水稻蜡质基因第一内含子碱基突变引起其RNA二级结构的可能变化

通过体外转录得到籼稻品种232蜡质基因第一内含子5’端430 bp的ssRNA分子,以及在此区域发生了自然突变的粳稻品种寒丰蜡质基因第一内含子5’端同样长度的ssRNA分子。部分变性胶电泳结果表明两种ssRNA分子的迁移速率不同。将两种ssRNA分子的核酸序列用计算机分析,表明此两种ssRNA分子能形成不同的茎-环结构,自由能值也有差异。对突变引起的这些不同与两种水稻品种蜡质基因转录本剪接的差异进行了讨论。     

在酵母体内用RNA聚合酶Ⅱ表达大肠杆菌tRNA~（Sec）基因

我们将大肠杆菌的硒代半胱氨酸ｔＲＮＡ基因（ＳｅｌＣ基因）连接到分泌型表达质粒ＰＶＴ１０２Ｕ－αＭＦＬ中，并调整好阅读框架，使蛋白翻译的终止密码子位于ＳｅｌＣ基因的下游．将该质粒转化酵母，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，在ＳＤ液体培养基中检测出７～８ｋｄ的蛋白条带，这与理论值是相符合的。同时，我们抽提出酵母的总ＲＮＡ用互补与该ｔＲＮＡＴＣ茎环区的２１－ｍｅｒ寡核苷酸，经５′标记后作为探讨进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ。结果有两条较强的条带和一条较弱的条带，较强条带中一条相当于７９０ｎｔｓ左右，另一条相当于３７０ｎｔｓ左古，根据组建的表达型质粒结构资料推测７９０ｎｔｓ左右的条带是由ＲＮＡ聚合酶ＩＩ转录的未被加工的前体；３７０ｎｔｓ左右的条带是５′端被加工而３′端未被加工的分子，较弱的条带则是相当于９０ｎｔｓ左右的成熟ｔＲＮＡ分子。因此，我们认为ＲＮＡ聚合酶ＩＩ可以转录ｔＲＮＡ基因。由于实验用酵母的３′内切核酸酶含量较低，致使带长尾巴的ｔＲＮＡ前体３′端加工速度缓慢。     

AFP基因细胞专一性的表达依赖于某些核蛋白

Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析没有发现成年大鼠肝、胚肝及肝癌细胞ＡＦＰ基因５＇端及上游有任何不同。以ＡＦＰ基因转录起始点到５＇端上游２５５ｂｐＤＮＡ片段为探针进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析,发现表达ＡＦＰ基因的细胞核蛋白中存在与其结合的核蛋白,这些在成年大鼠肝、肺、脾、心和肾细胞核蛋白中不存在。含有结合蛋白的肝癌核蛋白部分能使作为ＲＮＡ聚合酶Ⅱ来源的成年大鼠肝细胞核蛋白部     

优化外源基因在大肠杆菌中表达的翻译起始率的策略和方法(英文)

ｍＲＮＡ的翻译起始区（ＴＩＲ）的二级结构对翻译起始率有很大的影响。本文建立了一种改进外源基因在大肠杆菌中翻译起始率的系统。以人分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因为模型,将ＰＣＮＡ基因５′端编码区的１１４ｂｐ的顺序插入质粒ｐＴＺ１９Ｒ中ＬａｃＺ′的５′端构成融合基因。用定点突变法在ＰＣＮＡ的ＡＵＧ的８位插入一个Ｓｈｉｎｅ／Ｄａｌｇａｒｎｏ（ＳＤ）顺序ＧＡＧＧＴ,再以合成的带部分随机序列寡核苷酸作引物,用ＰＣＲ法在ＳＤ顺序两侧,即ＳＤ上游６个碱基和ＳＤ与ＡＵＧ之间７个碱基,进行随机突变,它们与结构基因５′端序列形成各种可能的翻译起始区（ＴＩＲ）二级结构。重组质粒转化大肠杆菌株ＪＭ１０９（ＤＥ３）,５′ＰＣＮＡ－ｌａｃＺ′ｍＲＮＡ可通过诱导表达Ｔ７ＲＮＡ聚合酶而得到专一而有效的转录。通过在Ｘ－ｇａｌ板上蓝色筛选以及随后的杂交鉴定,共得到２６９个５′ＰＣＮＡ－ｌａｃＺ′融合质粒。从中选择８个不同蓝色的重组子进行β－ｇａｌ活性测定,结果表明它们的酶活性相差在２０倍以上。而ＲＮＡ点杂交表明它们在转录水平无明显的差异。由此提示,通过此策略和方法能得到一个在大肠杆菌中能高效表达的翻译起始区。     

基因沉默：获得性免疫的新途径

基因沉默 (ｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇ)首先发现于转基因植物。发生沉默的基因可以是外源性转移基因 ,也可以是入侵的病毒或宿主内源性基因。双链ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)作为启动因素或中间体为不同生物基因沉默所共有。通常 ,基因沉默发生在两种水平上 ,一是由于ＤＮＡ甲基化、异染色质化及位置效应等引起的转录水平上的基因沉默 (ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｉ ｌｅｎｃｉｎｇ ,ＴＧＳ) ,另一种是在基因转录后水平上通过对目标ＲＮＡ特异性降解而使基因失活的转录后基因沉默 (ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｇｅｎｅ…     

籼稻232蜡质基因转录起始位点的鉴定

Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析和蜡质基因ｃＤＮＡ的序列分析表明水稻蜡质基因的转录本可能延伸到翻译起始密码子（ＡＴＧ）上游１２ｋｂ处。据此设计了２１Ｎｔ的寡核苷酸引物,并以籼稻２３２胚乳ＲＮＡ为模板,以引物延伸法确定籼稻２３２蜡质基因的转录起始点,籼稻蜡质基因的转录起始旁邻顺序ＣＴＣＡＣＣＡ与高等植物基因的转录起始点一致顺序ＣＴＣＡＴＣＡ仅相差１个碱基。通过顺序比较,对东乡野生稻蜡质基因中的转录起始位点的位置,以及对此两稻种中ＴＡＴＡ盒的可能顺序进行了讨论。     

授粉诱导兰花花部乙烯生物合成基因在转录水平上的表达

朵丽蝶兰（Ｄｏｒｉｔａｅｎｏｐｓｉｓｈｙｂｒｉｄａ Ｈｏｒｔ．）的花授粉后,测定乙烯的产生,并分析授粉后花部各器官乙烯生物合成的ＡＣＣ合成酶和ＡＣＣ氧化酶两个基因转录水平上的表达。授粉后在花部均可探测到ＡＣＣ合成酶和ＡＣＣ氧化酶的ｍ ＲＮＡ。在花部不同器官之间,此两种酶的ｍ ＲＮＡ的积累水平均表现出一些差异。ＡＣＣ合成酶的ｍ ＲＮＡ 积累与ＡＣＣ氧化酶相比,具有更明显的特异性。而ＡＣＣ氧化酶ｍ ＲＮＡ 的积累水平远比ＡＣＣ合成酶高     

利用脊髓灰质炎病毒5‘NCR和RNA聚合酶基因可提高外源基因表达

将含脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）ＲＮＡ聚合酶的不同长度基因片段克隆到载体ｐＳＧ５质粒上,分别构建了４个表达ＲＮＡ聚合酶的质粒。体外转录实验证明,ｐＳＧ５－ＰＯＬ１．９９和ｐＳＧ５－ＰＯＬ２．０３质粒转染细胞的提取物促进了特异的ＲＮＡ转录,表明两质闰可表达ＲＮＡ聚合酶。将ＰＶ的５’ＮＣＲ序列插在载体ｐＧＲＥＥＮ ＬＡＮＴＥＲＮ－１的ＣＭＶ启动子下游,构建了ｐＧＲＥＥＮ ＬＡＮＴＥＲＮ－１－５’ＮＣＲ质粒;     

黄瓜花叶病毒山东株（CMV—SD）RNA2全和cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶ－ＳＤＲＮＡ２的５’和３’未端序列,在此基础上,利用ＲＴ－ＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡＤＱ ＢＴＧ Ｐｃ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ＰＣ２３,并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ＰＣ２Ｆ。     

双链RNA病毒的复制机制

本文对双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）病毒复制机制的研究进展进行了综述。根据ｄｓＲＮＡ病毒复制周期,分以下几方面对其复制的有关分子进行分析：转录、转录本释放和“满头”复制模型、（＋）ＲＮＡ转译、病毒包装、（－）ＲＮＡ合成等。此外,还简要分析了宿主基因及其产物在病毒复制中的作用。     

人淋巴毒素基因5′端上游NF－KB类因子特异性结合位点的研究

淋巴毒素（Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ,ＬＴ）是由活化的Ｔ淋巴细胞分泌的一种糖蛋白。ＬＴ基因的表达调控主要是在转录水平上。ＰＨＡ＋ＰＭＡ诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞总ＲＮＡ点渍杂交发现,Ｊｕｒｋａｔ细胞的内源性ＬＴｍＲＮＡ的数量随诱导时间的延长而增加。凝胶迟滞电泳分析发现,ＰＨＡ＋ＰＭＡ诱导４小时的Ｊｕｒｋａｔ细胞核抽提物形成多种复合物,且在诱导不同时间后有明显变化。系列缺失片段的竞争反应表明,这些复合物的形成与ＬＴ基因５＇端上游──１２８ｂｐ──９３ｂｐ左右的序列相关。ＤＮａｓｅｌ足迹法及其竞争实验发现,ＬＴ基因５＇端上游─—１０４ｂｐ──８３ｂｐ（共２２ｂｐ）序列具有明显的蛋白质保护足迹。同源性分析发现此２２ｂｐ的序列中存在一个ＫＢ样结合位点：─１００ｂｐ──９０ｂｐ（５’－ＧＧＧＧＧＣＴＴＣＣＣ－３’）。ＮＰ－ＫＢ类蛋白质因子参与了此序列的ＤＮＡ－蛋白质的特异性结合,可能存在多种类型的ＮＰ－ＫＢ类蛋白因子参与了ＬＴ基因的表达调控。     

mRNA翻译起始区的结构改变对几个外源基因翻译的影响

为观察ｍＲＮＡ翻译起始区结构与基因表达的关系,利用密码子的简并性,在不改变表达产物氨基酸序列的前提下定点突变几个外源基因的５′端若干位点,使基佤表达载体重组后转录形成的ｍＲＮＡ翻译起始区结构发生改变。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等分析证实这些改变大大提高了外源基因的表达水平,ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ表明突变与非突变基因转录水平差别不大,表达水平的提高主要由于翻译效率的提高,ｍＲＮＡ翻译起始区二级结构预测提示其生     

RNA病毒感染性转录体的制备

构建感染性转录体已成为研究ＲＮＡ病毒复制,表达,致病机制等的有力工具。感染性转录体可通过ｃＤＮＡ克隆经体内或体外转录获得,也可通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物直接转录获取。ＤＮＡ聚合酶引起的点突变、ｃＤＮＡ克隆的稳定性,转录体长度多态性、病毒基因组的５‘和３’端序列等均可影响转录体的感染性。     

蓖麻蚕rDNA基因核骨架结合区在酵母中的自主复制功能

蓖麻蚕核糖体ＲＮＡ基因（ｒＤＮＡ）５′－非转录间隔区有长约１ｋｂ的核骨架结合区ＳＡＲ（ｓｃａｆｏｌｄ－ａｓｓｏｃｉａｔ－ｅｄｒｅｇｉｏｎ）［１］。本文对该ＳＡＲ元件的酵母自主复制功能进一步研究,证明该ＳＡＲ５′端６８８ｂｐ含有１２个ＡＣＳ（ＡＲＳ的核心序列）同源序列,但无ＡＲＳ活性,而其３′端仅３个ＡＣＳ同源序列,但对酵母的转化率比全片段还高４０～５０倍。体外结合实验证明,蓖麻蚕ｒＲＮＡ基因的ＳＡＲ能专一地同酵母核骨架结合,提示ＡＲＳ的功能体现与核骨架结合紧密相关。ｒＲＮＡ基因ＳＡＲ与ＡＲＳ的功能在进化上可能是很保守的。在此基础上可进一步分析ＳＡＲ中与ＤＮＡ复制相关的正调及负调元件。     

mRNA差异显示技术在动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用

动物从卵裂开始的早期胚胎发育始终伴随着ｍＲＮＡ不断的合成与降解。最初受着受精卵内母体ｍＲＮＡ的控制。当这些ｍＲＮＡ在发育过程中逐渐被降解时,有些动物（如小鼠）在比较早的时期已有新基因的转录;而有些动物（如鱼类、两栖类）迟到囊胚中期以后,合子核的基因才开始转录新的ｍＲＮＡ。ｍＲＮＡ这种有规律的代谢活动控制着细胞的分化、胚层的形成以及模式形成（ｐａｔｅｒｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）。所有这些ｍＲＮＡ水平上的变化都可以用ｍＲＮＡ差异显示法（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ）检测出来并进而获得与早期胚胎发育有关的基因。ｍＲＮＡ差异显示法是由Ｌｉａｎｇ和Ｐａｒｄｅｅ于１９９２年建立起来的,用于显示两种不同组织之间ｍＲＮＡ差异的方法。基于绝大多数ｍＲＮＡ有一个ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴,选用一个较特殊的３’端引物─５’Ｔ１１ＭＮ３’,其中Ｍ可以是ｄＡＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,而Ｎ可以是ｄＡＴＰ,ｄＴＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,进行逆转录时,１／１２的ｍＲＮＡ可被逆转录为ｃＤＮＡ。这种ｃＤＮＡ第一链被用来ＰＣＲ扩增,所使用的３’端引物与逆转录引物相同,而５’端引物为１０个碱基的一段寡核苷酸,这类任意（ａｒｂｉｔｒａｒ     

中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异

１３个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）分离物,经ＲＮＡ１和ＲＮＡ２全基因组不同区域ＤＮＡ片段背地里单构象多态分析（ＳＳＣＰ）,外壳蛋白基因和ＲＮＡ２ ７０ｋＤ基因５端７０５碱基序列分析,以及此７－５碱基ＤＮＡ片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的ＲＮＡ１和ＲＮＡ２彼此无一相同,其中ＲＮＡ２变异比ＲＮＡ１更大。由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地ＢａＹＭ     

HCV5＇端非编码区cDNA的体外转录

采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇端非编码区（５＇ＮＣＲ）３０２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒,获得的重组体ｐＵＮ进行序列测定。将ｐＵＮ的目的基因亚克隆进体外转录载体ｐＳＰＯＲＴＩ多克隆位点的ＥｏｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点之间,所得重组体ｐＳＮ线性化后由Ｔ＿７ＲＮＡ多聚酶及ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶引导体外转录反应,产物经凝胶电泳及特异引物ＲＴ－ＰＣＲ,证实ＳＰ６引导的是正义ＲＮＡ,Ｔ７合成的是反义ＲＮＡ,其大小分别力４２９ｂｐ和３６２ｂｐ。并证实所得ＲＮＡ力ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ转录而来。获得的ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ和ＲＮＡ在常规逆转录和ＰＣＲ步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时,ＨＣＶ５＇ＮＣＲ体外转录载体的构建可用于制各ＲＮＡ探针和反义ＲＮＡ,改进后还可作为定量ＰＣＲ的竞争性模板。     

RNA编辑

ＲＮＡ 一种基因转录产物所包含的信息在转录中或转录后被改变的过程,从某种意义上是对中心法则的一种扩展。本文以Ｋｉｎｅｔｏｐｌａｓｉｄ线粒体ＲＮＡ为例,对ＲＮＡ编辑反应的基本过程是反应模型进行了综述,并对可能参与编辑反应的反式因子及ＲＮＡ编辑反应类型与进化意义作了简要介绍。     

羊FSHR基因5′端转录启动调控区的生物学特性

文章对小尾寒羊、滩羊和澳洲绵羊等繁殖性状不同的3种绵羊与排卵有关的FSHR基因5′端转录启动调控区进行了克隆和分析,通过对FSHR基因的15个转录调控元件序列进行比较,结果表明,羊不同品种FSHR基因的转录调控元件序列之间没有差异。这说明绵羊的品种与FSHR基因5′端转录启动调控区的相关性不强,排除了因转录调控元件突变而影响转录调节能力的可能性。     

河西走廊不同生态型芦苇核酸代谢季节动态研究

分布在甘肃河西走廊的４ 种生态型芦苇（Ｐｈｒａｇｍ ｉｔｅｓｃｏｍ ｍ ｕｎｉｓＴｒｉｎ．）的核酸代谢季节变化有差异。盐化草甸芦苇ＲＮＡ 含量持续增加,ＤＮＡ 含量相对稳定,其它３ 种生态型芦苇的ＲＮＡ 和ＤＮＡ 含量以５月份为最高。过渡带芦苇的ＲＮＡ 含量、沼泽芦苇及沙丘芦苇的ＤＮＡ含量９ 月份略有增高。盐化草甸芦苇与过渡带芦苇的ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ的活性７ 月份最高,沼泽芦苇与沙丘芦苇的ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ活性５—９ 月份呈增高趋势。盐化草甸芦苇的ＤＮＡ 和ＲＮＡ 合成活性不断升高,过渡带芦苇和沼泽芦苇的ＤＮＡ 和ＲＮＡ 合成活性及沙丘芦苇的ＲＮＡ 合成活性５—９月份均降低,仅沙丘芦苇的ＤＮＡ合成活性增强。ＲＮＡ 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析结果表明,４ 种生态型芦苇均含有２５Ｓ、２３Ｓ、１８Ｓ、１６Ｓ大分子量ｒＲＮＡ 和小分子量５．８Ｓ、５Ｓ、４．５ＳｒＲＮＡ 及４ＳｔＲＮＡ。大分子量ＲＮＡ 的含量高于小分子量ＲＮＡ 含量。不同生态型及同一生态型芦苇的不同发育时期,相同的ＲＮＡ 组分含量各不相同。且发育过程中２３Ｓ、１８Ｓ、１６ＳｒＲＮＡ 在不同月份发生不同程度的降解。由此,我们认为,核酸代谢的差异性是４ 种生态型由生长转入衰