非洲紫罗兰叶片体细胞胚培养及快繁技术研究

以非洲紫罗兰叶片为材料进行胚状体诱导及快繁技术研究.结果表明:.在MS NAA0.1mg/L BA0.1 mg/L 2,4-D1.0 mg/L的培养基上培养15d利于诱导胚性细胞分化,起始黑暗培养5～10d可提高胚性细胞分化率;在MS BA0.05～1mg/L的培养基上可诱导胚状体大量发生;在MS NAA0.1mg/L十BA0.1 mg/L的培养基上能够获得茎芽快速增殖;在1/2MS NAA0.01mg/L的培养基上可以生根.     

狗牙根颖果胚性愈伤组织的诱导和胚性细胞的超微结构及植株再生

以普通狗牙根[Cynodon dacylon(L.)Pers.cv.'Suncitv']颖果为外植体,以MS为基本培养基,外加浓度在2.0～6.0mg/L的2,4-D,能高频率地诱导出高质量的胚性愈伤组织,其中以4.0 mg/L为最佳.胚性愈伤组织最佳继代及分化的培养方法为:用MS 2,4-D 4.0mg/L继代1～2次,然后转入1/2 MS 2,4-D 2.0 mg/L中继代1～2次,再在无激素的1/2MS中光照培养10 d,最后在MS 6-BA 3.0 mg/L中诱导分化,分化成苗率达31.7%.经电镜观察发现,胚性愈伤组织结构紧密,细胞较小,内容物丰富,而非胚性愈伤组织结构疏松,细胞巨大,内含一大液泡,几无细胞器.     

云南大叶茶体细胞胚发生及体细胞胚苗形成体系的建立

利用云南大叶茶(Camellia sinensis var.assamica Kitamura)胚性细胞系(CL_1)中悬浮培养物,建立了高频率同步化体细胞胚发生及体胚苗形成体系。以改良的MS为基本培养基,将CL_1中培养物由液体保持培养基(0.1mg/L 2,4-D 0.5mg/L 6-BA)继代转入液体诱导培养基(0.05mg/L 2,4-D 0.50mg/L6-BA),暗培养诱导28d,转入不含任何激素的液体分化培养基中再培养28d,获得了不同发育时期的体细胞胚,其发生频率为81.5％。不同发育时期的体细胞胚用不同目的细胞筛收集,在液体生长培养基(1/2 MS 1.0mg/L GA_3 0.5mg/L 6-BA)中培养发育成熟。ABA有利于高质量体细胞胚的形成。20～70月大小的体细胞胚在固体生长培养基中成苗转换率为75％。在液体悬浮培养条件下观察记录了体细胞胚发育过程,证实其过程与合子胚的形态发生过程相似。     

江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋玻璃化超低温保存

为长期安全保存江西铅山红芽芋种质资源,本文以江西铅山红芽芋的胚性愈伤组织为对象,研究了包埋玻璃化冻存过程中各因素对细胞活力和愈伤组织成活率的影响,优化建立了江西铅山红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存体系。将约0.2 g胚性愈伤组织块包埋成海藻酸钙凝胶珠后,在25℃下转入MS+2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+0.75 mol/L蔗糖的培养基中于14 h/d光周期下预培养1 d;预培养后的胚性愈伤组织块用2 mol/L甘油和0.4 mol/L蔗糖的混合物在25℃下装载40 min;采用PVS2在25℃下脱水30 min,更换PVS2后直接投入液氮保存1 d;再将胚性愈伤组织块置于37℃恒温水浴中化冻3 min,然后用MS+2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+1.2 mol/L蔗糖的液体培养基洗涤3次,每次10 min;洗涤后的胚性愈伤组块转入MS+2 mg/L TDZ+1mg/L NAA固体培养基上先暗培养7 d再转到14 h/d光周期中培养。7 d后胚性愈伤组织块开始恢复生长,并且在30 d内分化出胚状体;将胚状体再次转入MS+2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA固体培养基上,60 d后形成完整的植株。红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存后的平均成活率约为60%,并且红芽芋胚性愈伤组织冻后再生苗没有发生形态性状和染色体数目的变异,此结果为长期安全保存江西铅山红芽芋种质资源奠定了良好的基础。     

白杄体细胞胚胎发生及其植株再生

白杄(Picea meyeri Rehd.et Wils.)的成熟胚在4～6℃低温下保存1个月后,接种于改良LP 2mg/L 2,4-D 1mg/L 6-BA的培养基上,黑暗条件下培养1个月便可产生白色半透明的胚性愈伤组织。整体染色封片观察表明,胚性愈伤组织由很多很长的胚柄细胞及其顶端的胚细胞团组成,这种愈伤组织培养物称为胚性胚柄团。胚性胚柄团在MS 1mg/L 2,4-D 1mg/L KT的继代培养基上黑暗条件下可保持旺盛的增殖能力和分化潜力。当胚性胚柄团转到MS 5mg/L ABA 5mg/L AgNO_3的分化培养基上,1个月后可产生大量正常的体细胞胚。体细胞胚成熟以后转到含0.5％活性炭的无激素1/2MS基本培养基上约40d后可长出1.5～2.5cm的根,约60d后可长出真叶。光、ABA、蔗糖及AgNO_3浓度是影响体细胞胚发生的主要因素。     

枸杞花药愈伤组织悬浮培养条件下胚状体发生与植株再生

采用枸杞花药进行离体培养,建立细胞系,诱导植株再生,结果在含不同激素的4种培养基上都诱导出了愈伤组织,诱导率为17%～169%。愈伤组织在MS 2,4D05mg/L的固体培养基上,经2～3次培养后,获颗粒状胚性愈伤组织,颗粒状胚性愈伤组织转入含相同成分的液体培养基中进行振荡培养,24h后获得大量单细胞。单细胞液经过多次继代培养,建立起稳定的悬浮系。悬浮细胞在液体培养基中培养8～10d可获得含有大量胚状体的愈伤组织块,收集悬浮培养物转移到MS 6BA02mg/L的固体培养基上,胚状体能够萌发形成大量绿色小芽,小芽转入生根培养基(MS NAA02mg/L)中20d后得到完整植株。植株根尖细胞经细胞学鉴定为单倍体。     

胚龄和激素对小麦幼胚组织培养的影响

以扬麦158为试验材料,通过田间取样室内培养的方法研究了胚龄和激素对小麦幼胚组织培养的作用。结果表明,幼胚组织培养最适宜的胚龄为14—16d;适宜的2,4-D浓度为1．5-2．5mg/L;适宜的IAA浓度为2．0-3．0mg/L;适宜的6-BA浓度为0．1-0．8mg/L;适宜的KT浓度为0．5—1．5mg/L。因此,胚龄和激素对于小麦幼胚组织培养具有明显的调节作用．在组织培养实践中,充分认识和综合协调这些因素对小麦幼胚组织培养的作用,可以提高组织培养效率,使其更加有利于生物学研究、遗传转化和快速育种等工作。     

枸杞原生质体培养及高效成株体系的建立

由枸杞髓部组织诱导出胚性愈伤组织,并由此愈伤组织建立起稳定的细胞悬浮系。从悬浮细胞游离的原生质体在改良KM培养基(1.5 mg/L 6_BA,0.5 mg/L NAA和0.5 mg/L 2,4_D)中进行液体浅层培养,3～4 d后出现第一次分裂,第7 d统计分裂频率为50.3%,15 d左右可形成细胞团,3～4周后形成肉眼可见的愈伤组织,愈伤组织植板率为1.25%。将细胞团转移到液体分化培养基(MS+6_BA 1.5 mg/L+2,4_D 0.2 mg/L) 8～10 d可形成大量胚状体,及时将胚性愈伤组织块转移到固体分化培养基上(MS+6_BA 0.2 mg/L),可形成大量绿芽,分化率54.17%。绿芽在生根培养基（MS+NAA 0.2 mg/L）可形成完整植株,移栽后成活良好。     

苎麻体细胞胚胎发生研究初报

将苎麻“浏阳大叶绿”的子叶培养在附加0.55mg/L CPA、 0.05 mg/L BR 的CXW培养基上,可获得淡黄色或浅灰绿色的颗粒状愈伤组织。将愈伤组织转移至附加0.1 mg/L CPA、 0.05 mg/L NAA 、1.5 mg/L ZT的CXW培养基上继代;颗粒状结构非常明显。继续培养在添加2 mg/L Met, 3 g/L YE 的上述继代培养基上,可分化出一些相互独立的胚状体,继而发育成为胚状体幼苗。     

玉米幼胚高效再生系统的建立

建立了玉米幼胚高效再生系统.经研究发现,苏玉1号、农大3138、农大108的幼胚培养在含有2,4-D(2 5 mg/L)的IM培养基上后,大多数幼胚能愈伤化并增大,形成基部相连、上部分开的微芽结构;微芽结构在转移到BM培养基上后,形成小植株;进一步转移到RM培养基上,它们长根并形成完整植株.玉米幼胚高效再生植株与下列因素有关玉米基因型、幼胚大小、幼胚长芽至分化时间、6-BA、IBA、Gelrite.不同品种玉米再生能力有显著差异,幼胚大小在1～2mm之间再生能力强,幼胚长芽至分化时间4～6 d最好.激素6-BA浓度在0.5～0.6 mg/L之间有利于微芽形成小植株,IBA浓度在0.6～1 0 mg/L促进生根.Gelrite可代替琼脂粉用于玉米生根.     

姜花属种间杂交胚拯救研究

为提高姜花属种间杂交胚挽救中幼胚萌发率,以白姜花×金姜花的胚珠为试材,研究不同胚珠发育时期、不同培养基及低温处理果实对幼胚萌发率的影响.结果表明,白姜花×金姜花胚挽救的适宜培养基是MS+0.1 mg/L BA十0.1 mg/L NAA;接种时期以60 d的幼胚培养效果最佳;低温处理果实3～6 d能有效提高幼胚的萌发率.     

沙打旺悬浮培养细胞原生质体的体细胞胚胎发生再生植株(英文)

以继代培养5—24代的沙打旺(Astra-galus adsurgens Pall.)胚性悬浮系为材料,从生长4d的细胞培养物中可游离出大量有活力的原生质体。细胞预质壁分离或低温预处理对原生质体得率和活力没有影响,但可提高原生质体培养的植板率。预处理的原生质体培养在NH_4NO_3浓度降至2.5mmol/L,并附加0.5mg/L NAA、1.0mg/L 2,4-D、0.7mg/L BA和0.4mol/L葡萄糖的KM8P培养基中,经持续分裂形成细胞克隆,植板率高达16%—20%。细胞克隆在附加1.0mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MS培养基中增殖后,转至含0.1mg/L NAA和1.0mg/L BA的MS分化培养基中可形成体细胞胚,平均体细胞胚发生频率约为40%,每个克隆产生20—40个体细胞胚。在无激素的1/2MS培养基中,体细胞胚发育成形态正常和染色体数稳定的小植株。     

无核香味葡萄胚挽救育种研究

为创制无核香味葡萄新种质,该研究以7个无核葡萄品种为母本,4个玫瑰香味品种为父本,配置了9个杂交组合。田间杂交后,通过胚挽救技术离体培养杂种胚珠,使胚珠中幼胚继续发育,继而在幼胚萌发成苗后利用无核标记对F1代株系进行无核性状的早期检测,同时对杂种幼苗进行温室炼苗,最终移栽大田。结果表明:(1)利用胚挽救技术获得365个胚挽救株系,移栽大田并成活182株杂种苗。(2)对其中72个株系利用无核基因探针GSLP1-569与无核分子标记SCF27-2000进行无核性状检测,分别检测出8个和38个杂种后代携带无核特异性条带,初步确定为无核株系。(3)杂交组合中以‘红宝石无核’、‘火焰无核’、‘昆香无核’为母本的组合成苗率相对较高,较适宜做母本;香味品种中‘玫瑰香’更适合做为父本选育香味无核种质。(4)以‘火焰无核’和‘昆香无核’为母本的杂交组合分别在授粉后的43d和51d采样,胚发育率(6.96%~8.54%和16.92%~18.13%)和成苗率(6.45%和8.75%~10%)较高;‘红宝石无核’ב玫瑰香’、‘莫莉莎无核’ב玫瑰香’和‘波尔莱特’ב玫瑰香’3个组合分别在授粉后59~60d、54d、52d采样,胚挽救育种效果较好;杂交组合‘克瑞森无核’ב巨玫瑰’和‘奇妙无核’ב昆香无核’胚败育时期分别为授粉后39d和48d。(5)幼胚发育至子叶型胚时最易成苗,延长胚珠离体暗培养时间显著增加了畸形胚比率。研究认为,葡萄胚挽救育种过程中,胚珠离体培养时间在8~10周为宜。     

不同激素对花生离体分化的影响

对TDZ和2,4-D等激素在花生成熟胚外植体分化中的影响进行了研究.结果表明,花生成熟胚3～5 d龄实生苗的幼叶和胚轴在低浓度TDZ的诱导下,可分化产生高频不定芽和少量体细胞胚,转到无激素MS培养基或MS BA 0.5 mg/L NAA 0.4 mg/L的培养基后形成丛生苗.丛生苗分离后转入含1/2 MS(大量元素) IBA 0.4 mg/L的培养基中诱导生根,可形成完整的再生植株.幼叶分化率高于胚轴,但胚轴分化成苗速度快.无菌水浸泡16～24 h的胚轴在5～ 30 mg/L 2,4-D的诱导下,分化产生低频不定芽;而胚叶则产生高频体细胞胚,但畸形较严重.     

白及种子萌发与快速繁殖技术的研究

将不同胚龄的白及种子接种到不同培养基中进行培养,对白及种子萌发率、萌发时间、丛生芽增殖、生根等方面进行了研究。结果表明:白及种子萌发率与其胚龄及有胚率成正相关,萌发时间则与胚龄及有胚率成负相关;胚龄16周的种子在1 g/L花宝1号 2 g/L花宝2号的培养基上萌发率可达84%;胚龄等于或大于20周的种子萌发率不受培养基成分的影响,均可达100%,萌发时间只需7 d;丛生芽增殖的最佳培养基为1/2 MS 4.0 mg/L6-BA 0.2 mg/L NAA 100 g/L CM,其增殖倍数达4.41倍;诱导生根较好的培养基为1/2 MS 0.2 mg/L NAA,生根率达90%。     

悬浮培养中旱芹体细胞胚发生的工艺条件研究

以旱芹 (Apium graveolens L.)下胚轴切段 (5～ 1 0 mm )为外植体 ,在 MS 1 .0 mg/L 2 ,4- D培养基中诱导愈伤组织 ,经几次固体—液体交替培养筛选后 ,将此胚性愈伤组织接种于 MS液体分化培养基(MS 0 .5mg/L KT 50 0 mg/L CH 50 0 mg/L Prolin)中 ,就摇床转速、接种量、初始 p H的调控等工艺条件对体细胞胚诱导的最佳条件进行了研究。结果表明 ,较佳的培养条件为 :摇床转速 1 0 0～ 1 50r/min;初始细胞密度和 p H分别为 2 .0 % (鲜重 )及 5.5左右。最后获得正常子叶期体细胞胚数为 1 30个 /m L。     

无核白葡萄胚挽救育种技术研究

无核白葡萄在授粉后20－50d,将胚珠接种在含不同激素的Nitsch培养基上,培养80－90d后转入胚荫发培养基中,待胚萌发20d左右,再转入成苗培养基中使其发育成正常幼苗。结果表明,胚萌发适宜的培养基是附加0．5mg/L IAA,1.5mg/L BA和0.5mg/LGA3的Nitsh培养基,在所试10个接种时期中,无授粉后39d胚的发育率最高。     

小麦遗传转化受体系统建立的研究

选用‘小偃22’和‘宁春16’小麦品种的成熟胚和幼胚进行培养,研究不同种类的胚和培养因子对愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,幼胚和成熟胚的愈伤组织诱导率无明显差异,但较高浓度的2,4-D有利于成熟胚的诱导,而幼胚培养时2,4-D浓度的影响效果因品种而异;两种外植体分化率的高低与KT/IAA的配比均有密切关系,但高浓度的激素水平不利于成熟胚的分化;诱导培养基中低浓度的2,4-D有利于所诱导的愈伤组织的分化。同时,在诱导培养基中添加低浓度的KT能显著提高两品种成熟胚愈伤组织的分化率;各种培养基处理与品种间都存在显著的互作效应,‘小偃22’成熟胚培养的最佳培养基组合为MSD 3.0 mg/L 2,4-D和MSD 0.5 mg/LIAA 1.0 mg/L KT,幼胚培养为MSD 4.0 mg/L 2,4-D和MSD 0.5 mg/L IAA 1.0 mg/L KT;‘宁春16’成熟胚培养为MSD 4.0 mg/L 2,4-D和MSD 1.0 mg/L IAA 1.0 mg/L KT,幼胚培养时为MSD 1.0 mg/L 2,4-D和MSD 2.0 mg/L IAA 2.0 mg/L KT。     

槐树子叶组织培养中的形态发生研究

槐树子叶在MS附加0.1～5 mg/L BA 和0.1—5 mg/L 2,4-D的培养丛上培养两周,获得了灰色疏松型及白、绿色紧密型两种类型的愈伤组织。后者经培养产生不定芽并再生植株。子叶切块在MS 附加0.1～8 mg/L 2,4-D等培养基上培养3周,在切口处形成愈伤组织的同时,由其表面直接分化产生胚状体。组织学观察表明,胚状体来源于子叶的表皮及叶肉细胞,胚状体产生通过单细胞起源及多细胞出芽两种方式发生。胚状体发育依次通过球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶胚等阶段形成再生植株,其发育过程与合子胚相似。     

兰属种间杂交胚拯救研究初报

取兰属大花蕙兰为母本、墨兰为父本进行种间杂交并进行杂种胚拯救研究。结果显示,子房离体培养明显优于胚珠离体培养,是胚抢救培养的有效手段。不同取材时间及在不同培养基中子房培养情况差异明显。在授粉后60 d子房离体培养即可获得成功,但以授粉后90 d子房离体培养最佳,萌发率高,达80%。子房培养的最适培养基为VW+BA 0.2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蛋白胨3 g/L+水解酪蛋白500 mg/L+椰子汁10%。