二十五味珊瑚丸对D-半乳糖衰老大鼠神经元特异性烯醇化酶表达的影响

探讨二十五味珊瑚丸(25 Odors Coral Pills)对D-半乳糖(D-gal)衰老大鼠海马锥体细胞形态和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的影响。采用颈背部皮下注射D-gal模拟衰老大鼠模型。治疗组于造模第6周,给予25 Odors Coral Pills灌胃2周,之后取各组脑组织行相关检测。与模型组比较,25 Odors Coral Pills组大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞层细胞丢失较少,细胞排列较紧密、整齐;DG区NSE阳性的细胞减少,胞体较小,突起较细;海马NSE表达下降,有统计学差异(P0.05)。D-gal衰老模型鼠海马锥体细胞衰老变性且NSE的表达增多;25 Odors Coral Pills可抑制D-gal衰老鼠海马锥体细胞的衰老变性和NSE的表达。     

三七素对谷氨酸损伤的PC12 细胞的影响

目的:研究三七素对谷氨酸损伤的PC12细胞的影响。方法:用谷氨酸复制体外培养的PC12细胞损伤模型,采用MTT法、Hoechst33342/PI双重染色法分别研究高、低剂量三七素对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的影响。结果:谷氨酸刺激后,PC12细胞存活率较对照组显著降低(P<0.05)、凋亡显著增强(P<0.05)。给予高剂量三七素可加重谷氨酸引起的PC12增殖力降低、凋亡增强。但低剂量三七素干预后,细胞存活率较模型组显著升高(P<0.05),凋亡较模型组明显降低(P<0.05)。结论:高剂量三七素可加重谷氨酸对PC12细胞的损伤,但低剂量三七素可显著减轻谷氨酸对PC12细胞的损伤,但具体机制尚有待于进一步研究。     

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨Mdivi-1对缺血再灌注损伤后大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)的保护作用.方法:分离培养大鼠CMECs,建立缺血再灌注(SI/R)模型,随机分为对照组、SI/R组、和SI/R+Mdivi-1组.采用MTT法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测CMECs凋亡率;western blot法检测各组细胞Drp1,Fis1水平;活性氧检测试剂盒测细胞ROS水平.结果:与对照组比较,SI/R组和SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显降低,凋亡明显增加,Drp1,Fis1表达增高,ROS水平明显升高,结果具有统计学意义(P＜0.05);与SI/R组比较,SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显增加,凋亡明显降低,ROS水平明显降低,结果具有统计学意义(P＜0.05),而Drp1,Fis1表达则无明显改变.结论:Mdivi-1可减轻CMECs的缺血再灌注损伤,这种保护作用可能是通过抗氧化应激来实现的.     

游泳运动对衰老大鼠免疫功能的影响

目的:探讨适宜运动训练对老年大鼠免疫功能的影响。方法:将32只SD大鼠随机分为青年对照组、老年对照组、30min老年运动组,30min青年运动组;衰老模型采用自然衰老的动物模型,观察给予4周无负重游泳运动训练后,大鼠胸腺指数,脾淋巴细胞的增殖能力,以及血清白细胞介素2水平变化。结果:与青年对照组相比,老年对照组大鼠上述指标均呈现不同程度的下降;与老年对照组相比,老年运动组大鼠上述指标均显著升高;与老年运动组相比,青年运动组胸腺指数,脾淋巴细胞的增殖能力,以及血清白细胞介素2水平显著高于老年运动组。结论:适宜游泳运动训练能提高老年大鼠的免疫功能,延缓衰老。     

芒果苷通过PI3K/Akt/mTOR通路抑制缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡及炎症反应

目的:探讨芒果苷抑制缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的机制。方法:将144只SD新生大鼠分为空白组、模型对照组、阳性对照组(尼莫地平,0.4 mg·kg~(-1)·d~(-1))、芒果苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg~(-1)·d~(-1))。检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)水平、细胞凋亡率、PI3K/Akt/mTOR通路分子表达量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠脑组织中SOD的含量显著降低、细胞凋亡率显著增加,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量显著减少(P0.05);与模型组比较,芒果苷低、中、高剂量组大鼠脑组织中SOD的含量显著增加,细胞凋亡率均显著减少,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达量显著增加且芒果苷剂量越大,上述变化越显著(P0.05)。结论:芒果苷对缺氧缺血性脑损伤大鼠的细胞凋亡及炎症反应具有抑制作用且该抑制作用与抑制PI3K/Akt/mTOR通路有关。     

芹菜素通过升高ROS促进不同细胞凋亡的实验研究

芹菜素是一种具有抗氧化、抗肿瘤和抗炎活性的天然植物黄酮,本研究应用MTT法测芹菜素对小鼠脾细胞和S180细胞增殖的影响,流式细胞仪测细胞凋亡和细胞内活性氧水平。结果显示:芹菜素剂量依赖地抑制小鼠脾细胞和S180细胞增殖,促进脾细胞和S180细胞凋亡,显著升高脾细胞和S180细胞内活性氧水平。这些结果提示:芹菜素可能通过升高不同细胞内ROS水平,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,具有进一步研究开发价值。     

瑞香素通过抑制PI3K/AKT通路触发内质网应激抑制胃癌细胞活性

目的 探讨瑞香素（Daphnetin）对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 将胃癌细胞HGC-27随机分为对照、低剂量（5μg/mL瑞香素）、中剂量（10μg/mL瑞香素）、高剂量（25μg/mL瑞香素）和高剂量+740Y-P(25μg/mL瑞香素+30μmol/L PI3K/Akt信号通路激活剂740Y-P)5组,药物处理48 h后分别采用CCK-8法、EdU实验、流式细胞术、TUNEL实验、蛋白免疫印记法检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达水平。结果 瑞香素可剂量依赖性抑制HGC-27细胞增殖,诱导HGC-27细胞凋亡,增加内质网相关蛋白CHOP、ATF4、p-PERK、p-EIF2α的表达,降低p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平;此外PI3K/Akt信号通路激活剂740Y-P可逆转瑞香素对HGC-27细胞增殖的抑制,并逆转瑞香素对HGC-27细胞内质网应激相关蛋白表达的促进作用。结论 瑞香素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路触发内质网应激抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡而发挥其对胃癌的抑制作用。     

D-半乳糖诱导衰老小鼠睾丸结构与功能变化及其氧化应激相关机制

目的建立D-半乳糖(D-gal)致小鼠衰老模型,探讨睾丸结构与功能变化及相关机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为衰老组和对照组。衰老组小鼠皮下注射D-gal;对照组等时等量注射生理盐水。模型复制完成第2d,采集小鼠内眦静脉血测定血清睾酮水平;取小鼠睾丸测定睾丸指数;石蜡切片HE染色观察睾丸组织形态学;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测生精细胞衰老;TUNEL法检测生精细胞凋亡;制备睾丸组织匀浆上清,ELISA检测TNF-α、IL-1β、和IL-6的水平;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;酶学法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;ABTS法检测总抗氧化能力(TAC);Western blotting检测衰老相关蛋白p21与p53表达水平。结果衰老模型组小鼠血清睾酮水平显著下降,睾丸脏器指数无明显差异,生精小管结构紊乱,生精细胞病理损伤明显,SA-β-Gal染色阳性的生精细胞百分率上升,细胞凋亡指数上升,睾丸匀浆上清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著上升,SOD活性、TAC能力显著降低,MDA含量上升,睾丸组织中衰老相关蛋白:p21与p53表达水平显著提高。结论 D-gal建立的衰老动物模型可见睾丸形态结构与功能出现衰老的生物学表现,其机制可能与氧化应激损伤及p21/p53通路激活有关。     

硝普钠促肺成纤维细胞增殖和凋亡的作用

用MTT测定、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法,观察了一氧化氮供体硝普钠（sodium nitroprusside,SNP）对体外培养的肺成纤维细胞增殖和凋亡以及Bcl-2、Bax和p53蛋白含量的影响。结果发现：MTT吸光度、细胞数和增殖指数（proliferation index,PI）均较对照增加;凋亡细胞数也增加,但尚不足以出现明显的“梯形”凋亡电泳条带;同时,细胞内Bcl-2蛋白下调和Bax蛋白上调;而细胞内p53蛋白含量无明显变化。结果表明,外源性NO有增强肺成纤维细胞增殖和凋亡的双重作用,但以促细胞增殖为主;此作用的分子机制与Bcl-2蛋白下调和Bax蛋白上调有关。     

纳米山药多糖对大鼠免疫器官及巨噬细胞吞噬功能的影响

摘要：目的 研究纳米山药多糖合生元结肠靶向调节剂对大鼠免疫器官功能及巨噬细胞吞噬功能的影响。方法 以i.g盐酸林可霉素造成肠炎模型,将大鼠随机分成正常对照组,阳性对照组,纳米山药多糖组和模型组。测定胸腺和脾指数,中性红法测定巨噬细胞吞噬功能,MTT法测定T淋巴细胞增殖,ELISA法测定脾淋巴细胞IL-2和IFN-γ含量。结果 与模型组相比,纳米山药多糖组显著提高免疫器官指数,腹腔巨噬细胞吞噬能力,脾淋巴细胞增殖能力和IL-2和IFN-γ含量（P<0.05),且恢复到正常水平。结论 动物实验表明,纳米山药多糖结肠靶向微生态调节剂具有提高免疫器官指数、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞能力、IL-2和IFN-γ含量,是理想的中药微生态调节剂。     

杀伤细胞对肺癌小鼠Lewis细胞增殖的抑制作用

目的:探讨杀伤细胞对人Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用。方法:选择成年健康雄性ICR小鼠46只,随机选取10只作为正常对照组,其余36只进行模型复制,然后将造模成功的30只小鼠随机分为实验组与模型组,每组15只。实验组予以尾静脉注射杀伤细胞1×107个/0.2 m L,1次/d,模型组与对照组予尾静脉注射生理盐水。ELISA方法测定TNF-α、IL-2和IL-4的含量,采用流式细胞仪检测凋亡率,四氮唑蓝(MTT)比色法检测癌细胞抑制率。结果:1实验组小鼠右腋下瘤体重量明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.01);2透射电镜下观察实验组人Lewis肺癌细胞出现大量凋亡,而模型组人Lewis肺癌细胞几乎未凋亡,与模型组比较,实验组细胞凋亡较多,差异具有统计学意义(P0.05);3实验组小鼠脾上清液中IL-2、TNF-α和IFN-γ含量明显高于模型组和正常对照组小鼠,差异有统计学意义(P0.01)。结论:杀伤细胞能够通过活化淋巴细胞、分泌细胞因子来抑制体内、体外人Lewis肺癌细胞的增殖和生长,对临床具有指导意义。     

海蛇乙醇浸出物对小鼠免疫系统的影响

目的 探讨海蛇乙醇浸出物（AEBFSS）在小鼠体内、体外对免疫系统的影响。方法 体外试验：采用AEBFSS与小鼠脾细胞共孵育72h,测定T、B淋巴细胞转化功能;体内试验：采用每天灌胃给予小鼠1次AEBFSS,共6天。测定脾脏中T淋巴细胞转化功能和溶血素抗体生成水平。结果 在体外条件下低浓度AEBFSS促进T、B淋巴细胞增殖,高浓度时则作用相反;在体内条件下低浓度AEBFSS能增加B细胞生成溶血素抗体,对T细胞增殖无明显影响,高浓度则抑制T、B细胞功能。结论 AEBFSS对小鼠免疫系统有一定的双向调节作用。     

基于PI3K/AKT通路探究上调miR-210对牙髓干细胞增殖、凋亡能力的影响

摘要 目的：研究基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路探究上调微小RNA 210(miR-210)对大鼠牙髓干细胞增殖、凋亡能力的影响。方法：选取10只健康Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠,颈椎脱臼处死后提取大鼠下切牙牙髓,进行牙髓干细胞培养和鉴定。分为正常组（未进行处理）,miR-210抑制组（给予20 nmol/L的miR-210抑制物）,miR-210对照组（给予20 nmol/L的miR-210模拟物）三组。采用CCK-8法检测牙髓干细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ALP活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,采用免疫印迹（Western blot）检测PI3K、AKT蛋白。结果：与正常组相比,miR-210抑制组细胞增殖、ALP活性降低,细胞凋亡率升高;miR-210对照组细胞增殖、ALP活性升高,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。与miR-210抑制组相比,miR-210对照组细胞增殖、ALP活性升高,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。与正常组相比,miR-210抑制组PI3K、p-AKT蛋白表达降低,miR-210对照组PI3K、p-AKT蛋白表达升高（P＜0.05）。与miR-210抑制组相比,miR-210对照组PI3K、p-AKT蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：miR-210通过调控PI3K、p-AKT蛋白激活PI3K/AKT通路,促进大鼠牙髓干细胞增殖,抑制牙髓干细胞凋亡。     

凋亡素2配体对放射线诱导95-D细胞凋亡的影响的研究

目的:探讨凋亡素2配体(Apo-2L)对放射线诱导肺癌95-D细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测不同浓度凋亡素2配体在体外对肺癌95-D细胞的抑制率,将细胞分为4组,对照组、凋亡素2配体组、单纯照射组、凋亡素2配体+放射照射组,流式细胞仪检测各组凋亡率及细胞周期。结果:凋亡素2配体对95-D细胞的体外抑制作用明显,随着药物浓度的增大及时间的延长,抑制率明显增高(P0.05)。流式细胞术显示凋亡素2配体与放射线联用能够使95-D细胞的凋亡率提高,与单用凋亡素2配体组及单纯放疗组相比,凋亡率差异显著(P0.05)。结论:凋亡素2配体在体外具有抑制95-D细胞增殖的作用并能够促进细胞的凋亡,同时凋亡素2配体联合放射线可以明显提高肺癌95-D细胞的凋亡率。     

激动素对大鼠肝纤维化后TGF—β1和CTGF变化的影响

目的 检测激动素（kinetin）对大鼠肝纤维化后转化生长因子β1（transforming growthfactor-β1,TGF-β1）和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）含量变化的影响。方法将大鼠随机分为3组,模型组,用CCl4诱导形成肝纤维化模型;激动素组,CCl4造模同时给予0．1％激动素溶液0．5ml／100g／d（每天每100克体重大鼠注射0．5ml0．1％激动素溶液）皮下注射;对照组,给予生理盐水皮下注射,治疗12周。应用免疫组化和图像分析技术对3组中TGF-β1和CTGF含量及分布特点进行观察。结果激动素组TGF-β1为（1．339±0．244）％较模型组（1．904±0．367）％显著降低（P〈0．01）,CTGF为（2．689±0．534）％较模型组（4．242±1．612）％显著降低（P〈0．01）,上述两组TGF-β1和CTGF含量较正常对照组（0．926±0．277）％和（1．608±0．644）％显著升高（P〈0．01）。结论 激动素对实验性大鼠肝纤维化具有抑制作用。     

脾切除对肝硬化门静脉高压症大鼠免疫功能的影响及意义

目的:对肝硬化门静脉高压症大鼠行脾切除手术,观察术后大鼠免疫系统功能的变化情况,探讨脾切除术对免疫系统的影响,为临床治疗提供理论基础。方法:选取SD大鼠45只建立PHT模型,随机分为PHT组、脾全切组及部分脾切除组,每组各15只。另选取10只健康大鼠为对照组。分别对四组大鼠行不同的脾切除方案,术后检测四组大鼠的血常规、免疫球蛋白含量、T淋巴细胞亚群的变化及组织病理学染色结果等,分析各指标的意义。结果:四组大鼠血常规检测结果显示,PHT组大鼠WBC高于对照组,PHTTS组高于PHT组,PHTSS组高于PHTTS组,差异显著且具有统计学意义(P0.05)。四组大鼠血浆中IgG含量差异显著(P0.05);IgA、IgM含量无显著性差异(P0.05)。四组大鼠CD4+、CD8+含量差异显著(P0.05);CD29+含量无显著性差异(P0.05)。结论:脾脏直接参于细胞介导免疫调节,脾切除可降低门脉压力,消除脾亢,有利于肝硬化门脉高压症的缓解。     

IAP家族抑制衰老的骨髓间充质干细胞的凋亡

目的:探讨衰老的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡抗性是否增加且是否通过凋亡抑制蛋白(IAP)家族介导。方法:用DMEM/F12中加入10%胎牛血清(FBS)的完全培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)至第三代,使用D-半乳糖(D-gal)诱导成衰老的BMSC并用β-半乳糖苷酶染色做衰老鉴定。用肿瘤坏死因子α(TNF-α)和环己酰亚胺(CHX)共同处理正常对照组与衰老组的BMSC,通过贴壁细胞计数统计其生存率,并通过蛋白印迹法检测两组细胞中Cleaved PARP、Cleaved Caspase3蛋白、IAP家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP以及衰老相关标志蛋白的水平。再用IAP抑制剂AT-406处理衰老的细胞,CCK-8检测处理组以及未处理组细胞的细胞活力。最后用凋亡抑制剂z-VAD-fmk和AT-406共同处理正常对照组与衰老组细胞,观察z-VAD-fmk能否减少IAP蛋白被抑制后所引起的细胞死亡。结果:与正常对照组相比,衰老的BMSC中由TNF-α和CHX共同诱导引起的细胞死亡数明显减少,凋亡标志物Cleaved PARP和Cleaved Caspase3蛋白的水平降低,而IAP家族成员c-IAP1、c-IAP2和XIAP的蛋白水平升高。用AT-406处理衰老BMSC后细胞的死亡数明显高于未处理的衰老BMSC组,通过z-VAD-fmk抑制凋亡通路后,AT-406处理的衰老细胞的死亡数减少。结论:衰老BMSC通过升高IAP家族蛋白水平从而提高对凋亡的抵抗能力。     

口服卡介菌治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的：观察口服卡介菌对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）的治疗效果。方法：制备EAE大鼠模型,随机分为BCG高、中、低剂量组和PBS对照组,每组各15只,对大鼠治疗后的临床症状及病理组织学进行评估,提取脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,3H—TdR掺入法检测淋巴细胞增殖能力。结果：BCG组EAE大鼠与对照组相比,临床症状减轻,发病时间延迟,炎性细胞浸润数减少;急性期,口服BCG各组CD4^＋、CD8^＋T细胞的数量随剂量增加而增加,缓解期CD4^＋、CD8^＋T细胞数量减少;口服BCG可促进EAE大鼠T淋巴细胞增殖能力;高、中剂量组上述变化均较其它分组明显。结论：口服BCG可很好的诱导免疫耐受,延迟EAE发病,减轻炎症反应,改善临床症状。     

口服卡介菌治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的:观察口服卡介菌对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:制备EAE大鼠模型,随机分为BCG高、中、低剂量组和PBS对照组,每组各15只,对大鼠治疗后的临床症状及病理组织学进行评估,提取脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖能力。结果:BCG组EAE大鼠与对照组相比,临床症状减轻,发病时间延迟,炎性细胞浸润数减少;急性期,口服BCG各组CD4+、CD8+T细胞的数量随剂量增加而增加,缓解期CD4+、CD8+T细胞数量减少;口服BCG可促进EAE大鼠T淋巴细胞增殖能力;高、中剂量组上述变化均较其它分组明显。结论:口服BCG可很好的诱导免疫耐受,延迟EAE发病,减轻炎症反应,改善临床症状。     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率及caspase-3表达的影响

目的:研究中药益坤宁(yikunning,YKN)对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率及凋亡相关基因caspase-3基因表达的影响,探讨益坤宁治疗围绝经期综合征的作用机理。方法:选用30只自然衰老的围绝经期雌性大鼠,随机分为中药益坤宁实验组、围绝经期对照组和利维爱(livial)对照组,另选10只青年雌性大鼠作为青年对照组。连续灌胃处理4周后,采用原位脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠卵巢细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)检测大鼠卵巢中caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:益坤宁组大鼠卵巢细胞凋亡率显著低于围绝经期对照组(P0.01);益坤宁组大鼠卵巢中caspase-3 mRNA和蛋白表达低于围绝经期对照组,高于青年对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:中药益坤宁通过降低围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率,下调卵巢中凋亡相关基因caspase-3的表达,从而延缓卵巢衰老,这可能是其治疗围绝经期综合征的分子机制之一。