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幼畜腹泻双价基因工程疫苗(K88、K99)的高密度发酵生产工艺及抗原过量表达 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道了幼畜腹泻双价基因工程疫苗(K88、K99)的高密度发酵生产工艺和抗原基因的过量表达研究结果。采用New Biunswick公司发酵罐,主要发酵参数为搅拌速度1000rpm,通气量为18L/min,溶氧为25%,pH6.5,罐压为48.3kPa,温度37℃,发酵时间为20h。菌体浓度为A 6 0 0 nm40以上,K88、K99抗原效价分别达212水平。发酵过程中发现表达的抗原除装配细菌伞毛之外,过量表达的抗原以相当于伞毛中抗原浓度游离存在于溶液中。含双价疫苗基因的表选型质粒的稳定性在发酵20h后保持在70%。本文结果表明利用小型发酵罐(10L发酵液)每次可制备10000支疫苗,完全可以满足对幼畜腹泻基因工程疫苗盼大量需要。 相似文献
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本文报道了在幼畜腹泻双价基因工程菌(K88、K99)的高密度发酵和抗原蛋白基因过量表达的研究基础上生产抗原蛋白疫苗的工艺。高密度发酵的工程菌(K88、K99)发酵液经65℃保温处理、离心除去菌体,清液部分含发酵液中抗原量的80%,加聚乙二醇(至最终浓度为7%)沉淀可回收全部抗原蛋白,加消毒的生理盐水溶解及稀释后分装冻干制成抗原蛋白疫苗。疫苗的组成份主要有分子量为52、36、22、18kd的蛋白。此法制备的双价疫苗不经甲醛处理,保持了抗原蛋白的天然空间结构,因此用其免疫怀孕的母猪、分娩后母猪乳汁中含有较高效价的抗体、能中和肠毒素大肠杆苗,有效地保护了仔猪黄痢的危害。 相似文献
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基因工程菌的发酵研究 总被引:19,自引:0,他引:19
本文对大肠杆菌表达的rhGM-CSF工程菌的发酵条件进行了详细的研究,探讨了发酵条件对工程菌表达外源蛋白量的影响,优化了影响发酵的各种条件,形成了一套工程菌发酵表达外源蛋白的工艺,并从工业化角度对工程菌的高密度高表达间的关系进行了探讨。 相似文献
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基因工程鱼生长激素的生产研究 总被引:5,自引:0,他引:5
以PRPL,Trp启动子在大肠杆菌中表达鲤鱼生长激素重组DNA,经过高密度发酵.包涵体的提取,恢复天然结构。每升发酵可碍2g鱼生长激素。在上海地区以浸渍方法处理对虾苗并在人工饲料中添加鱼生长激素,提高虾苗的存活率并增加产量,提高了饲料的转化率。 相似文献
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用重组大肠杆菌发酵生产人生长激素研究 总被引:5,自引:1,他引:4
通过不同培养基、不同糖浓度对重组菌E.coliDH10B/pINⅢA3HGH的菌体生长与外源蛋白表达量的影响的比较,确定较为合适的培养条件,并对发酵过程中调节pH的氨水用量与外源蛋白的表达量之间的相关性作探索,得到相关性曲线,从而根据氨水用量了解细菌的生长状况。 相似文献
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采用液体培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基和强化营养肉汤培养基对大肠杆菌K88进行发酵培养,采用不同摇瓶培养时间和不同pH值的培养基观察发酵结果,研究菌体和菌毛生产量的相关性,并通过紫外分光光度计UV751于600nm处测量菌体OD值以对菌种发酵情况进行检测.热激分离菌体和菌毛蛋白,(NH4)2SO4盐析分离纯化K88菌毛蛋白并用分光光度计于280nm处测定其OD值.透析后经SDSP-AGE检测菌毛蛋白纯度.根据实验结果优化发酵培养条件,确定菌种的最佳发酵工艺,以收获最多的K88菌毛蛋白.经过实验研究,最终确定了大肠杆菌K88在pH值为6.5、转速为250r/min的条件下发酵18个h,菌体和菌毛生产量均达到高峰,同时得出菌毛蛋白和菌体成正相关. 相似文献
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分别采用LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、强化营养培养基、玉米浆培养基对大肠杆菌K88进行发酵培养,选出最适于大肠杆菌K88生长的玉米浆培养基;采用正交实验对玉米浆培养基的C/N、K2HPO4/KH2PO4、Mg^2+的配比进行优化,筛选最适于大肠杆菌K88生长的营养配比;研究生长曲线、接种量以及菌体和菌毛生产量的相关性,根据实验结果优化发酵培养条件,确定菌种的最佳发酵工艺,以收获最多的K88菌毛蛋白。研究表明,K88大肠杆菌在玉米浆培养基C/N、K2HP04/KH2PO4的配比分别为5/11、1/1,Mg^2+为0.1g/mL,pH值为7.2,转速为200r/min,接种量为4.5%的条件下发酵26个小时,菌体和菌毛生产量均达到高峰,同时得出菌毛蛋白产生量和菌体量成正相关。 相似文献
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血管生成抑制素基因工程大肠杆菌的高密度发酵研究 总被引:8,自引:0,他引:8
用5L发酵罐研究了E.coli TG1/pBVA2和E.coli TG1/pBVK13的高密度培养工艺,确定了诱导及补料策略,在不降低外源基因表达量的前提下,工程菌TG1/pBVA2高密度发酵菌体干重为16.8g/L,hAGN(K1-4)的表达量为菌体总蛋白的24.1%,相当于1.39 g/L;同样的方法, 工程菌TG1/pBVK13菌体干重可达16g/L, hAGN(K1-3)占菌体总蛋白25.8%,相当于1.45 g/L。 相似文献
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大肠杆菌发酵重组人干扰素—α2a的高密度,高表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用NBS公司的BioFloⅢ发酵罐,采用培养基流加的方式培养表达人干扰素的E.coli工程菌,结果湿菌重达128g/L,干扰素活性达98×1010U/L发酵液。 相似文献
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基因工程菌的发酵研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对大肠杆菌表达的rhGM - CSF 工程菌的发酵条件进行了详细的研究, 探讨了发酵条件对工程菌表达外源蛋白量的影响, 优化了影响发酵的各种条件, 形成了一套工程菌发酵表达外源蛋白的工艺, 并从工业化角度对工程菌的高密度高表达间的关系进行了探讨。 相似文献
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α2a型基因工程干扰素发酵工艺的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对干扰素工程菌PBV320/7118-α2a型发酵工艺,由批式培养改为反馈式流加培养^[1]可显著提高工程菌PBV320/7188-α2a在40L发酵罐中的菌体产量及干扰素的表达水平。 相似文献
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利用美国NBS公司BibFloⅢ型发酵罐,采用连续流加的方法培养能表达IL-2的E.coli,结果细菌温重达100g/L发酵液,IL-2活性达1.52×1010U/L发酵液。 相似文献
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用添加氧载体(油酸、豆油)、表面活性剂(Triton-X100)及H2O2的方法,改善L-苯丙氨酸发酵体系中的氧传递速率,以提高苯丙氨酸的产量。实验结果表明,在发酵0h添加1%的豆油、3%的油酸均可使产酸提高,分别可以使L-phe产量提高21.1%和39.5%;发酵0h同时加入3%油酸和0.05%Triton-X100时,提高产量78.95%;发酵12h添加0.075%H2O2,可以提高产苯丙氨酸产量18.42%。 相似文献