益生菌Lactobacillus casei Zhang增殖培养基的优化

Lactobacillus casei Zhang是一株分离自传统酸马奶中的益生菌。本文研究了不同碳源、氮源、碳氮比例、微量元素及缓冲盐对Lactobacillus casei Zhang增殖培养的效果, 并采用响应面法对优选的碳源、氮源和缓冲盐类的组成含量进行优化, 得到Lactobacillus casei Zhang的增殖培养基为：葡萄糖 20.9 g/L、大豆蛋白胨10.45 g/L、酵母粉10.45 g/L、K2HPO4 3.5 g/L、醋酸钠14.6 g/L、柠檬酸钠2.3 g/L、MgSO4?7H2O 1 g/L、MnSO4?5H2O 54 mg/L、CuSO4?5H2O 10 mg/L、吐温80为1 g/L。Lactobacillus casei Zhang在此增殖培养基中经37℃18 h培养活菌数可达到4.78×109 CFU/mL, 比在MRS中(4.8×108 CFU/mL)提高近10倍。     

益生菌Lactobacillus casei Zhang增殖培养基的优化

Lactobacillus casei Zhang 是一株分离自传统酸马奶中的益生菌.本文研究了不同碳源、氮源、碳氮比例、微量元素及缓冲盐对 Lactobacillus casei Zhang 增殖培养的效果,并采用响应面法对优选的碳源、氮源和缓冲盐类的组成含量进行优化,得到 Lactobacillus casei Zhang 的增殖培养基为:葡萄糖20.9 g/L、大豆蛋白胨10.45 g/L、酵母粉10.45 g/L、K2HPO4 3.5 g/L、醋酸钠14.6 g/L、柠檬酸钠2.3 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L,MnSO4·5H2O 54 mg/L、CuSO4·5H2O 10 mg/L、吐温80为1 g/L.Lactobacillus casei Zhang 在此增殖培养基中经37℃ 18 h培养活茵数可达到4.78×109 CFU/mL,比在MRS中(4.8×108 CFU/mL)提高近10倍.     

益生菌Lactobacillus casei Zhang固态发酵条件的优化

利用一株分离自传统发酵酸马奶中的益生干酪乳杆菌（Lactobacillus casei Zhang）进行固态发酵（Solid State Fermentation,SSF）。以发酵物中的活菌数为主要指标,采用九因素四水平（L32（4^9））的正交试验优化固态发酵培养基,并在优化的培养基基础上研究不同的初始含水量及培养时间对Lactobacillus casei Zhang活菌数的影响。实验结果表明,在固态发酵培养基组成为4g豆粕、5g麸皮、0．6g乳清粉、0．3g葡萄糖、0．3g碳酸钙、0．02g硫酸铵、0．01g硫酸镁,初始含水量为55％的优化条件下,37℃发酵60h,发酵物中Lactobacillus casei Zhang活菌数可达到4．08×10^10CFU／g。     

应用双向荧光差异凝胶技术解析干酪乳杆菌Lactobacillus casei Zhang驯化菌株耐酸胁迫机制

以干酪乳杆菌Lactobacillus casei Zhang为出发菌株,通过适应性进化获得了干酪乳杆菌酸胁迫抗性驯化菌株.对细胞内微环境的检测发现,驯化菌株在酸胁迫过程中能够维持较高的磷酸烯醇式丙酮酸-糖转移酶系统活力,并具有较高的H+ -ATPase活性以及胞内ATP浓度.蛋白质组学分析结果表明,酸胁迫引发了细胞蛋白表达的变化,与原始菌株相比,驯化菌株保持了更高的代谢活性;同时,驯化菌株通过大量诱导应激蛋白如分子伴侣GroEL、GrpE,冷/热应激蛋白CspC、DnaK等维持了细胞的生理活性,有效提高了细胞对酸胁迫的抵御能力.本研究为进一步揭示酸胁迫下乳酸菌细胞的生理应答机制,探寻促进乳酸菌酸胁迫性能提升的最优策略,进而改善其在生产中的应用性能提供了可借鉴的思路.     

优化益生菌Lactobacillus casei Zhang高密度培养条件

为实现L. casei Zhang的高密度培养,在之前优化增殖培养基的基础上进一步寻求适宜该菌的培养条件。研究了不同中和剂、缓冲盐浓度、葡萄糖浓度、pH值控制、通气条件和补料分批培养对菌体在恒pH条件下发酵的影响,根据不同条件下菌体的比生长速率、菌体密度和活菌数情况,确定L. casei Zhang较适宜的高密度培养条件为：培养基葡萄糖浓度为80 g/L~100 g/L,以氨水为中和剂使pH保持5.9,采用间歇通氮气的方法保持环境厌氧,分批培养方式下37°C保温发酵10 h~12 h后,L. casei Zhang细胞干重达到7 g/L,活菌数3.5×1010 CFU/mL,比优化前提高7倍以上,能够满足益生菌制品生产要求的高菌体密度。     

Lactobacillus casei磷脂酶A_2基因在大肠杆菌中的重组表达

以Lactobacillus casei染色体基因组为模板,PCR扩增获得磷脂酶A2基因pla2,以pET-28a(+)为载体构建重组表达质粒pET-28a(+)-pla2。通过IPTG诱导实现磷脂酶A2在E.coli DE3中的重组表达。对诱导条件初步优化后,重组菌酶活最大可达2.8 U/mL。通过Ni-螯合柱对目的蛋白进行纯化,SDS-PAGE分析重组磷脂酶A2相对分子质量为1.7×104。通过酶学性质分析,最适温度为37℃,最适pH 8,比酶活为110 U/mg。     

马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens )合成开菲尔多糖培养基组成的优化

研究了发酵培养基组成对Lactobacillus kefiranofaciens的菌体生长以及合成开菲尔多糖(Kefiran)的影响。通过比较L. kefiranofaciens利用各种糖类和麦芽汁的发酵情况,发现麦芽汁最利于菌体生长及发酵产糖;各种氮源对L. kefiranofaciens发酵影响不同,其中以酵母粉最好,采用一品鲜酵母粉发酵的最佳浓度为10%;正交实验和RSA方法确定对发酵影响显著的三个无机盐是MnSO4.4H2O、MgSO4.7H2O和KH2PO4,最佳用量为0.2g/L,1g/L,4g/L,此时发酵获得开菲尔多糖产量为2.6±0.05g/L。L. kefiranofaciens发酵生产开菲尔多糖96h时可达到最佳发酵结果。     

复合益生菌粉对功能性便秘小鼠润肠通便的作用

探究由乳双歧杆菌V9、干酪乳杆菌Zhang、植物乳杆菌P9组成的复合益生菌粉对便秘模型小鼠的排便情况、肠动力水平的改善及肠道菌群结构的调整作用。

将100只Balb/c小鼠随机分为A、B两大组,每组又随机分为空白组、模型组以及复合益生菌粉低剂量组、中剂量组、高剂量组,其中A组50只用于排便情况测定,B组50只用于结肠HE染色及肠道菌群的检测。实验共进行15 d,空白组与模型组小鼠灌胃蒸馏水15 d,复合益生菌粉各剂量组小鼠灌胃相应剂量的复合益生菌粉15 d;同时,除空白组外,于第7天、第15天灌胃盐酸洛哌丁胺（4 mg/kg）进行造模。

与空白组相比,模型组小鼠首次排便时间显著延长（P＜0.01）,6 h内粪便质量显著减轻（P＜0.05）,肠推进率显著降低（P＜0.05）,提示造模成功;与模型组相比,复合益生菌粉低、高剂量组首次排黑便时间显著缩短（P＜0.05）,肠推进率显著升高（P＜0.05）,同时高剂量组小鼠6 h排便量增加（P＜0.05）。HE结果显示,复合益生菌粉可以增厚结肠肌层,恢复受损的结肠黏膜组织,并且腺管排列恢复至正常水平。菌群测序结果显示,与空白组相比,模型组小鼠肠道菌群结构发生显著改变;与模型组相比,复合益生菌粉中、高剂量组显著提高便秘模型小鼠肠道菌群的丰富度,其中Patescibacteria、厚壁菌门、放线菌门、疣微菌门、Eubacterium xylanophilum_group等丰度增加,另枝菌属、Odoribacter等丰度降低。

复合益生菌粉能够通过促进肠蠕动,调整肠道菌群结构发挥缓解小鼠便秘的作用。

     

茯苓菌丝发酵液粗多糖对肠道益生菌的影响

目的探究茯苓菌丝发酵液中提取的粗多糖对肠道益生菌的影响。方法运用发酵工程相关技术获得茯苓菌丝发酵液,提纯分离以获取茯苓菌丝中分泌的粗多糖。将提取出的茯苓粗多糖以10.0%、5.0%、2.5%和空白对照(0.0%)的浓度对4种肠道益生菌——嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳杆菌MZ900、青春双歧杆菌的生长进行观察。结果在茯苓粗多糖含量10.0%以下的范围内,10.0%、5.0%、2.5%浓度下肠道益生菌数量均高于对照组,并且随着茯苓发酵液粗多糖浓度的含量增加,4种肠道益生菌数量呈正相关增长。结论茯苓菌丝发酵液粗多糖对以上4种肠道益生菌有增菌效果。实验结果为茯苓菌丝发酵液粗多糖有保护人类肠道的作用提供理论依据,并为后续的生化研究与动物实验提供理论基础。     

数学模型法研究L．casei LC2W对H.pylori SS1黏附MKN-45细胞的抑制作用

目的研究干酪乳杆菌LC2W对幽门螺杆菌（H.pylori）SS1黏附MKN-45的抑制作用,探讨益生菌对致病菌拈抗的机制。方法体外培养人胃癌细胞MKN-45,采用平板计数的方法研究2株细菌的黏附性质;引入数学模型,比较LC2W与H.pylori SS1的竞争、排除和替代作用。结果运用模型可以估算出LC2W和H.pylori SS1对MKN-45最大黏附数和亲和力的大小,并可以预测在混合体系中2种菌黏附的比例;实验发现LC2W对H.pylori SS1的黏附具有很强的竞争作用和排除作用,且这2种作用存在明显的量效关系。LC2W对H.pylori SS1的黏附的替代作用不明显或过程非常缓慢。结论所采用的数学模型能较好的模拟LC2W和H.pylori SS1黏附及LC2W对H.pylori SS1黏附抑制作用,这种抑制作用主要是通过竞争性占位形成的。     

Thymine transport in Lactobacillus casei

Abstract A transport system for thymine was investigated in a Lactobacillus casei mutant lacking thymidine phosphorylase activity (the first enzyme required for thymine utilization). Transport was dependent on an energy supply; transport was inhibited by the uncouplers carbonylcyanide-m-chlorophenylhydrazone (CCCP) and 2,4 dinitrophenol (DNP), and also by sodium azide and N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCCD). Thymine transport was inhibited by some uracil and adenosine derivatives and by thymidine, but was not affected by guanosine, deoxycytidine or azacytidine. Inhibition by p-chloromercurybenzoate (PCMB) was reversed by dithiothreitol (DTT).     

环丙沙星预先处理牙鲆消化道对干酪乳杆菌定植的影响

利用1株干酪乳杆菌,通过实验研究用环丙沙星预先处理牙鲆消化道后乳杆菌的定植和演替规律。在投喂含有1.2×10^9CFU/g乳杆菌的饲料5 d后,消化道定植的乳杆菌超过106CFU/g,其后维持在10^6～10^8CFU/g动态平衡中。同时随着乳杆菌的投喂,不经环丙沙星预先处理牙鲆消化道的正常组,鱼消化道的弧菌数从10^7～8CFU/g降低到10^6CFU/g左右;而经环丙沙星预先处理牙鲆消化道的药饵组,鱼胃、小肠和盲囊的弧菌数则是先增加,然后显著下降。停喂乳杆菌7 d后,2个实验组鱼消化道的乳杆菌均从10^5～6CFU/g下降到10^4CFU/g,干酪乳杆菌正常组鱼盲囊中弧菌从10^5CFU/g回升到10^6CFU/g,胃和小肠中弧菌数量基本不变。干酪乳杆菌药饵组则有所不同：除胃中弧菌数量则基本不变外,盲囊和小肠中弧菌数量继续下降,其原因有待进一步研究。实验结果表明,干酪乳杆菌能在牙鲆消化道内定植,而用预先处理牙鲆消化道后,更有利于乳杆菌的定植;乳杆菌的投喂和定植,使牙鲆消化道中的弧菌数量明显下降。     

A new synbiotic, Lactobacillus casei subsp. casei together with dextran, reduces murine and human allergic reaction

We studied the development of atopic dermatitis-like skin lesions in NC/Nga mice and the allergic symptoms and blood patterns of healthy volunteers during the cedar (Cryptomeria japonica) pollen season in Japan following oral administration of a new synbiotic, Lactobacillus casei subsp. casei together with dextran. The combination of L. casei subsp. casei and dextran significantly decreased clinical skin severity scores and total immunoglobulin E levels in sera of NC/Nga mice that had developed picryl chloride-induced and Dermatophagoides pteronyssinus crude extract-swabbed atopic dermatitis-like skin lesions. During the most common Japanese cedar pollen season, synbiotic L. casei subsp. casei and dextran in humans led to no significant changes in total nasal and ocular symptom scores, in the levels of cedar pollen-specific immunoglobulin E, interferon-gamma and thymus and activation regulated chemokine or in the number of eosinophils in sera, whereas the placebo group showed a tendency for increased levels of cedar pollen-specific immunoglobulin E, thymus and activation regulated chemokine and number of eosinophils, and a decrease in interferon-gamma levels. Thus, the oral administration of synbiotic L. casei subsp. casei together with dextran appears to be an effective supplement for the prevention and treatment of allergic reactions.     

具有抑制单胺氧化酶作用的干酪乳杆菌JH-23的药敏性研究

采取纸片琼脂扩散法对具有抑制单胺氧化酶作用的干酪乳杆菌JH-23进行抗生素的敏感性测定.考察了不同菌液浓度、培养时间和接种方式对药敏性实验的影响,在此基础上建立了其对12类30种抗生素的药敏谱,以进一步全面评估该益生菌的安全性.     

Inducible resistance against nisin in Lactobacillus casei

Most strains of Lactobacillus casei tested were found to be nisin-resistant. The addition of nisin to a growing culture of a resistant strain stopped growth for several hours; however, growth then resumed at the previous rate. Nisin induced a resistance mechanism that was lost by one passage in nisin-free medium. During induction with nisin, the cells produced an anionic, phosphate-containing polysaccharide with the subunits rhamnose and galactose. This polysaccharide protected sensitive cells of L. casei against the bactericidal action of nisin. Received: 27 July 1995 / Accepted: 30 October 1995