肝癌中丙酮酸激酶同工酶的研究——Ⅰ.丙酮酸激酶和线粒体对ADP的竞争

以果糖-1,6-二磷酸(FDP)为底物,正常小鼠肝匀浆无克奈特瑞效应;但以磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)为底物,则在正常小鼠肝中也出现此效应;而小鼠Hep A 腹水肝癌(简称Hep A)细胞匀浆中由这两种底物所引起的此效应均十分明显。Hep A中,丙酮酸激酶(PyK)的活性为正常小鼠肝的4.7倍。在研究PyK 和克奈特瑞效应关系时发现:1.PyK 的底物PEP 可抑制线粒体中琥珀酸、丙酮酸和NADH 的氧化,而琥珀酸和NADH 又可抑制PEP 的酵解;2.加入从Hep A中纯化的K 型PyK,可抑制琥珀酸的氧化,加强PEP 对琥珀酸氧化的抑制,且其对FDP 氧化的抑制率和K 型PyK 的加入量成正相关;3.用L-苯丙氨酸抑制PyK 后,可减小PEP 对琥珀酸氧化的抑制,并使PEP 的酵解降低;4.加入氧化磷酸化的解联剂2,4-二硝基酚(DNP),可使PEP 的酵解随DNP 浓度的增加而增加;(5)加入正常小鼠肝的线粒体,可使正常小鼠肝匀浆的呼吸增高,酵解降低;并使Hep A 的克奈特瑞效应逆转。此外,加入外源性的ADP 既可促进呼吸,又可促进酵解;加入可消耗ADP 的磷酸肌酸和肌酸激酶,则使呼吸和酵解均降低。K 型PyK 加强PEP 对琥珀酸氧化的抑制效率也和ADP 的浓度密切相关。这些实验结果都证明:胞液中的PyK 和线粒体之间存在着对ADP 的竞争。并且胞液中增高的PyK 对ADP 的有效的夺取,很可能是导致癌瘤中克奈特瑞效应的一个重要机理。     

肝癌中丙酮酸激酶同工酶的研究——Ⅱ.丙酮酸激酶同工酶与克奈特瑞效应的关系

本文用免疫测定法发现,在Hep A腹水肝癌(简称Hep A)中,丙酮酸激酶(PyK)同工酶谱发生明显改变。正常小鼠肝以L型为主,K型只占总活性的20%。饥饿24小时后,L型活性降低,以致K型相对增高至30%左右。在Hep A中,不论饥饿与否,K型PyK要比正常小鼠肝的活性高出20余倍,占总活性的90%以上。L型PyK对ADP表现为米孟氏动力学,S_(0.5)=2.865mM;而Hep A的K型PyK对ADP则呈正协同的别构动力学,Hill氏系数=1.40,S_(0.5)=0.741mM。故K型PyK对ADP的亲和力大于L型PyK。并且K型PyK较L型PyK不易受其产物ATP的反馈抑制,因而大大地增强了Hep A胞液中的K型PyK同线粒体争夺ADP的能力。PyK同工酶谱的改变和这两型PyK动力学上的差别,很可能是癌瘤中出现克奈特瑞效应的又一重要机理。不论在正常小鼠肝还是Hep A中,3-磷酸甘油酸激酶(3PGAK)的总活性均高于PyK,3PGAK不是酵解通路的限速酶。Hep A中3PGAK的活性仅比正常的高出0.7倍,未肯定有同工酶,所以它和癌瘤中出现的克奈特瑞效应关系不大。     

肝癌中丙酮酸激酶同工酶的研究——Ⅱ.丙酮酸激酶同工酶与克奈特瑞效应的关系

本文用免疫测定法发现,在Hep A 腹水肝癌(简称Hep A)中,丙酮酸激酶(PyK)同工酶谱发生明显改变。正常小鼠肝以L 型为主,K 型只占总活性的20%。饥饿24小时后,L 型活性降低,以致K 型相对增高至30%左右。在Hep A 中,不论饥饿与否,K 型PyK 要比正常小鼠肝的活性高出20余倍,占总活性的90%以上。L 型PyK 对ADP 表现为米孟氏动力学,S_(0.5)=2.865mM;而Hep A 的K 型PyK 对ADP 则呈正协同的别构动力学,Hill 氏系数=1.40,S_(0.5)=0.741mM。故K 型PyK 对ADP的亲和力大于L 型PyK。并且K 型PyK 较L 型PyK 不易受其产物ATP 的反馈抑制,因而大大地增强了Hep A 胞液中的K 型PyK 同线粒体争夺ADP 的能力。PyK 同工酶谱的改变和这两型PyK 动力学上的差别,很可能是癌瘤中出现克奈特瑞效应的又一重要机理。不论在正常小鼠肝还是Hep A 中,3-磷酸甘油酸激酶(3 PGAK)的总活性均高于PyK,3PGAK 不是酵解通路的限速酶。Hep A 中3PGAK 的活性仅比正常的高出0.7倍,未肯定有同工酶,所以它和癌瘤中出现的克奈特瑞效应关系不大。     

猪L型、R型丙酮酸激酶同工酶动力学的进一步研究

本文对纯化的猪L型、R型丙酮酸激酶(PyK)同工酶的效应剂动力学作进一步研究。结果如下:1.FDP能激活两型PyK同工酶,使两型PyK对PEP的正协同别构效应降低(n_H减小),亲和力增高(S_(0.5)降低)但不影响两型PyK对ADP的Km。2.Mg~(++)对两型PyK同工酶也有相似的激活作用。3.丙氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸及ATP对两型PyK均有抑制作用,两酶相应的抑制百分率无显著差异。三种氨基酸均为两型PyK底物PEP的K型抑制剂,ATP则为两型PyK底物PEP的V型抑制剂。4.上述三种氨基酸对L型和R型PyK的抑制均呈别构负协同动力学。n_H均小于1,两型PyK相应的抑制常数K_i比较接近。还对PyK加热后的脱敏及PyK的反应机制作了探讨。     

大鼠丙酮酸激酶同工酶催化性质的比较研究

利用DEAE纤维素柱层析分离大鼠组织匀浆105,000g上清中的丙酮酸激酶(PyK)同工酶,发现肝和肾中存在L及K两型PyK,肝中以L型为主,而肾中以K型较多,L:K的平均活性比值分别为6.07及0.248。但骨胳肌中只有M型。用聚丙烯酰胺凝胶板电泳也可获得相似的同工酶谱。用硫酸铵沉淀结合层析又从大鼠红细胞中提取了R型PyK,与上述三型一起,进行了催化性质的比较研究。结果如下: 1.K型对热极不稳定,而M型对热最为稳定。2.L型和K型可利用GDP代替ADP作为底物,但GDP作为底物时的酶活性远小于ADP作底物时的活性。M型利用GDP的能力很小,而R型几乎可忽略不计。3.某些氨基酸可抑制PyK,K型PyK对氨基酸的抑制最为敏感,可使其抑制的氨基酸最多,而M型最不敏感,在测定的12种氨基酸中仅受苯丙氨酸抑制,L型与R型介于上述两型之间,可使它们抑制的氨基酸种类相似。4.氨基酸对PyK的抑制作用与它们代谢途径中成糖或成酮的关系尚不明确,而与其结构有密切关系。能抑制PyK的氨基酸主要是非极性氨基酸,如丙、正丁、脯、苯丙氨酸等,当这四种氨基酸的侧链羟化成相应的丝氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸或酪氨酸后,其抑制作用明显减弱或消失。5.小侧链的脂肪族氨基酸(如半胱、丙、正丁)对L型PyK的抑制作用强于大侧链的芳香族氨基酸(苯丙、酪);但对K型PyK的抑制却弱于大侧链芳香族氨基酸。并且L型对小侧链氨基酸的敏感性大于K型,而对大侧链氨基酸的敏感小于K型。6.丙氨酸对L、R、K三型PyK的抑制作用与其α-氨基和直链结构有密切关系,其中α-氨基尤为重要。7.果糖-1,6-二磷酸(FDP)能激活R及K型PyK,当底物PEP处于低浓度时,尚可激活L型。FDP还能逆转各种氨基酸对四型PyK同工酶的抑制作用,其中对R及K型的逆转效果较大。FDP对各种氨基酸抑制的逆转效应并不相同。8.丝氨酸可显著激活K型PyK,也可逆转氨基酸对K型PyK的抑制作用,其逆转效率仍因氨基酸而异,但其激活作用与FDP不能相加。对上述结果作了讨论,认为这些PyK同工酶催化性质的差异可有助于鉴定未知样品中的同工酶类型。还提出一个PyK同工酶上有两类氨基酸结合点的假说。     

大鼠丙酮酸激酶同工酶催化性质的比较研究

利用DEAE 纤维素柱层析分离大鼠组织匀浆105,000g 上清中的丙酮酸激酶(PyK)同工酶,发现肝和肾中存在L 及K 两型PyK,肝中以L 型为主,而肾中以K 型较多,L:K 的平均活性比值分别为6.07及0.248。但骨胳肌中只有M 型。用聚丙烯酰胺凝胶板电泳也可获得相似的同工酶谱。用硫酸铵沉淀结合层析又从大鼠红细胞中提取了R 型PyK,与上述三型一起,进行了催化性质的比较研究。结果如下:1.K 型对热极不稳定,而M 型对热最为稳定。2.L 型和K 型可利用GIP 代替ADP 作为底物,但GDP 作为底物时的酶活性远小于ADP 作底物时的活性。M 型利用GDP 的能力很小,而R 型几乎可忽略不计。3.某些氨基酸可抑制PyK,K 型PyK 对氨基酸的抑制最为敏感,可使其抑制的氮基酸最多,而M 型最不敏感,在测定的12种氨基酸中仅受苯丙氨酸抑制,L 型与R 型介于上述两型之间,可使它们抑制的氨基酸种类相似。4.氨基酸对PyK 的抑制作用与它们代谢途径中成糖或成酮的关系尚不明确,而与其结构有密切关系。能抑制PyK 的氨基酸主要是非极性氨基酸,如丙、正丁、脯、苯丙氨酸等,当这四种氨基酸的侧链羟化成相应的丝氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸或酪氨酸后,其抑制作用明显减弱或消失。5.小侧链的脂肪族氨基酸(如半胱、丙、正丁)对L 型PyK 的抑制作用强于大侧链的芳香族氨基酸(苯丙、酪);但对K 型PyK 的抑制却弱于大侧链芳香族氮基酸。并且L 型对小侧链氨基酸的敏感性大于K 型,而对大侧链氨基酸的敏感小于K 型。6.丙氨酸对L、R、K 三型PyK 的抑制作用与其α-氨基和直链结构有密切关系,其中α-氨基尤为重要。7.果糖-1,6-二磷酸(FDP)能激潘R 及K 型PyK,当底物PEP 处于低浓度时,尚可激活L 型。FDP 还能逆转各种氨基酸对四型PyK 同工酶的抑制作用,其中对R 及K 型的逆转效果较大。FDP 对各种氮基酸抑制的逆转效应并不相同。8.丝氨酸可显著激活K 型PyK,也可逆转氨基酸对K 型PyK 的抑制作用,其逆转效率仍因氪基酸而异,但其激活作用与FDP 不能相加。对上述结果作了讨论,认力这些PyK 同工酶催化性质的差异可有助于鉴定未知样品中的同工酶类型。还提出一个PyK 同工酶上有两类氨基酸结合点的假说。     

肝癌中丙酮酸激酶同工酶的研究——Ⅲ.正常小鼠肝和Hep A腹水肝癌中K型丙酮酸激酶同工酶的比较研究

从正常小鼠肝和Hep A 腹水肝癌中纯化了K 型丙酮酸激酶(PyK)。当比较这两种不同来源的PyK 时,发现下列各项指标均极为接近或完全相同。这些指标是:1.在磷酸纤维素柱上被相近浓度的KCl 洗脱下来。2.聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率完全一致,两者混合样品在不同的电泳条件下均不能分开。3.两酶在50℃保温时的失活速度基本相同,半失活时间均为11.5分。4.两酶的pH 活性曲线几乎完全重合,其最适pH 均为7.4。5.六种氨基酸中的每一种对两酶的抑制百分率十分接近。Mg~( )或丝氨酸对两酶的激活也基本一致。6.两酶对底物PEP 和ADP 均呈正协同别构效应,不论PEP 或ADP 的Hill 氏系数(η_H)S_(0.5)和K_(0.5s)也十两分接近。7.苯丙氨酸对两酶均呈别构抑制效应,其η_H或表观Ki 也基本相同。8.ATP 对酶均呈别构抑制效应,两酶的Hill 氏曲线互相平行,且几乎重合。(9)用葡聚糖G-200凝胶过滤法测得正常小鼠肝和Hep A 中K 型PyK 的分子量分别为224,000及210,000道尔顿,其差别在实验误差范围内。(10)用双相免疫扩散鉴定,两酶都能和兔抗大鼠M 型PyK 抗体起沉淀反应,且沉淀线完全吻合。总结上述结果,证明肝癌细胞中K-PyK 与正常小鼠肝脏中的K-PyK 具有相同的性质,表现相似的动力学,提示它们很可能具有相同的结构,也即可能是同一种酶。癌细胞的基因表达产物既与正常相同,说明癌细胞中PyK 同工酶活性的改变可能是由于基因调控的失常而不是结构基因本身DNA 中碱基顺序的改变。     

肝癌中丙酮酸激酶同工酶的研究——Ⅲ.正常小鼠肝和Hep A腹水肝癌中K型丙酮酸激酶同工酶的比较研究

从正常小鼠肝和Hep A腹水肝癌中纯化了K型丙酮酸激酶(PyK)。当比较这两种不同来源的PyK时,发现下列各项指标均极为接近或完全相同。这些指标是:1.在磷酸纤维素柱上被相近浓度的KC1洗脱下来。2.聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率完全一致,两者混合样品在不同的电泳条件下均不能分开。3.两酶在50℃保温时的失活速度基本相同,半失活时间均为11.5分。4.两酶的pH活性曲线几乎完全重合,其最适pH均为7.4。5.六种氨基酸中的每一种对两酶的抑制百分率十分接近。Mg~( )或丝氨酸对两酶的激活也基本一致。6.两酶对底物PEP和ADP均呈正协同别构效应,不论PEP或ADP的Hill氏系数(η_H)S_(0.5)和K_(0.5s)也十两分接近。7.苯丙氨酸对两酶均呈别构抑制效应,其η_H或表观Ki也基本相同。8.ATP对酶均呈别构抑制效应,两酶的Hill氏曲线互相平行,且几乎重合。(9)用葡聚糖G-200凝胶过滤法测得正常小鼠肝和Hep A中K型PyK的分子量分别为224,000及210,000道尔顿,其差别在实验误差范围内。(10)用双相免疫扩散鉴定,两酶都能和兔抗大鼠M型PyK抗体起沉淀反应,且沉淀线完全吻合。总结上述结果,证明肝癌细胞中K-PyK与正常小鼠肝脏中的K-PyK具有相同的性质,表现相似的动力学,提示它们很可能具有相同的结构,也即可能是同一种酶。癌细胞的基因表达产物既与正常相同,说明癌细胞中PyK同工酶活性的改变可能是由于基因调控的失常而不是结构基因本身DNA中碱基顺序的改变。     

氧化磷酸化作用和有关问题的研究 Ⅳ.内源还原烟酰胺核苷酸对琥珀酸氧化的抑制

鼠肝线粒体加入Amytal与异柠檬酸或柠檬酸后琥珀酸的氧化即受到抑制。琥珀酸氧化的抑制不能为DNP、双香豆素或砷酸盐所解除。其它与烟酰胺核苷酸有关的脱氢酶的底物如α-酮戊二酸、苹果酸、丙酮酸、谷氨酸、β-羟基丁酸等与Amytal同时加入时并不引起琥珀酸氧化的抑制。当琥珀酸氧化被Amytal加异柠檬酸抑制后加入维生素K_3或α-酮戊二酸与氯化铵抑制即被解除,说明琥珀酸氧化的抑制可能与异柠檬酸脱氢生成的NADPH有关。在不加ADP与无机磷酸盐的条件下,高浓度的Amytal激活琥珀酸的氧化。但被Amytal激活的琥珀酸的氧化也被异柠檬酸或柠檬酸所抑制。     

氧化磷酸化作用的研究 Ⅱ.2,4-二硝基苯酚对琥珀酸氧化抑制效应的解除

进一步研究DNP对大白鼠肝脏綫粒体琥珀酸氧化的激活和抑制,发現当琥珀酸氧化已被DNP抑制时琥珀酸脫氫酶并沒有受到明显的抑制。DNP对琥珀酸氧化的抑制可以被α-酮戊二酸、(?)柠檬酸、柠檬酸、丙酮酸、β-羟基丁酸等解除。α-酮戊二酸的解除作用与底物水平磷酸化作用无关,但与脫氫过程有密切关系;当加入0.2mM亚砷酸鈉时,α-酮戊二酸不再能使呼吸恢复。谷氨酸解除DNP对琥珀酸氧化抑制的作用不受天門冬氨酸α-酮戊二酸轉氨酶的抑制剂环絲氨酸的影响,Amytal使呼吸恢复的作用与线粒体內源底物含量有关?疚慕Y果进一步說明琥珀酸氧化需要能量激活,我們认为某些底物脫氫生成的NADH可以通过琥珀酸氧化引起NAD~+需能还原的逆反应生成高能磷酸化合物因而激活了琥珀酸的氧化。通过这样的途径生成高能磷酸化合物可能是对DNP較不敏感的。     

线粒体电子传递链电子漏的化学发光测定

本实验用差速离心法分离正常大鼠肝脏和心肌线粒体 ,以lucigenin (探测超氧阴离子 )与luminol (探测过氧化氢 )为探剂 ,用化学发光法测定METC电子漏的生成。在反应体系中加入外源底物 ,其发光强度明显高于空白对照 (体系中无线粒体 )。在肝线粒体体系中 ,无论是lucigenin还是luminol诱发的发光 ,琥珀酸底物引起的发光强均要高于丙酮酸 /苹果酸引起的发光强度。在心肌线粒体 luminol体系中也有与肝线粒体相似的结果 ,在心肌线粒体 lucigenin体系中 ,加入外源底物丙酮酸 /苹果酸诱发的发光强度高于琥珀酸诱发的发光强度     

氧化磷酸化作用的研究——Ⅰ.2,4-二硝基苯酚对琥珀酸氧化的激活和抑制

利用自动記录振动白金微氧电极的方法观察到DNP对綫粒体中琥珀酸氧化的短暫激活和抑制作用诩尤隓NP以后,呼吸明显被激活,但仅持續約1分鉀,随即逐漸受抑制。加入DNP以前,或在加入DNP以后而呼吸仍在激活阶段时加入无机磷酸盐都可以使呼吸激活阶段大大延长,抑制作用延緩出現。但若在DNP加入以后呼吸已被抑制时方行加入无机磷酸盐則不能使呼吸重行激活。砷酸盐不能代替无机磷酸产生相似效应。在呼吸受DNP抑制以后,加入ADP及ATP都不能使呼吸立刻重行激活,但加入ATP經过保温以后可以使呼吸漸漸有所增加。根据本文結果,我們认为在琥珀酸氧化过程中,氧化磷酸化作用中間物x～P可能参与能量反馈作用,当它的衡态浓度因DNP的作用而降低吋,琥珀酸的氧化即受抑制。根据本文結果,我們认为DNP对琥珀酸氧化抑制的各种現象。似乎不能簡单以草酰乙酸堆积完全加以解释。     

降低光滑球拟酵母电子传递链活性加速丙酮酸合成

光滑球拟酵母CCTCCM2 0 2 0 19经溴化乙锭诱变 ,挑选假阳性呼吸缺陷型菌株共 4 0株。对其中 7株丙酮酸产量提高的突变株进行发酵性底物 (葡萄糖 )和非发酵性底物 (甘油、乙酸 )的利用能力测试 ,鉴定得到 3株呼吸缺陷型突变株RD 16、RD 17和RD 18。相对于出发菌株 ,呼吸缺陷型突变株生长速率下降 ,最终菌体浓度降低 2 1%～2 9% ,胞内ATP含量下降 15 %～ 2 1% ,但单位细胞耗葡萄糖能力和单位细胞产丙酮酸能力分别提高了 2 0 7%～30 7%和 30 7%～ 5 5 5 %。进一步研究发现 ,呼吸缺陷型突变株线粒体复合体Ⅰ、Ⅰ Ⅲ、Ⅱ Ⅲ和Ⅳ的活性分别下降了 34%～ 4 1%、38 6 %～ 5 2 6 %、2 1%～ 2 5 %、15 0 %～ 6 30 % ,表明线粒体电子传递链氧化NADH的功能受到抑制。为使酵解产生的NADH正常氧化 ,在RD 18菌株的对数生长期流加 2 1mmol L外源电子受体乙醛。发现细胞合成丙酮酸能力提高 2 1 6 % ,且葡萄糖消耗速度明显加快 ,发酵周期缩短 14h。结果表明适当削弱能量代谢能够提高真核微生物中心代谢途径的速度     

Zn^2＋对鸡蛋果细胞质丙酮酸激酶的抑制作用

Zn2 抑制鸡蛋果 ( Passiflora edulis Smis)长成叶与幼叶细胞质丙酮酸激酶 ( PKC)活性 ,抑制程度决定于 Mg2 浓度大小。Zn2 的抑制作用在长成叶 PKC与幼叶 PKC之间表现出一定差异 :当改变 PEP或 ADP浓度时 ,以双倒数作图 ,Zn2 对长成叶和幼叶 PKC均表现为反竞争性抑制 ,但抑制常数不同。Zn2 对长成叶 PKC的抑制常数为 Ki ( PEP) =0 .0 5 9mmol/L,Ki ( ADP) =0 .0 74 mmol/L,对幼叶 PKC的抑制常数 Ki ( PEP) =0 .0 38mmol/L,Ki ( ADP) =0 .0 2 mmol/L。Zn2 对长成叶 PKC与幼叶 PKC的 Ki( Mg2 )亦不同 ,分别为 0 .0 1 6mmol/L和0 .0 0 8mmol/L。这些结果进一步证明长成叶 PKC与幼叶 PKC的酶学性质不同     

盟发绿豆子叶衰老期间的呼吸作用与线粒体功能的改变

暗中培养的绿豆幼苗子叶在萌发后3—4天时,外观出现衰老征状,6天后子叶凋落。随子叶日龄的增加,子叶的呼吸强度一直下降,呼吸商始终小于1。当外加L-苹果酸、α-酮戊二酸、琥珀酸和NADH为底物测定离体线粒体氧化活性时,衰老子叶的线粒体对上述四种底物的氧化活性有不同程度的增加;抗氰呼吸也有所升高。子叶衰老时,线粒体的ADP/O和呼吸控制(RC值均降低);线粒体ATPase水解ATP的活性升高。衰老绿豆子叶线粒体氧化磷酸化偶联效率的降低和ATPase水解活性的增强是与线粒体结构改变相联系的一种功能变化,它导致能量亏缺,并进一步加速了衰老的恶化进程。     

萌发绿豆子叶衰老期间的呼吸作用与线粒体功能的改变

暗中培养的绿豆幼苗子叶在萌发后3—4天时,外观出现衰老征状,6天后子叶凋落。随子叶日龄的增加,子叶的呼吸强度一直下降,呼吸商始终小于1。当外加L—苹果酸、a—酮戊二酸、琥珀酸和NADH为底物测定离体线粒体氧化活性时,衰老子叶的线粒体对上述四种底物的氧化活性有不同程度的增加;抗氰呼吸也有所升高。子叶衰老时,线粒体的ADP／O和呼吸控制(RC值均降低);线粒体ATPase水解ATP的活性升高。衰老绿豆子叶线粒体氧化磷酸化偶联效率的降低和ATPase水解活性的增强是与线粒体结构改变相联系的一种功能变化,它导致能量亏缺,并进一步加速了衰老的恶化进程。     

海带磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的提取和特性(简报)

提取得到的海带PEP羧激酶粗酶比活性为1.21nmolNADH/mg蛋白·分。经硫酸铵分步沉淀和冻融过程后其比活性提高近4倍。抗氧化剂可提高PEPCK活性。该酶催化的羧化反应底物是PEP。ADP和Mn~(2+)是必需的辅助因子。酶反应的最适pH值是7.5。用部分纯化酶测得底物HCO_3~-的K_m值是14.0mmol/L,pEP是0.3mmol/L,ADP是0.1 mmol/L。     

Procion Red HE 3B亲和层析纯化人L型丙酮酸激酶

采用国产的红色染料Procion Red HE3B亲和层析和底物ADP洗脱、配合硫酸铵盐析、DEAE-Sephadex A-50和磷酸纤维素层析可将人肝L型丙酮酸激酶提纯410倍,产物电泳纯。其中红色染料一步提纯的倍数平均为7.8倍,回收率平均为59％。     

植物呼吸及代谢的研究 Ⅴ.水稻幼苗亚细胞颗粒的氧化途径

本文报导了关于4天水稻黄化幼苗地上部的亚细胞颗粒氧化丙酮酸的途径的研究。下述结果证明在其中有三羧酸循环运行:1.琥珀酸、α-酮基戊二酸能迅速地被氧化,柠檬酸、苹果酸、延胡索酸以顺序降低的速率为此颗粒制剂氧化。2.丙酮酸的氧化能为催化量的琥珀酸所引发,说明有缩合酶的活性存在。3.琥珀酸的氧化能为丙二酸所抑制。α-酮基戊二酸的氧化能为亚砷酸钠所抑制,并且此被抑制的耗氧可借加入琥珀酸而得到恢复。4.氧化产物的纸上层析鉴定表明:琥珀酸能转化为延胡索酸、苹果酸和异柠檬酸;α-酮基戊二酸能转化为琥珀酸、延胡索酸和苹果酸。对亚细胞制剂及组织匀浆所作异柠檬酸酶及苹果酸合成酶的活性鉴定指出,在水稻幼苗氧化丙酮酸的途径中,乙醛酸循环可能与三羧酸循环同时存在。     

肝线粒体琥珀酸氧化机制的研究

(1)DNP对于琥珀酸氧化的影响随浓度不同而异,低浓度时,呼吸受激活,其程度随浓度升高而增強,不出現抑制現象。高浓度(30μM以上)DNP只引起短时間氧化激活,随即引起抑制,随浓度升高,抑制出現愈早,氧化激活愈小,預先加入Amytal足以防止上述抑制現象,在抑制出現后加入Amytal亦能使琥珀酸氧化部分恢复。(2)砷酸盐激活的琥珀酸氧化仅在有Amytal的条件下,才出現抑制現象。(3)ATP对上述两种情况引起的琥珀酸氧化抑制都具有一定的解除作用。(4)就实驗結果所做分析支持琥珀酸氧化需要能量激活的看法。