表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

黄瓜花叶病毒卫星RNA生防制剂在烟草上的防病作用

用人工组装的黄瓜花叶病毒卫星RNA生防制剂在烟草生产品种进行了田间保护试验。由于使用了生防制剂,经处理的烟草发病率降低84.9～86.4％,同时比对照早熟5天,上等烟比率增加151.3～173.5％,平均每亩收入增加43.3～65.7％。另外发现生防制剂能增强烟草对真菌病害的抵抗作用。     

应用烟草花叶病毒弱毒疫苗N_(14)和卫星核糖核酸生防制剂S_(52)防治番茄病毒病的试验研究

1983—1986年的试验结果表明,应用烟草花叶病毒(TMV)弱毒疫苗N_(14)和黄瓜花叶病毒(CMV)卫星核糖核酸生防制剂S_(52)二联接种免疫番茄,能有效地防治TMV和CMV对番茄的危害。其结果是:经过免疫的番茄比不免疫的番茄病株率下降25.2～45.4％;病情指数下降16.1～31.3;每亩增产率达到22.3～44.9％。 1986年山西省大面积示范约958亩,增产幅度也均在20％以上。     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV 引起的烟草病毒病发病率达50%以上。GMV 在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步研究与肯定CMV 引起的烟草病毒病,有必要由病株分离病毒和进行电子显微镜观察鉴定。     

黄瓜花叶病毒致弱卫星RNA对辅助病毒含量的影响

为研究黄瓜花叶病毒(CMV)弱病毒株的基因组RNA和卫星RNA的含量变化,将一个卫星RNA介导的CMV弱病毒株NDM-1与CMV强毒株在4种寄主系统上进行对照实验.采用RNA点杂交方法,检测从早期接种病毒到大田释放阶段（病毒接种后5到40天）,寄主植物叶组织中的基因组RNA和卫星RNA的相对含量变化.结果显示：弱病毒株NDM-1基因组RNA和卫星RNA负荷量具有寄主效应和时间效应,趋势一致但程度不同.它们在番茄上的变化规律不同于其他寄主而且病毒的致弱效果最明显：在接种后的5～10天 (生产上接种育苗的保护期) ,基因组RNA和卫星RNA相对含量上升,到40天(大田释放期) 时回落至最低.比较NDM-1于不同时间在各寄主上的卫星RNA和基因组RNA的相对比值：在40天时,寄主番茄上的相对比值达15.8,与在其他寄主上和其他时间段比较均有显著差异,即此时卫星RNA达到含量优势.说明弱病毒NDM-1在番茄上的致弱机制为:卫星RNA的大量复制对CMV基因组RNA产生抑制作用.此弱病毒株在烟草和心叶烟中的变化规律基本一致.     

黄瓜花叶病毒卫星RNA致弱辅助病毒的机理

分析了卫星RNA致弱的黄瓜花叶病毒 (CMV)侵染的烟草叶绿体内的CP浓度与花叶症状的严重程度成正相关 .用番茄不孕病毒 (TAV)接种表达CMV卫星RNA的转基因烟草叶绿体中 ,TAV- CP含量明显比不含卫星RNA的TAV株系侵染的低 ,而在细胞质中TAV -CP含量无差别 .用完整游离叶绿体进行体外跨膜运输试验 ,CMV- CP能快速进入离体叶绿体 ,CP降低叶绿体动力学荧光光谱 .将CMV的CP基因与 1 ,5 二磷酸核酮糖羧化酶小亚基引导肽基因进行体外拼接 .借助农杆菌转化烟草 .转基因烟草表现出黄化、根系发育受抑制 ,产生类似病毒侵染的症状 .     

抗CMV的重组番茄

日本烟草产业遗传育种研究所利用基因操作培育出抗黄瓜花叶病毒(CMV)的番茄。导入病毒外壳蛋白基因从而对CMV有抗性的番茄曾由美国Monsanto公司、农林水产省生物资源研究所,武田药品和坂田种子等公司开发过。但是通过导入卫星RNA使重组番茄表现CMV抗性这还是第一次。在申请专利方面与Monsanto公司重组番茄的专利不冲突。CMV的感染可诱导卫星RNA的扩增,使植株产生CMV耐性。这种植株体内的卫星RNA拷贝数并不多。因此,估计能作为杂交种子的亲本使用。实用性极高。番茄在日本的栽培面积约15000万公顷。其中10％发生花叶病。估计大部分是CMV。目前没有什么消     

用黄瓜花叶病毒卫星RNA生防制剂大面积防治麦茬辣椒病毒病

用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）卫星ＲＮＡ生防制剂Ｓ＿（５２）免疫辣椒,能防治辣椒由ＣＭＶ引起的病毒病。用Ｓ＿（５２）免疫接种辣椒的大田对比试验,防效达５９．５－７１．０％,产量比对照增加２６．１－３２．２％,产值增加３３．５－４５．２％。小区对比试验,用Ｓ＿（５２）免疫接种５０天的辣椒,防效达７１．３－９２．９％,免疫接种８０天,防效达５５．９－７８．５％,产量比对照增加３６．０－６５．３％,产值增加４９．３－９３．５％,还有刺激生长,促进早熟和增强对真菌、细菌病害抵抗作用。     

重庆烟草地区ELISA检测

为调查重庆主要烟草地区的病毒病种类,采用没脸免疫吸附法(ELISA)对采自重庆涪陵、彭水、万州、黔江、武隆、酉阳的258份的烟草样品进行了病毒病种类的检测.检测结果表明,其中274份样品呈阳性。主要受到7种病毒病的侵染,主要包括:烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、蚕豆萎蔫病毒2号Broad bean wilt virus 2,BBWV-2)、烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)。其中TMV的检出率最高,达50%,已成为重庆地区烟草优势病原。     

不同CMV分离物侵染寄主的超微结构变化

应用电镜观察了黄瓜花叶病毒CMV不同分离物侵染寄主的细胞 超微结构变化。来自一串红(Salvia splendens)的不含卫星RNA分离物M-22侵染心叶烟,病毒粒子散布于细胞质,在液泡中形成大片病毒粒子结晶,液泡膜边缘产生小泡结构,完整的病毒粒子穿过胞间连丝在细胞间运转,胞间连丝中央部分有扩张现象。自然感染三生烟的含坏死卫星RNA分离物8-S1侵染普通烟,病毒粒子分散于细胞质,在液泡中未观察到结晶体,叶绿体产生囊泡结构,部分病毒粒子处在叶绿体空泡中。田间寄主上受8-S1侵染的三生烟细胞质中分布着大量球形病毒粒子,叶绿体也产生含有病毒粒子的囊泡结构。表明含有卫星RNA和不含卫星RNA的CMV分离物引起的细胞病变特征存在差别,可能是CMV卫星RNA参与病理变化的依据之一。     

卫星RNA使转基因番茄产生病毒抗性

美国马里兰大学P.B.McGarVey和M.S.Montasser及美国农业部J.M.Kapa报道,转基因番茄植株在表达减毒黄瓜花叶病毒(RNA)卫星CMV序列后对CMV-1病毒的试攻显示出抗性。据作者声称,     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV引起的烟草病毒病发病率达50%以上。CMV在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步     

卫星RNA作为黄瓜花叶病毒病生防因子的研究III．卫星RNA对黄瓜花叶病毒感染的烟叶组织中病毒双链RNA含量的影响

用3H尿嘧啶核苷标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析、放射自显影等技术以及根据抗RNA酶和DNA酶的性质比较了感染黄瓜花叶病毒(CMV)及其带有卫星RNA的黄瓜花叶病毒(CMV-S52)的三生烟叶组织中病毒ds RNA含量的变化。结果表明,随接种后时间的延长,CMV-S32感染的组织中卫星RNA的ds RNA含量呈直线增长,第10天达最高峰,而病毒基因组RNA的ds RNA的含量则随时间延长而降低,这一趋势一直延续到最后一次测定。卫星RNA的双链RNA含量也比病毒基因组ds RNA高得多,从接种后的第二天的2．5倍到第10天的20倍及第l{天的近40倍,但不含卫星RNA的cMV接种后在所测定的14天内,各基因组RNA的ds RNA含量比较衡定。     

豇豆病毒病病原的分子鉴定

为澄清浙江省豇豆病毒病病原及其分类,采用马铃薯Y病毒属通用引物Sprimer扩增了浙江豇豆线状病毒基因组3′－末端序列。同时又根据已知CMV RNA3序列设计引物pCMV-44-63/1200-1181,扩增了混合的CMV－ZJ运动蛋白基因全序列。外壳蛋白氨基酸序列分析表明,产中仅存在一种线状病毒（CV－ZJ）,该病毒与一泰国豇豆蚜传花叶病毒（CABMV）具有最高的同源性（98.6%）,与花生条纹病毒（PStV）、石斛花叶病毒（DeMV0．）、赤豆花叶病毒（AZMV）、黑眼豆豆花叶病毒（BICMV）和菜豆普通花叶病毒（BCMV）分离物间的同源性为88.5%－94.4%,而与其它CABMV分离物的同源性均低于70％。进化树分析表明,PStV、AZMV、DeMV、BlCMV和BCMV为同种异名,应统称为BCMV,而CABMV为另一种病毒;CV－ZJ和泰国CABMV分离物应分类为BCMV豇豆株系。CMV－ZJ的运动蛋白序列分析表明,该分离物属于CMV亚组Ⅰ,与其它分离物氨基酸序列同源性为93.1%－97.8%。     

蛋白激发子PeaT1与井冈霉素混合使用诱导烟草对TMV抗性的研究

烟草病毒可侵染危害烟草、番茄、辣椒和土豆等多种作物导致病毒病发生,是生产上难以防治的病害。为了探索蛋白激发子Pea T1与井冈霉素混合使用对烟草病毒病防治的最佳混配比例,本研究选用3-7片真叶的本生烟(Nicotiana benthamiana cv.Huangmiaoyu),分别喷施清水、井冈霉素、蛋白激发子Pea T1及蛋白激发子Pea T1-井冈霉素复合制剂,采用摩擦接种的方式接种TMV-GFP病毒,在紫外光下观察病毒的侵染情况。结果表明,喷施了井冈霉素和蛋白激发子复合制剂的本生烟对TMV的抗性较单剂具有增效作用,其中蛋白激发子Pea T1-井冈霉素按3:4混配的性价比最高,共毒系数达到157.64,相对防效为73.39%。这说明井冈霉素和蛋白激发子Pea T1都能使烟草产生对TMV的系统获得抗性,而其复合制剂更有着叠加效应。     

抗TMV和CMV双价转基因烟草纯合系进入大田试验

植物病毒病被称为作物生长和发育的“癌症”,常造成产量降低、品质下降乃至绝产。植物抗病毒病基因工程研究采用多种抗病毒策略。通过基因转移使植物产生较明显的抗病毒病的功能,在农业生产中具有可应用的良好前景。中国科学院微生物研究所、河南省农科院植物保护研究所。中国农科院烟草研究所的科研人员共同合作,针对国内烟区产生主要危害的烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)及上述两种病毒混合感染的问题,采用双价(TMV     

马铃薯Y病毒N株HC-pro基因的序列分析与表达

马铃薯Ｙ病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯Ｙ病毒属(Potyvirus)的典型成员,是烟草、马铃薯和辣椒等茄科作物病毒病的主要病原之一,分布于世界各地.近年烟草上的 PVY在全国范围内特别是陕西、黄淮和东北烟区流行呈上升趋势,且以PVY坏死株系（PVY-N)为主,重病田发生率达40%以上,并常与烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒混合侵染,严重影响烟草品质造成巨大的经济损失.     

卫星RNA对黄瓜花叶病毒基因组RNA体外合成的影响

卫星ＲＮＡ对黄瓜花叶病毒基因组ＲＮＡ体外合成的影响杨海花,康良仪,赵大健,田波（中国科学院微生物研究所,北京１０００８０）关键词卫星ＲＮＡ,黄瓜花叶病毒,依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶,体外合成利用卫星ＲＮＡ生防制剂控制田间的番茄、青椒、烟草等由黄瓜花叶病...     

卫星RNA研究新进展：结构与功能表达

植物病毒卫星通常是指那些如果没有特定辅助病毒的帮助就不能复制,而它本身对于辅助病毒的复制是不必需的,且与辅助病毒的基因组无序列同源性的一类RNA分子。到目前为止,已报道有六组共26种植物病毒带有卫星。这些植物病毒卫星有的具有编码自身外壳蛋白的遗传信息,称卫星病毒;有的无此编码功能称为病毒卫星RNA。病毒卫星RNA在其发现的早期,其生物学功能尚不为人重视。然而,七十年代早期,在法国阿尔萨斯爆发的由黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus,CMV)侵染引起的番茄作物坏死病被确定与CMV卫星RNA有关,至此,关于卫星RNA的生物