共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
水稻蜡质基因第一内含子碱基突变引起其RNA二级结构的可能变化 总被引:3,自引:0,他引:3
通过体外转录得到籼稻品种232蜡质基因第一内含子5’端430
bp的ssRNA分子,以及在此区域发生了自然突变的粳稻品种寒丰蜡质基因第一内含子5’端同样长度的ssRNA分子。部分变性胶电泳结果表明两种ssRNA分子的迁移速率不同。将两种ssRNA分子的核酸序列用计算机分析,表明此两种ssRNA分子能形成不同的茎-环结构,自由能值也有差异。对突变引起的这些不同与两种水稻品种蜡质基因转录本剪接的差异进行了讨论。 相似文献
2.
我们将大肠杆菌的硒代半胱氨酸tRNA基因(SelC基因)连接到分泌型表达质粒PVT102U-αMFL中,并调整好阅读框架,使蛋白翻译的终止密码子位于SelC基因的下游.将该质粒转化酵母,通过SDS-PAGE分析,在SD液体培养基中检测出7~8kd的蛋白条带,这与理论值是相符合的。同时,我们抽提出酵母的总RNA用互补与该tRNATC茎环区的21-mer寡核苷酸,经5′标记后作为探讨进行Northernblot。结果有两条较强的条带和一条较弱的条带,较强条带中一条相当于790nts左右,另一条相当于370nts左古,根据组建的表达型质粒结构资料推测790nts左右的条带是由RNA聚合酶II转录的未被加工的前体;370nts左右的条带是5′端被加工而3′端未被加工的分子,较弱的条带则是相当于90nts左右的成熟tRNA分子。因此,我们认为RNA聚合酶II可以转录tRNA基因。由于实验用酵母的3′内切核酸酶含量较低,致使带长尾巴的tRNA前体3′端加工速度缓慢。 相似文献
3.
Southern blotting分析没有发现成年大鼠肝、胚肝及肝癌细胞AFP基因5'端及上游有任何不同。以AFP基因转录起始点到5'端上游255bpDNA片段为探针进行Southwesternblotting分析,发现表达AFP基因的细胞核蛋白中存在与其结合的核蛋白,这些在成年大鼠肝、肺、脾、心和肾细胞核蛋白中不存在。含有结合蛋白的肝癌核蛋白部分能使作为RNA聚合酶Ⅱ来源的成年大鼠肝细胞核蛋白部 相似文献
4.
优化外源基因在大肠杆菌中表达的翻译起始率的策略和方法(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
mRNA的翻译起始区(TIR)的二级结构对翻译起始率有很大的影响。本文建立了一种改进外源基因在大肠杆菌中翻译起始率的系统。以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因为模型,将PCNA基因5′端编码区的114bp的顺序插入质粒pTZ19R中LacZ′的5′端构成融合基因。用定点突变法在PCNA的AUG的8位插入一个Shine/Dalgarno(SD)顺序GAGGT,再以合成的带部分随机序列寡核苷酸作引物,用PCR法在SD顺序两侧,即SD上游6个碱基和SD与AUG之间7个碱基,进行随机突变,它们与结构基因5′端序列形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化大肠杆菌株JM109(DE3),5′PCNA-lacZ′mRNA可通过诱导表达T7RNA聚合酶而得到专一而有效的转录。通过在X-gal板上蓝色筛选以及随后的杂交鉴定,共得到269个5′PCNA-lacZ′融合质粒。从中选择8个不同蓝色的重组子进行β-gal活性测定,结果表明它们的酶活性相差在20倍以上。而RNA点杂交表明它们在转录水平无明显的差异。由此提示,通过此策略和方法能得到一个在大肠杆菌中能高效表达的翻译起始区。 相似文献
5.
籼稻232蜡质基因转录起始位点的鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
Northernblot杂交分析和蜡质基因cDNA的序列分析表明水稻蜡质基因的转录本可能延伸到翻译起始密码子(ATG)上游12kb处。据此设计了21Nt的寡核苷酸引物,并以籼稻232胚乳RNA为模板,以引物延伸法确定籼稻232蜡质基因的转录起始点,籼稻蜡质基因的转录起始旁邻顺序CTCACCA与高等植物基因的转录起始点一致顺序CTCATCA仅相差1个碱基。通过顺序比较,对东乡野生稻蜡质基因中的转录起始位点的位置,以及对此两稻种中TATA盒的可能顺序进行了讨论。 相似文献
6.
授粉诱导兰花花部乙烯生物合成基因在转录水平上的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
朵丽蝶兰(Doritaenopsishybrida Hort.)的花授粉后,测定乙烯的产生,并分析授粉后花部各器官乙烯生物合成的ACC合成酶和ACC氧化酶两个基因转录水平上的表达。授粉后在花部均可探测到ACC合成酶和ACC氧化酶的m RNA。在花部不同器官之间,此两种酶的m RNA的积累水平均表现出一些差异。ACC合成酶的m RNA 积累与ACC氧化酶相比,具有更明显的特异性。而ACC氧化酶m RNA 的积累水平远比ACC合成酶高 相似文献
7.
基因沉默:获得性免疫的新途径 总被引:3,自引:0,他引:3
基因沉默 (genesilencing)首先发现于转基因植物。发生沉默的基因可以是外源性转移基因 ,也可以是入侵的病毒或宿主内源性基因。双链RNA(dsRNA)作为启动因素或中间体为不同生物基因沉默所共有。通常 ,基因沉默发生在两种水平上 ,一是由于DNA甲基化、异染色质化及位置效应等引起的转录水平上的基因沉默 (transcriptionalgenesi lencing ,TGS) ,另一种是在基因转录后水平上通过对目标RNA特异性降解而使基因失活的转录后基因沉默 (post transcriptionalgene… 相似文献
8.
将含脊髓灰质炎病毒(PV)RNA聚合酶的不同长度基因片段克隆到载体pSG5质粒上,分别构建了4个表达RNA聚合酶的质粒。体外转录实验证明,pSG5-POL1.99和pSG5-POL2.03质粒转染细胞的提取物促进了特异的RNA转录,表明两质闰可表达RNA聚合酶。将PV的5’NCR序列插在载体pGREEN LANTERN-1的CMV启动子下游,构建了pGREEN LANTERN-1-5’NCR质粒; 相似文献
9.
分别利用5’RACE和3’RACE确定了CMV-SDRNA2的5’和3’未端序列,在此基础上,利用RT-PCR得到了RNA2的5’端一半的cDNADQ BTG Pc25和3’端一半的cDNA克隆PC23,并通过拼接构建了RNA2全长cDNA克隆PC2F。 相似文献
10.
本文对双链RNA(dsRNA)病毒复制机制的研究进展进行了综述。根据dsRNA病毒复制周期,分以下几方面对其复制的有关分子进行分析:转录、转录本释放和“满头”复制模型、(+)RNA转译、病毒包装、(-)RNA合成等。此外,还简要分析了宿主基因及其产物在病毒复制中的作用。 相似文献
11.
淋巴毒素(Lymphotoxin,LT)是由活化的T淋巴细胞分泌的一种糖蛋白。LT基因的表达调控主要是在转录水平上。PHA+PMA诱导的Jurkat细胞总RNA点渍杂交发现,Jurkat细胞的内源性LTmRNA的数量随诱导时间的延长而增加。凝胶迟滞电泳分析发现,PHA+PMA诱导4小时的Jurkat细胞核抽提物形成多种复合物,且在诱导不同时间后有明显变化。系列缺失片段的竞争反应表明,这些复合物的形成与LT基因5'端上游──128bp──93bp左右的序列相关。DNasel足迹法及其竞争实验发现,LT基因5'端上游─—104bp──83bp(共22bp)序列具有明显的蛋白质保护足迹。同源性分析发现此22bp的序列中存在一个KB样结合位点:─100bp──90bp(5’-GGGGGCTTCCC-3’)。NP-KB类蛋白质因子参与了此序列的DNA-蛋白质的特异性结合,可能存在多种类型的NP-KB类蛋白因子参与了LT基因的表达调控。 相似文献
12.
mRNA翻译起始区的结构改变对几个外源基因翻译的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
为观察mRNA翻译起始区结构与基因表达的关系,利用密码子的简并性,在不改变表达产物氨基酸序列的前提下定点突变几个外源基因的5′端若干位点,使基佤表达载体重组后转录形成的mRNA翻译起始区结构发生改变。经SDS-PAGE等分析证实这些改变大大提高了外源基因的表达水平,RNAdotblot表明突变与非突变基因转录水平差别不大,表达水平的提高主要由于翻译效率的提高,mRNA翻译起始区二级结构预测提示其生 相似文献
13.
RNA病毒感染性转录体的制备 总被引:4,自引:0,他引:4
构建感染性转录体已成为研究RNA病毒复制,表达,致病机制等的有力工具。感染性转录体可通过cDNA克隆经体内或体外转录获得,也可通过聚合酶链反应(PCR)扩增产物直接转录获取。DNA聚合酶引起的点突变、cDNA克隆的稳定性,转录体长度多态性、病毒基因组的5‘和3’端序列等均可影响转录体的感染性。 相似文献
14.
蓖麻蚕核糖体RNA基因(rDNA)5′-非转录间隔区有长约1kb的核骨架结合区SAR(scafold-associat-edregion)[1]。本文对该SAR元件的酵母自主复制功能进一步研究,证明该SAR5′端688bp含有12个ACS(ARS的核心序列)同源序列,但无ARS活性,而其3′端仅3个ACS同源序列,但对酵母的转化率比全片段还高40~50倍。体外结合实验证明,蓖麻蚕rRNA基因的SAR能专一地同酵母核骨架结合,提示ARS的功能体现与核骨架结合紧密相关。rRNA基因SAR与ARS的功能在进化上可能是很保守的。在此基础上可进一步分析SAR中与DNA复制相关的正调及负调元件。 相似文献
15.
mRNA差异显示技术在动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
动物从卵裂开始的早期胚胎发育始终伴随着mRNA不断的合成与降解。最初受着受精卵内母体mRNA的控制。当这些mRNA在发育过程中逐渐被降解时,有些动物(如小鼠)在比较早的时期已有新基因的转录;而有些动物(如鱼类、两栖类)迟到囊胚中期以后,合子核的基因才开始转录新的mRNA。mRNA这种有规律的代谢活动控制着细胞的分化、胚层的形成以及模式形成(paternformation)。所有这些mRNA水平上的变化都可以用mRNA差异显示法(mRNAdiferentialdisplay)检测出来并进而获得与早期胚胎发育有关的基因。mRNA差异显示法是由Liang和Pardee于1992年建立起来的,用于显示两种不同组织之间mRNA差异的方法。基于绝大多数mRNA有一个poly(A)尾巴,选用一个较特殊的3’端引物─5’T11MN3’,其中M可以是dATP,dCTP,dGTP之一,而N可以是dATP,dTTP,dCTP,dGTP之一,进行逆转录时,1/12的mRNA可被逆转录为cDNA。这种cDNA第一链被用来PCR扩增,所使用的3’端引物与逆转录引物相同,而5’端引物为10个碱基的一段寡核苷酸,这类任意(arbitrar 相似文献
16.
中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异 总被引:4,自引:0,他引:4
13个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒(BaYMV)分离物,经RNA1和RNA2全基因组不同区域DNA片段背地里单构象多态分析(SSCP),外壳蛋白基因和RNA2 70kD基因5端705碱基序列分析,以及此7-5碱基DNA片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的RNA1和RNA2彼此无一相同,其中RNA2变异比RNA1更大。由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地BaYM 相似文献
17.
采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)302bp的cDNA片段,经补齐和提纯后插入pUC19质粒,获得的重组体pUN进行序列测定。将pUN的目的基因亚克隆进体外转录载体pSPORTI多克隆位点的EooRI和PstI切点之间,所得重组体pSN线性化后由T_7RNA多聚酶及SP6RNA多聚酶引导体外转录反应,产物经凝胶电泳及特异引物RT-PCR,证实SP6引导的是正义RNA,T7合成的是反义RNA,其大小分别力429bp和362bp。并证实所得RNA力HCV5'NCRcDNA转录而来。获得的HCV5'NCRcDNA和RNA在常规逆转录和PCR步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时,HCV5'NCR体外转录载体的构建可用于制各RNA探针和反义RNA,改进后还可作为定量PCR的竞争性模板。 相似文献
18.
19.
dsRNA介导的RNA干扰 总被引:5,自引:0,他引:5
在多种生物中 ,外源或内源性的双链RNA(double strandedRNA ,dsRNA)导入细胞中 ,与dsRNA同源的mRNA则受到降解 ,因而其相应的基因受到抑制。这种转录后基因沉默 (post transcriptionalgenesilencing ,PTGS)机制首先在线虫 (C .elegans)中得以证实。由于这是一种在RNA水平的基因表达抑制 ,故也称为RNA干扰 (RNAinterfer ence) ,简称RNAi[1] 。随后发现 ,在各种生物 ,如果蝇[2 ] 、拟南芥菜[3 ] 、及小鼠[4] 等均存在dsRNA介导… 相似文献