疏水吸附固定化天冬氨酸酶及其性质的研究

本文论述了一种N-烷基琼脂珠衍生物的合成方法,研究了pH,离子强度、载体上疏水基团含量等因素对载体吸附天冬氨酸酶的影响以及固定化天冬酸酶的性质。结果表明邻甲苯胺基琼脂珠在pH5.5,0.1mol/L磷酸缓冲液(含有0.25mol/LKCL)中,每克湿载体可吸附15—25mg酶蛋白,酶活力回收达90％以上。固定化酶的性质有所改变,其热稳定性和操作稳定性明显增强。 固定化天冬氨酸酸柱可以用于连续化生产L-天冬氮酸,在pH8.0,1.0mol/L及丁烯二酸铵(含0.02mol/L MgCl_2),30℃条件下,以空间流速SV=3.5操作2个月,固定化酶活力仍保持79.5％。     

固定化大肠杆菌AS1.76细胞酶促合成头孢立新的研究

本文报道固定化大肠杆菌(E.coli)AS1.76细胞酶促合成．的研究结果。用2％7一ADcA,4％。PGME,在pH6．0,10℃一15℃进行反应,头孢立新的合成率达到82％。在上述条件下,用固定化细胞柱制备头孢立新,每次投7-ADGA log,PGME 20g,平均得头孢立新12g,收率为70．6％。     

固定化大肠杆菌细胞生产Y—氨基丁酸的研究

用海蔑酸钙包埋法将大肠杆菌细胞制成固定化细胞,与1％谷氢酸溶液进行间歇反应,连续搅拌式反应及连续柱式反应生产丫—氨基丁酸。谷氨酸溶液用0．2mol／L醋酸-醋酸钠缓冲液调至pH．4,温度37℃。间歇反应在微生物多用培养箱旋转摇床上120r／mm振荡反应,每批反映6h．100％的谷氨酸可转化为丫—氨基丁酸。连续搅扑式反应在三角瓶反应器中进行,以Gml/h的流速输入底物溶液,输出反应液,转化率达8;％。连续柱式反应在上部膨大、顶端开口的特殊柱反应器中进行,控制流速12ml／h,95％以上的谷氨酸可被转化成Y-氨基丁酸。     

破壁方法对大肠杆菌AS1.881中天冬氨酸酶的影响研究

研究了表面活性剂和超声波对大肠杆菌AS1 .881中天冬氨酸酶活力的影响。结果显示 ,2 -YT培养基提取的天冬氨酸胞内酶 ,用表面活性剂 (曲那通、十二烷基硫酸钠等 )破壁 ,游离细胞的最高酶活力由报道的 1 6万单位每克湿细胞提高到31 .3万单位每克湿细胞。表面活性剂最佳质量浓度范围为 0 .1 6 %～ 0 .5 8%。在 7KHz超声波强度下破壁 5min ,游离细胞的最高酶活力也能提高到 30万单位每克湿细胞 ,证明表面活性剂和超声波处理胞内酶 ,破壁效果好 ,酶活力提高显著     

固定化酶和细胞中应用的新载体

自固定化技术兴起以来 ,其载体的研究就广受关注 ,也取得了不少成就 ,但在实际应用中还有许多问题需要解决 ,如使用寿命较短 ,操作半衰期不够长 ;载体价格较高 ,而且对底物和产物存在扩散阻力 ,所以许多学者仍一直在致力于新载体的研制和应用。固定化技术中所使用的载体可分为有机高分子载体、无机载体和复合载体[1] 。1　有机高分子载体材料1 1　天然高分子凝胶载体此类载体材料一般无毒性 ,传质性能好 ,但强度较低 ,在厌氧条件下易被微生物分解 ,寿命短。常见的有琼脂、海藻酸钠等 ,近来研究的比较热门的新载体是甲壳素和壳聚糖。1 1 1　…     

聚乙烯醇固定化酵母细胞制备CTP研究

以聚乙烯醇为固定化载体,固定化冷冻处理过的啤酒酵母细胞从CMP制备CTP;分别从胶的型号、浓度和固定化方法的优化等方面摸索了最适的固定化条件,固定化细胞在试验条件下连续发酵8次,转化率维持在85%～95%。同时,还对固定化细胞的稳定性进行试验研究,并用HPLC对产品进行了分离鉴定。     

具有谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌固定化细胞

本文研究了用海藻酸钙包埋法制备含谷氨酸脱羧酶固定化细胞的方法以及研究了制备的条件和影响其制备的因素。该法具有包埋细胞活力回收高,方法简便等优点。比较研究了固定化细胞和自然细胞谷氨酸脱羧酶的一些生物化学性质。其中固定化细胞最适pH和pH稳定性增加,最适温度及热稳定性下降;表观米氏常数增大;二价金属离子Zn~(++)、Cu~(++)、Mg~(++)、Fe~(++),Sr~(++)程度不同的抑制酶活性,Ca~(++)激活固定化细胞酶活性,EDTA无抑制作用。对固定化细胞和自然细胞酶活力活化的研究中发现这两种细胞经蒸馏水保温处理后酶活性都上升,且自然细胞酶活的上升较固定化细胞大;而用底物溶液处理后,自然细胞无变化,固定化细胞酶活下降。     

疏水吸附性载体上附加基团对天冬氨酸酶性质的影响

６－氨基已酸和四乙烯基五胺通过高碘酸氧化法分别引入到邻甲苯胺基琼脂珠（ＴＡ）衍生物上,得到ＣＴＡ和ＡＴＡ,天冬氨酸酶在ｐＨ５．５,０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液中,０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ存在下通过疏水吸附固定化在ＴＡ,ＣＴＡ和ＡＴＡ上。结果表明三种固定化酶活力回收均达９０％以上,同ＴＡ－天冬氨酸酶相比,ＣＴＡ－酶,ＡＴＡ－酶的最适ｐＨ,ｐＨ稳定性等均有所改变,其中ＡＴＡ－酶的热稳定性,使用稳定性增强     

固定化细胞和酶生产L-苹果酸的新进展

本文简要地介绍了近年来用固定化细胞和固定化酶连续化生产L-苹果酸的新技术,提取产品的新工艺,L-苹果酸的性质以及它的用途等。     

海因酶产生菌SHNU01的包埋固定化研究

对从土壤中筛选得到的高选择性产D-海因酶菌株SHNU01的性质进行了研究并探讨了用PVA-硼酸法进行包埋固定的效果。研究结果显示:固定化后的细胞与游离细胞相比,最适反应温度由游离细胞的37℃上升为47℃,在此温度下固定化细胞的酶活可达到游离细胞的3倍;连续反应7批后,固定化细胞活力为初始活力的80%。固定化细胞在操作稳定性、贮存稳定性等方面较游离细胞也有较大提高。     

疏水吸附性载体上附加基团对天冬氨酸酶性质的影响

6-氨基己酸和四乙烯基五胺通过高碘酸氧化法分别引入到邻甲苯胺基琼脂珠(TA)衍生物上,得到CTA和ATA,天冬氨酸酶在pH5.5,0.1mol/L磷酸缓冲液中,0.5mol/L KCl存在下通过疏水吸附固定化在TA,CTA和ATA上。结果表明三种固定化酶活力回收均达90％以上,同TA-天冬氨酸酶相比,CTA-酶,ATA-酶的最适pH,pH稳定性等均有所改变,其中ATA-酶的热稳定性,使用稳定性增强,CTA-酶的稳定性降低。     

利用固定化重组大肠杆菌细胞生产D-塔格糖

利用经海藻酸钙包埋的重组大肠杆菌细胞催化D-半乳糖生产D-塔格糖,考察了细胞包埋量、反应条件对固定化细胞催化效率以及对D-塔格糖生产稳定性的影响。确定的最优转化条件为:温度65℃,pH 6.5,添加终浓度为1 mmol/L Mn²⁺,底物(D-半乳糖)浓度100 g/L,重组大肠杆菌细胞用量40 g/L。固定化小球在0.3%戊二醛溶液中交联30 min可以显著提高其在高温下的机械强度。考察了异构化反应体系中硼酸与底物间的摩尔比对产率的影响。研究结果表明,添加适量的硼酸可以改变原有的化学反应平衡,实现D-塔格糖的高产。利用D-半乳糖为底物在最优的反应条件下催化24 h,固定化细胞对D-半乳糖的转化率最高,可达65.8%,连续转化8批次的平均转化率为60.6%,为工业化生产D-塔格糖奠定了基础。     

固定化尖镰孢菌细胞的某些酶学特性

尖镰孢菌(Fusariun oxysporum)33—11是一株青霉素V酰化酶的高产菌株。用二醋酸纤维素固定的该菌细胞裂解青霉素V最适的Ph范围为7．4至7.6;最适的反应温度为45℃至48℃;其酶活性受8-羟基喹啉和EDTA的可逆抑制,Mg²⁺、Zn^2-和Mn^2-离子则有激活作用。采用问歇式搅拌裂解青霉素V,测得0．6rnm颗粒度固定化细胞的表观km值为11．7mmol／L。裂解青霉素V的反应活化能为33kJ／mol;底物抑制常数Ks为1950mmol/L;苯氧乙酸和6-APA的抑制常数分别为220mmol／L和270mm0I／L,在裂解反应中．前者是竞争性抑制剂,后者是非竞争性抑制剂。     

固定化大肠杆菌连续生产天门冬氨酸的过程模拟和分析

用卡拉胶包埋大肠杆菌细胞,得到了强度好,活性高的固定化细胞。实验研究了固定化细胞的催化反应速度．扩散-反应模型的计算机分析结果与全混釜反应器实验数据具有相同的规律。列管换热式固定床反应器中的浓度分布可用拟均相一维数学模型描述。从浓度分布和放热量考虑,宜采用串联的填充等量固定化细胞的两只反应器,前者是列管换热式,后者是绝热式。固定化细胞的宏观失活规律可分为三个阶段。开始近似于一级失活,后来保持活力不 变,最后失活较快。