P<0.01),平均为13%。利用考马斯亮蓝染色评价了小鼠精子顶体反应发生的情况,筛选出TYH培养液为较合适的体外受精液。利用小鼠体外受精技术,将体外转染GFP基因并获能的小鼠精子与成熟卵母细胞进行体外受精,受精卵进行体外培养,表达GFP胚胎的阳性率为4.7%。验证了精子介导制备转基因小鼠胚胎的可行性,并建立了利用精子载体法制备转基因小鼠胚胎的平台。     

透明带的精子受体在ZP3的O—糖链上

哺乳动物的受精过程主要包括几个步骤 ,精子与卵子相遇后 ,精子结合到卵透明带上 ,引起精子的顶体反应 ,随后精子穿透透明带与卵细胞融合受精。精卵结合具有种属特异性 ,这种特异性结合是由精子表面的特异蛋白和卵透明带糖蛋白通过受体配体模式进行的。但是 ,卵透明带上的什么物质与精子识别和结合呢 ?近 30年来 ,这一领域的研究很活跃 ,也取得了很大的进展。1 .小鼠透明带糖蛋白ＺＰ3作为精子受体透明带是卵细胞膜外的一层特殊的非细胞结构 ,是精子与卵细胞识别和结合的部位。小鼠和其它研究过的哺乳类的透明带都是由少数几种糖蛋白组成 ,…     

精子功能相关的蛋白质调控受精过程的研究进展

哺乳动物的受精过程涉及到精子一系列的功能活动,如精子在雌性生殖道的运行、精子的超活化与获能、顶体反应以及精卵融合等。在精子经历的这一系列过程中,精子功能相关的蛋白质发挥着不可或缺的作用,这些蛋白分子的正常与否与雄性个体的繁殖力高低密切相关,因此精子功能相关的蛋白质能够作为评定哺乳动物精液受精能力的生物标记。文章主要对哺乳动物精子功能相关的蛋白质进行了综述,以阐述相关蛋白分子对精子运动活力、精子获能、顶体反应、透明带穿入和精卵融合等方面的重要作用以及这些蛋白分子在家畜遗传改良上的潜在应用。     

卵透明带ZP3的研究及其应用

卵透明带蛋白围绕在卵母细胞外,在受精过程中起着重要作用。ZP3蛋白是卵透明带蛋白家族中的重要成员,在功能上,ZP3作为初级精子受体,起始精卵结合和顶体反应。由于ZP3在受精中的重要作用,它成为免疫避孕的有效靶点。ZP3蛋白疫苗和DNA疫苗可以诱导机体产生较强的免疫反应,导致生育降低,同时带来一定程度的副作用。本文重点介绍了ZP3的免疫特性及其应用。     

SKW6细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶反义cDNA后对抗Fas抗体诱导的凋亡

鉴于蛋白质糖基化的重要生物学意义,以腺相关病毒为载体,把编码6A8 α-甘露糖苷酶的cDNA 3′端1358 bp的反向片段转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6,探讨6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制对抗Fas抗体诱导凋亡的影响.反义6A8转导成功及表达用Northern杂交及RT-PCR检测,6A8 α-甘露糖苷酶表达用Con A结合试验检测.Giemsa染色,AnnexinⅤ染色及梯形DNA电泳显示,Fas抗体能诱导SKW6细胞凋亡,但6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制的细胞对Fas抗体诱导的凋亡发生抵抗,而转导正义6A8或空载载体则无影响.6A8 α-甘露糖苷酶表达状况对SKW6细胞表面Fas分子表达没有影响.     

γ-微管蛋白在猪卵母细胞成熟和活化中的分布(英)

微管蛋白（tubulin）是一蛋白质超家族,其中α-,β-微管蛋白是主要的微管蛋白,而γ-微管蛋白主要在微管组装中起作用. 我们利用蛋白质印迹和激光共聚焦技术研究了γ-微管蛋白在猪卵母细胞成熟、受精和活化中的分布. γ-微管蛋白存在于猪卵母细胞中,并且在减数分裂成熟各个时期的量保持不变. 它聚集在微管上,特别是中期纺锤体的两极和后末期的中板. 体外受精和孤雌活化后,γ-微管蛋白聚集在雌雄原核的周围.另外它也存在于精子的顶体帽和颈部.在早期卵裂中,γ-微管蛋白聚集在胚胎的细胞核周围.实验结果表明,γ-微管蛋白在猪卵母细胞、精子和胚胎的微管组装中起重要的调节作用,在猪受精过程中,精子和卵子都向受精卵贡献中心体物质.     

γ-微管蛋白在猪卵母细胞成熟和活化中的分布

微管蛋白(tubulin)是一蛋白质超家族,其中α-,β-微管蛋白是主要的微管蛋白,而γ-微管蛋白主要在微管组装中起作用. 我们利用蛋白质印迹和激光共聚焦技术研究了γ-微管蛋白在猪卵母细胞成熟、受精和活化中的分布. γ-微管蛋白存在于猪卵母细胞中,并且在减数分裂成熟各个时期的量保持不变. 它聚集在微管上,特别是中期纺锤体的两极和后末期的中板. 体外受精和孤雌活化后,γ-微管蛋白聚集在雌雄原核的周围.另外它也存在于精子的顶体帽和颈部.在早期卵裂中,γ-微管蛋白聚集在胚胎的细胞核周围.实验结果表明,γ-微管蛋白在猪卵母细胞、精子和胚胎的微管组装中起重要的调节作用,在猪受精过程中,精子和卵子都向受精卵贡献中心体物质.