POLG1外显子1、3、4、7突变与弱精子症的相关性及其对mtDNA和4977 bp缺失的影响

为了探索POLG1外显子1、3、4、7突变与弱精子症的相关性及对mtDNA序列突变和4 977 bp缺失的影响,按WHO标准收集了120例弱精子症和101例精子活力正常的精液标本,经PCR测序分析POLG1外显子1、3、4、7突变,继而测序检测9例外显子4 c.948 GA突变的弱精子症标本、9例无c.948 GA突变的弱精子症标本和9例正常对照标本的mtDNA全序列,利用巢式PCR技术分析9例c.948 GA突变标本、9例无c.948 GA突变的弱精子症标本和9例对照标本的4 977 bp缺失。结果显示:在120例弱精子症中发现POLG1外显子4 c.948 GA突变9例(7.5%),显著高于对照组(0%,P0.05)。c.948 GA突变组mtDNA全序中突变率与对照组比无统计学差异(P0.05)。作者关注的两组中,突变数有差异的位点累积突变频次突变组显著高于对照组(P0.05),但与无c.948 GA突变的弱精子症标本的累积突变频次比较无统计学意义;突变组mtDNA 4 977 bp缺失率(7/9,77.8%)显著高于对照组(2/9,22.2%,P0.05)和无c.948 GA突变的弱精子症组(2/9,22.2%,P0.05)。以上结果提示,弱精子症的发生可能与POLG1 c.948 GA突变有相关性,弱精子症线粒体DNA某些位点的累积突变率增高,但可能不是POLG1 c.948 GA突变引起;c.948 GA突变可能会增加mtDNA 4 977 bp缺失,从而影响精子线粒体功能,导致精子活动力下降。     

线粒体DNA4977bp大片缺失突变与喉癌的相关性研究

目的:探讨线粒体DNA4977bp大片缺失突变与喉癌的相关性。方法:选择2016年1月～2017年6月我院收治的喉乳头状瘤、喉癌患者,分别纳入良性肿瘤组、恶性肿瘤组,每组各150例。取两组患者的病变组织标本,分离癌及癌旁组织,提取总DNA,采用PCR扩增测序技术检测两组标本中线粒体DNA4977bp大片缺失突变情况。结果:基因测序结果显示恶性肿瘤组患者的线粒体DNA4977bp缺失突变率为39.33%,高于良性肿瘤组患者的1.33%,差异具有统计学意义(P0.05)。不同肿瘤分期患者的线粒体DNA4977bp缺失突变率比较,差异具有统计学意义(P0.05),且III期患者的突变率II期 I期 IV期;淋巴结转移患者的线粒体DNA4977bp缺失突变率高于淋巴结未转移患者差异具有统计学意义(P0.05)。结论:线粒体DNA4977bp大片缺失突变与喉癌的发生有关,可能促进的发生和进展。     

PCR-RFLP和PCR-SSCP方法对弱精子症精子mtATPase6基因突变的检测

为了检测弱精子症精子mtATPase6基因突变,采用PCR方法扩增了17例弱精子症mtDNA8602～9416区域815bp目的片段,用MspI和HaeⅢ限制性内切酶酶切,分别用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和单链构像多态性(SSCP)筛查突变。筛选出3例突变标本,经测序确认突变位点和突变性质。结果显示17例标本全部扩增出mtDNA8602～9416的815bp目的片段,PCR产物经MspI限制性内切酶酶切后电泳结果与剑桥序列预期酶切图谱相一致。PCR产物经HaeⅢ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上出现泳动带的异常,在17例弱精子症中共筛选出2例酶切片段异常标本。PCR-HaeⅢ酶切产物的SSCP电泳图谱分析结果显示,在PCR-RFLP(HaeⅢ)电泳图谱正常的15例弱精子症标本中筛选出1例异常。两种方法在弱精子症精子标本中筛选出mtATPase6基因突变3例(3/17,17.7%)。3例测序结果发现A8701G、C8943T、C8964T、T8966C、G9053A、C9060A、C9075T、A9120G、C9296T共9个点突变,其中A8701G、T8966C、G9053A三个突变为错义突变,其余均为同义突变。上述结果提示,弱精子症精子mtATPase6基因存在较高突变率;PCR-RFLP和PCR-SSCP能简单、快速、灵敏地筛选mtATPase6基因突变。     

mtATPase6基因变异与弱精子症的相关分析

为了分析mtATPase6基因突变与弱精子症的相关性,按wHO标准收集了27例弱精子症精液标本和28例精子活力正常精液标本,PCR扩增mtATPase6基因,纯化测序,分析mtATPase6基因突变,比较两组突变频率的差异.结合生物信息学工具分析错义突变位点的氨基酸进化保守性及其蛋白质部分三级结构.结果显示:发现了6个未曾报道过的突变位点;弱精子症组mtATPase6基因平均突变率显著高于对照组,可能与弱精子症有一定的相关性.G8584A、A8701G和G9053A三个错义突变可能是多态性位点,其余8个错义突变中的6个具有进化保守性的位点累计突变频率显著高于对照组,这些位点突变可能与弱精子症有关.     

特发性少精子症和无精子症与Pygo2基因蛋白编码区SNPs的相关性

男性不育常伴随精子数量减少。Pygo2基因在染色质重塑的伸长精细胞中表达, 其功能受损会导致精子形成阻滞和精子生成减少而引发不育。文章旨在检测引起人特发性少精子症和无精子症的Pygo2基因突变。从77例正常生育力男性和195例特发性少精子症和无精子症患者静脉血提取DNA, 采用聚合酶链式反应-测序方法对Pygo2基因3个蛋白质编码区进行测序对比, 非同义单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)位点分别用SIFT、Polyphen-2和 Mutation Taster软件进行诱发蛋白质结构和表型改变的检测和分析。结果表明, 195例患者中, 178例(30例轻度或中度少精子症, 57例重度少精子症和91例无精子症)基因序列分析报告完好, 无精子症中3例患者分别在2个位点(rs61758740, rs141722381)发生了非同义突变SNPs, 重度少精子症中1例患者在位点rs61758741发生了非同义突变, 3个突变位点在SNPs基因数据库都已有报道, 轻度或中度少精子症患者以及正常生育力男性中不存在SNPs。rs61758740可使PYGO2蛋白第141位蛋氨酸(M)变为异亮氨酸(I), rs61758741使PYGO2蛋白第261位碱性赖氨酸(K)变为酸性谷氨酸(E), rs141722381使PYGO2蛋白第240位亲水侧链天冬酰胺(N)变为疏水侧链异亮氨酸(I)。软件分析表明, 在所发现的3个SNP非同义突变位点中, rs141722381引起的单个氨基酸改变会导致PYGO2蛋白空间结构破坏和诱发相关疾病。因此, Pygo2基因蛋白质编码序列区SNPs可能是特发性少精子症和无精子症的诱发因素之一, 导致男性不育。     

左卡尼汀配合复方玄驹胶囊对特发性少弱精子症的疗效观察

目的：观察复方玄驹胶囊联合左卡尼汀口服液治疗不同程度的特发性少弱精症的临床疗效。方法：选择2010年6月．2012年9月就诊于内蒙古医科大学第一附属医院的少弱精症者300例,其中重度少、弱精症者70例（治疗l组）,中度少、弱精症者110例（治疗2组）,轻度少、弱精症者120例（治疗3组）。另选择同期来我院进行健康体检者100例,将其作为对照纽。治疗组口服左卡尼汀口服溶液及复方玄驹胶囊,持续时间3个月。每一位被研究对象都在治疗前后定期进行血常规、尿常规、肝功能和肾功能四个方面的检查,同时观察服药患者在治疗过程中发生的不良反应。并对精液量、精子密度、A级精子等指标进行观察和比较。轻中度患者观察其（A＋B）级精子,重度患者观察其（B＋C）级精子,同时评价其治疗前后的生育能力,并与对照组比较。结果：与治疗前比较,治疗1、2、3组治疗后精液量[（3．7±1．6、3．7±1．1、3．8±1．2）mL]、精子密度[（3．4±1．4、23．2±1．8、39．6±14．2）（mol/L）]、A级精子[（3．6±2．5、15．6±6.3、28．6±9．6）％]、（A＋B）级精子、（B＋C）级精子比例、生育力指数（0．2±0．0、0．8±0．1、1．4±0．1）均升高明显,差异显著（P〈0．05）;与对照组比较,治疗1、2、3组治疗前均有所减少,治疗1、2组治疗后虽有所上升,但还是显著低于对照组（P〈0．05）,治疗3组治疗后与对照组差异不大,提示该方法对轻度少、弱精症者效果较重、中度好。结论：左卡尼汀配合复方玄驹胶囊对特发性少弱精子症效果显著。     

少弱精子症患者精子候选差异蛋白Trx 2、TrxR 1的验证及在少精、弱精子症中的表达研究

目的:根据TMT技术筛选少弱精子症患者精子差异蛋白的结果,选取硫氧还蛋白2(thioredoxin 2,Trx 2)、硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR 1)进行验证,探讨二者在少精、弱精和少弱精子症中的表达变化及其意义。方法:收集105例少精子症组(O组)、150例弱精子症组(A组)、50例少弱精子症组(OA组)和106例正常精液男性(N组)精液,分离出精子,对少弱精子症进行串联质谱标签(Tandem Mass Tag,TMT)技术蛋白质组学分析,根据少弱精子症组的精子差异蛋白结果选取Trx 2、TrxR 1,通过免疫荧光和免疫印迹方法检测其在O组、A组、OA组的表达情况。结果:TMT技术蛋白质组学结果显示Trx 2为上调差异蛋白(为N组的1.31倍),TrxR 1为下调差异蛋白(为N组的0.82倍)。免疫荧光和免疫印迹结果显示O组、A组、OA组Trx 2表达显著高于N组(P0.05),O组、OA组TrxR 1的表达显著低于N组(P0.05)。二者在OA组的结果与蛋白质组学结果一致。结论:Trx 2、TrxR 1可能在少精、弱精及少弱精子症的发生中起着重要的作用,并有望成为少弱精子症患者精子的候选标志物及治疗靶点。     

冷刺激诱导的弱精子症大鼠模型肾上腺轴与甲状腺轴功能改变的研究

目的:研究冷刺激诱导建立的弱精子症模型大鼠HPA轴与HPT轴功能改变,探讨其生殖生物学意义。方法:取28只SPF级性成熟雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组,12只)与冷刺激组(C组,16只)。造模结束前对大鼠一般情况包括精神状态、体重、核心体温、尿量等进行检测。23周后通过精子功能的评定筛选弱精子症大鼠并建立弱精子症组(CA组),同时取外周血清、HPA轴、HPT轴相关组织;ELISA法和放射免疫法测定各组大鼠外周血清HPA、HPT轴相关激素水平,并在光镜下观察HPA轴和HPT轴相关组织形态学改变。结果:与N组相比,CA组大鼠反应迟钝,活动能力降低,夹尾试验评分显著降低,核心体温及尿量升高,差异显著(P0.05)。血清激素结果表现为CA组EPI显著升高,T3/T4比值亦显著升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。光镜下可见N组各组织形态正常,与N组相比,CA组下丘脑室旁核神经细胞增生,排列紊乱;垂体细胞水肿,血窦不明显,嗜酸性细胞增多;肾上腺以皮、髓质水肿改变为主;甲状腺滤泡萎缩,上皮细胞增生。结论:冷刺激诱导建立的弱精子症大鼠模型可发生HPA轴功能改变,呈现慢性应激反应现象,提示,HPA轴功能改变参与该模型弱精子症的的发生发展过程。     

Dystrophin基因3-7号外显子缺失后下游新翻译区启动与BMD关系的生物信息学分析

目的:研究dystrophin基因3-7号外显子缺失后下游新翻译区启动与贝克氏肌营养不良(Becker muscular dystrophy,BMD)的关系及可能机制.方法:用生物信息学方法对dystrophin基因3-7号外显子缺失后可能的启动子、开放阅读框、翻译起始位点、蛋白疏水性性质改变及重要结构域进行分析.结果:3-7号外显子缺失后,起始于正常肌肉启动子的转录体,其翻译阅读框提前终止,但在8号外显子内可能启动一个新的翻译阅读框;内含子2或7里可能含有类似启动子的元件,也可能导致8号外显子内翻译区的启动.新阅读框编码的蛋白仍然保留有重要的功能区,患者可以表现为BMD.结论:dystrophin基因3-7号外显子缺失后下游新翻译区仍有存在启动的可能,患者可以表现为BMD表型.     

非梗阻性无精子症患者睾丸体积、生殖激素水平与睾丸穿刺取精结果的相关性研究

目的:探讨非梗阻性无精子症患者睾丸体积、生殖激素水平与睾丸穿刺取精术(TESA)结果的相关性,以及可用于预测TESA结果的睾丸体积、生殖激素水平的切点值,从而为非梗阻性无精子症患者进一步诊疗提供重要资料.方法:121例研究对象均为非梗阻性无精子症患者(NOA),测定其睾丸体积和生殖激素水平,并根据TESA结果分为无精子组和有精子组.结果:无精子组和有精子组的左侧睾丸体积(ml)、右侧睾丸体积(ml)、泌乳素(PRL,ng/ml)、卵泡刺激素(FSH,mIU/ml)、黄体生成素(LH,mIU/ml)、雌二醇(E2,pmol/L)、血清总睾酮(TT,nmol/L)水平分别为7.07±1.06和11.75±1.38、7.37±1.37和11.70±1.98、12.43±11.69和9.60±4.55、15.77±10.84和8.01±7.43、6.12±2.92和8.11±20.11、119.36±43.52和141.12±48.33、11.43±4.05和12.46 ±4.60.无精子组血清FSH和PRL水平平均值高于有精子组,并且有显著的统计学差异.虽然无精子组的睾丸体积平均数小于有精子组,但两组之间没有统计学差异.对于年龄、血清E2和Tr水平,两组之间也没有统计学差异.利用ROC曲线优选的睾丸体积切点值为9ml,此点其敏感性为93.8％/89.6％(左/右),特异性为100％/94.3％(左/右),睾丸体积ROC曲线的AUC为0.984/0.961(左/右),表明其诊断准确性较高;优选的血清FSH水平切点值为8.18 mIU/ml,此点其敏感性为71.2％,特异性为75.0％,FSH水平ROC曲线的AUC为0.743,表明其诊断准确性中等.结论:睾丸体积和FSH水平对于预测NOA患者TESA结果具有重要意义,并且睾丸体积诊断准确性明显优于FSH.     

Tssk1和Tssk2的克隆、表达及其在成熟精子中的分布与亚细胞定位

睾丸特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Testis-SpecificSerine/Threonine Kinases,TSSKs)可能在精子发生和(或)精子功能调节中起着重要作用,该文研究克隆并表达了小鼠Tssk1和Tssk2基因,纯化得到了Tssk1和Tssk2蛋白激酶,经Western blotting分析,Tssk1和Tssk2皆存在于小鼠和人的成熟精子中。免疫组化的结果显示,Tssk1分布于小鼠的头部(顶体)及整个尾部,Tssk2主要分布在小鼠精子头部顶体后的区域;获能前后的小鼠精子其Tssk1及Tssk2分布模式未发生改变,小鼠Tssk2在诱发顶体反应前后精子中的分布模式也无变化。然而,原来存在于顶体的Tssk1在诱发顶体反应后由于顶体的丢失而未能检出其信号,但尾部的信号不受影响。在人精子中,Tssk1分布区域为颈部及尾部,Tssk2则分布于赤道板的位置。研究结果提示,Tssk1和Tssk2可能对精子功能具有重要调节作用。     

酿酒酵母组蛋白H3 K4L和K36L突变对细胞生长和GAL1、SSA3、PHO5表达的影响

组蛋白甲基化和乙酰化修饰对基因表达和细胞生长至关重要,为揭示组蛋白H3第4、36位赖氨酸(K)修饰对酵母生长和诱导基因表达的重要性及两位点功能差异,文章构建了两位点单独或共同突变为亮氨酸(L)的组蛋白突变株S4、S36和D436,对其在正常、半乳糖为单一碳源、高温、高盐等条件下的生长及GAL1、SSA3和PHO5表达进行比较。结果显示:D436对高温最敏感,各突变株对咖啡因显著敏感;3个突变株在高温、高盐、6-AU、咖啡因存在时的生长及GAL1、SSA3和PHO5的激活均明显慢于野生型;S4在高温、高盐条件下生长及GAL1激活慢于S36。H3-K4和H3-K36的翻译后修饰对细胞生长和适应不利环境非常重要,在对高温等逆境快速适应上,K4比K36更重要,组蛋白突变株的表型缺陷是因该条件下细胞生存所必需的诱导基因表达延迟所致,同一位点突变对不同基因表达有不同影响。3个突变株的缺陷表型严格上应是相应位点突变导致组蛋白修饰模式改变所造成的综合影响。     

2-甲氧基雌二醇对乳腺癌MCF-7细胞HIF-1α、CXCR4、VEGF表达的影响

目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2ME2)对乳腺癌MCF-7细胞生长及缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor1 α,HIF-1α)、趋化因子受体-4(CXC chemokine receptor-4,CXCR4)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法:采用MTT法检测不同浓度2ME2对MCF-7细胞的增殖抑制作用;Hoechest 33258染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR、Western blot分别检测不同浓度2ME2对乳腺癌MCF-7细胞中HIF-1α、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白表达水平的影响.结果:2ME2可较强的抑制MCF-7细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性;经2ME2作用48h后MCF-7细胞表现出典型的凋亡形态特征;不同浓度2ME2作用于MCF-7细胞48小时后,随着药物浓度的增加细胞中HIF-1α、CXCR4、VEGF在mRNA及蛋白表达水平逐渐降低,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:2ME2可通过降低HIF-1α、CXCR4、VEGFmRNA及蛋白表达,抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及肿瘤血管生成和侵袭转移相关因子的表达.     

灵芝多糖对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型PI-3K p85和GLUT4蛋白表达的影响

目的 研究灵芝多糖对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型PI-3K p85和GLUT4蛋白表达的影响,探讨灵芝多糖改善胰岛素抵抗的分子机制.方法 3T3-L1前脂肪细胞经1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,以葡萄糖氧化酶法测定培养液中残余的葡萄糖含量.比较二甲双胍组,检测培养液中葡萄糖含量及PI-3K p85和GLUT4蛋白表达变化.结果 地塞米松联合胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,细胞对葡萄糖的摄取量减少.灵芝多糖可改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗.胰岛素抵抗细胞的PI-3K p85和GLUT4蛋白表达明显减少;应用灵芝多糖后,相关蛋白表达增加.结论 灵芝多糖通过提高PI-3K p85和GLUT4蛋白的表达,参与胰岛素抵抗状态下3T3-L1细胞的葡萄糖代谢.     

特发性矮小症患儿治疗前后血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D、皮质醇水平变化及其与体格发育和骨龄的相关性分析

摘要 目的：探究特发性矮小症（ISS）患儿治疗前后血清胰岛素样生长因子1（IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）、25羟维生素D[25（OH）D]、皮质醇水平变化及其与体格发育和骨龄的相关性。方法：选取安徽省儿童医院于2017年7月～2021年3月收治的88例ISS患儿作为研究组。另选取同期体检健康儿童88例作为对照组。比较两组血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D及皮质醇水平。比较ISS患儿治疗前后血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D及皮质醇水平,体格指标以及骨龄指标。通过Pearson相关性分析ISS患儿血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D及皮质醇水平与体格指标、骨龄指标的相关性。结果：研究组患儿血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D水平均低于对照组,而皮质醇水平高于对照组（均P＜0.05）。ISS患儿治疗后血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D水平均高于治疗前,而皮质醇水平低于治疗前（均P＜0.05）。ISS患儿治疗后身高、体重、骨龄年龄差（BAD）、骨龄指数（BAI）以及体质指数（BMI）均高于治疗前（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析发现：ISS患儿血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D水平与身高、体重、BAD、BAI以及BMI均呈正相关;皮质醇与身高、体重、BAD、BAI以及BMI均呈负相关（均P＜0.05）。结论：ISS患儿血清IGF-1、IGFBP-3、25（OH）D水平异常降低,皮质醇水平升高,且上述四项指标均和身高、体重、BAD以及BAI有关。     

血清NRG-1、NRG-4与多囊卵巢综合征患者慢性低度炎症状态、胰岛素抵抗的相关性分析及对妊娠结局的影响

目的：分析血清神经调节蛋白-1(NRG-1)、神经调节蛋白-4(NRG-4)与多囊卵巢综合征（PCOS）患者慢性低度炎症状态、胰岛素抵抗的相关性,并探讨对妊娠结局的影响。方法：选取2018年1月～2021年10月在中国康复研究中心北京博爱医院收治的PCOS患者161例（PCOS组）,另以年龄为对照选取同期来院体检的健康女性100例（对照组）。检测受试者血清NRG-1、NRG-4、白细胞计数（WBC）、C反应蛋白（CRP）水平及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,分析NRG-1、NRG-4与WBC、CRP及HOMA-IR的相关性。追踪PCOS患者的妊娠结局,分为妊娠结局不良组与妊娠结局良好组。采用单因素和多因素Logistic回归分析妊娠结局不良的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析NRG-1、NRG-4、CRP及HOMA-IR对妊娠结局不良的预测价值。结果：与对照组比较,PCOS组的NRG-1、NRG-4、CRP、WBC及HOMA-IR水平升高（P<0.05）;Pearson相关性分析显示,NRG-1、NRG-4与CRP、WBC及HOMA-IR均呈正相关（P<0.0...     

组蛋白不同乙酰化位点突变对酵母细胞生长和Ssa3、Gal1基因表达的影响

组蛋白乙酰化对基因表达和细胞生长非常重要.为揭示组蛋白H3K14和H4K8的乙酰化修饰对不同条件下细胞生长和Ssa3、Gal1基因表达的重要性及二者功能差异.构建了H3K14、H4K8分别突变为精氨酸的单突变株S14、S8及二者同时突变的双突变株D814,并对其在正常、高温、咖啡因存在等条件下生长及Ssa3、Gal1表达进行比较.结果表明,所有突变株对咖啡因敏感性增加;D814对温度敏感,且在供试条件下其生长及Ssa3和Gal1激活均明显慢于野生型和单突变株;除半乳糖和葡萄糖为单一碳源,30℃时两单突变株差别不大外,其它条件下S8生长及Ssa3和Gal1激活均慢于S14.表明H3K14、H4K8乙酰化对细胞生长和适应不利环境非常重要,而且在对不利条件的快速适应方面,H4K8的乙酰化修饰可能更为重要.组蛋白突变株的表型缺陷是因该条件下细胞生存所必需的基因激活延迟所致.     

氯吡格雷对大鼠肝药物酶CYP3A4和CYP1A2表达的影响

目的：氯吡格雷主要由CYP3A4催化使其激活,CYPlA2也参与氯吡格雷活化。关于氯吡格雷对肝微粒体酶的影响国内外文献报道不多,因此本实验通过检测肝细胞色素氧化酶CYP3A4和CYPlA2的表达,探讨氯吡格雷对大鼠肝药物酶的影响。方法：生理盐水为对照组,氯吡格雷设高、中、低三个剂量组（27,13．5,6．75mg／kg／d）,雄性健康大鼠连续灌胃给药7天,脱臼处死,取肝组织,通过westernblot法检测大鼠肝脏CYP3A4和CYPlA2蛋白表达情况。结果：1）、氯吡格雷抑制大鼠CYP3A4蛋白表达,氯吡格雷高中低剂量组分别比生理盐水组大鼠CYP3A4蛋白表达量降低（P〈0．05）;氯吡格雷低中高剂量组间进行比较,大鼠CYP3A4蛋白表达量呈梯度减少（P〈0．05）;2）、氯吡格雷抑制大鼠CYPlA2蛋白表达,氯吡格雷高中低剂量组分别比生理盐水组大鼠CYPlA2蛋白表达量降低（P〈0．05）,氯吡格雷低中高剂量组间进行比较,大鼠CYPlA2蛋白表达量呈梯度减少（P〈0．05）。结论：氯吡格雷使肝细胞色素氧化酶CYP3A4和CYPlA2的表达量减少,因此氯吡格雷高、中、低3个剂量组均不同程度的抑制大鼠肝脏CYP3A4和CYPlA2的表达,提示当氯吡格雷与某些主要经CYP3A4和CYPlA2代谢的药物合用时,发生代谢性相关作用的可能性大。     

过表达Msx1、Pax9和Bmp4对牙髓干细胞牙向分化的影响

在组织工程研究领域中,利用干细胞进行牙齿再生是一种途径。目前,研究认为牙齿的发育过程是上皮与间充质相互诱导的结果,利用干细胞进行再生牙齿时也需要有上皮源性和间充质源性干细胞的参与。牙髓干细胞是牙齿自体的干细胞,具有多向分化潜能,在牙齿再生中是一种理想的间充质源性干细胞。该研究通过慢病毒介导在牙髓干细胞中分别过表达人Msx1、Pax9和Bmp4基因,研究其对牙向分化的诱导潜能。过表达这三个基因均能显著提高牙髓干细胞碱性磷酸酶的水平,并且促使牙髓干细胞表达成牙本质细胞标志蛋白——牙本质涎磷蛋白、骨钙素、骨桥素和形成钙化组织。但在诱导牙向分化的能力上,三个基因有一定的区别。过表达Msx1基因对牙髓干细胞体外诱导牙向分化能力最为明显,其次是Bmp4基因,过表达Pax9在促进牙髓干细胞表达骨桥素和钙质形成上不是很显著。     

氯吡格雷对大鼠肝药物酶CYP3A4 和CYP1A2 表达的影响

目的：氯吡格雷主要由CYP3A4 催化使其激活,CYP1A2 也参与氯吡格雷活化。关于氯吡格雷对肝微粒体酶的影响国内外 文献报道不多,因此本实验通过检测肝细胞色素氧化酶CYP3A4 和CYP1A2 的表达,探讨氯吡格雷对大鼠肝药物酶的影 响。方法：生理盐水为对照组,氯吡格雷设高、中、低三个剂量组（27,13.5,6.75mg/kg/d）,雄性健康大鼠连续灌胃给药7天,脱臼处 死,取肝组织,通过western blot法检测大鼠肝脏CYP3A4 和CYP1A2 蛋白表达情况。结果：1）、氯吡格雷抑制大鼠CYP3A4 蛋白 表达,氯吡格雷高中低剂量组分别比生理盐水组大鼠CYP3A4 蛋白表达量降低（P<0.05）;氯吡格雷低中高剂量组间进行比较,大 鼠CYP3A4 蛋白表达量呈梯度减少（P<0.05）;2）、氯吡格雷抑制大鼠CYP1A2 蛋白表达,氯吡格雷高中低剂量组分别比生理盐水 组大鼠CYP1A2 蛋白表达量降低（P<0.05）,氯吡格雷低中高剂量组间进行比较,大鼠CYP1A2 蛋白表达量呈梯度减少（P<0.05）。 结论：氯吡格雷使肝细胞色素氧化酶CYP3A4 和CYP1A2 的表达量减少,因此氯吡格雷高、中、低3 个剂量组均不同程度的抑制 大鼠肝脏CYP3A4 和CYP1A2 的表达,提示当氯吡格雷与某些主要经CYP3A4 和CYP1A2 代谢的药物合用时,发生代谢性相关 作用的可能性大。