小鼠肝脏金属硫蛋白Metallothioneins的分离纯化与鉴定

由健康小鼠通过皮下注射一定量的氯化镉,取肝脏匀浆,离心,经SephadexG-50和DEAE-Sephadex A-50柱层析分离,即可获得MT-Ⅰ和MT-Ⅱ两种金属硫蛋白。经鉴定:两个分子各含18个巯基,结合4个Cd原子和3个Zn原子,无金属蛋白质Thionein的分子量约为6kD,半胱氨酸含量约占氨基酸总量的28％,所提取到的MT-Ⅰ和MT-Ⅱ经氨基酸组成,HPLC和PAGE分析皆证明为高度均一的,且与有关文献报道基本相符。其中MT-Ⅱ已获得晶体。     

锌7—金属硫蛋白与镉7—金属硫蛋白抗羟自由基保护线粒 …

制备了Ｚｎ７－与Ｃｄ７－金属硫蛋白。分离出大鼠心肌线粒体。用电子自旋共振自旋标记方法测定线粒体膜脂流动性及膜蛋白构象,运动性,分析了线粒体Ｃａ＾２＋－Ｍｇ６２＋－ＭＡＴＰ酶活性及＾４５Ｃａ摄入。羟自由基损伤使线粒体膜脂流动性下降,膜蛋白构象改变及运动性降低,线粒体Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋ＡＴＰ酶活性降低及＾４５Ｃａ的摄入活性下降。     

镉诱导金属硫蛋白在华溪蟹组织中的表达

采用体外暴露染毒法,研究了不同浓度与时间条件下,镉诱导河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)金属硫蛋白(metallothionein,MT)在肝胰腺、肌肉、鳃和卵巢中的表达差异。镉浓度分别为0、14·5mg/L、29mg/L和58mg/L;处理时间依次为1d、3d和5d。利用镉血红蛋白饱和法和火焰原子吸收分光光度法(AAS)测定MT的蛋白含量。结果显示,用不同的染毒浓度和处理时间,镉在组织中诱导产生MT的含量有较大差异,其中肝胰腺MT的诱导量最大,变化规律也最明显;肌肉中也有较大量MT的表达;而鳃和卵巢MT的诱导量均较低。此外,本文分析了镉的浓度与时间梯度对诱导MT表达的影响与毒性效应机制。结论:组织不同,染毒浓度及时间不同,镉诱导MT的表达也不同,具有一定的组织差异性和规律性。     

镉诱导黄瓜金属硫蛋白抗体的制备及纯化

用镉诱导黄瓜叶片组织产生金属硫蛋白（MT）,经分离纯化,血清白蛋白偶联后作为抗原。采用背部皮内、皮下和耳缘静脉注射免疫家兔,制备出效价为1：16的免疫血清。用饱和硫酸铵盐析法和Sephadex G-200柱层析分离纯化IgG。经测定纯化后的IgG蛋白含量为0．9364mg·ml^-1。用纯化的IgG建立黄瓜Cd-MT的斑点免疫试验检测方法可检测黄瓜Cd-MT的最低含量为200Pg·ml^-1。     

镉中毒大鼠睾丸与肝脏金属硫蛋白表达的时相研究

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感.为阐明睾丸的镉毒性分子机制,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白（MT）表达的时相变化.mRNA采用RT-PCR技术分析并用光密度扫描定量;蛋白质定量用ELISA方法.结果显示,睾丸中存在MT,镉中毒后MT1与MT2 mRNA明显升高,但MT没有相应增加;肝脏镉中毒后MTmRNA与MT均明显升高.结果提示：镉虽然能诱导睾丸MTmRNA的转录,但没有促进其MT的合成,这可能是睾丸对镉毒性与致癌作用较肝脏更敏感的重要原因.     

脱金属硫蛋白与镉离子的络合作用及构象研究

用圆二色（ＣＤ）谱地研究兔肝脱金属硫属蛋白的两个亚型与Ｃｄ＾２＋的络合作用及对重组ＭＴ构象的影响。观测了ａｐｏ－ＭＴ垢巯基在空气和室温下的稳定性。在ＰＨ４．７１,镉重组ＭＴ１的ＣＤ谱特征峰在２５７ｎｍ（＋）,２３８ｎｍ（－）,２２６ｎｍ（＋）与镉诱导的天然ＭＴ１相同。在空气存在和ＰＨ７．９０的ＣＤ谱只有２４３ｎｍ（＋）一个峰。向两亚型分别加入７ｅｑＣｄ＾２＋测定ＣＤ谱随ＰＨ值的变化,发现在ＰＨ２．     

镉诱导威廉环毛蚓（Pheretima guillelmi）金属硫蛋白的分离纯化…

蚯蚓威廉环毛（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａ ｇｕｉｌｌｅｌｍｉ）经皮下注射ＣｄＣｌ２溶液诱导后,整体匀浆,再经热沉淀、乙醇沉淀后,经凝胶过滤ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析,得两个镉结合蛋白峰,分子量依次为４３ｋＤ及１９ｋＤ。这两个组份再分别经ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ柱层析,各得三个镉结合蛋白峰。根据光谱学特征、疏基含量及氨基酸组成等分析,表明凝胶过滤第二峰为金属硫蛋白（ＭＴ）,其经ＤＥ     

酿酒酵母BD101诱导产生的金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

从酵母菌中分离出拮抗重金属、经铜诱导产生金属硫蛋白的酿酒酵母（Saccharo－mycescerevisiae）BD101。无细胞抽提液经SephadexG－50、DEAESepharoseCL－4B、SephadexG-25三次凝胶及阴离子交换柱层析分离纯化得到两个金属硫蛋白亚型。Mr约为7kD,由60个氨基酸组成,其中半胱氨酸含量占10％,每分子金属硫蛋白（Cu-MT）含6个分子Cys,可结合4个铜原子。     

泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)血淋巴液凝集素的分离纯化及其性质研究

泥蚶是一种重要的海产经济贝类,其血淋巴液经硫酸铵二步分级沉淀后,再经Sephadex G- 100凝胶过滤和Sepharose 4B亲和层析纯化制得泥蚶血淋巴液凝集素。经测定,该凝集素分子量约为123Kda,为两个亚基的蛋白质,其相对分子量分别为15 KDa和16 KDa,分子中含5．02％的糖。在氨基酸组成中,天门冬氨酸(Asp)含量最高,其次是谷氨酸(Glu)和组氨酸(His),不含蛋氨酸(Met)。泥蚶血淋巴液凝集素对多种天然或经酶修饰的人或动物红细胞具有不同的凝集作用,其中对兔红细胞的凝集活性最大。半乳糖和乳糖对其凝集活性具有抑制作用。凝集活性依赖于Ca2 ,在pH7．0较稳定,热稳定性不高,在30℃-70℃时凝集效价由原来的25下降为21,当温度超过80℃以后,凝血活性完全丧失。     

家兔急性出血性传染病的病毒分离、纯化和鉴定(简报)

自从去年以来,在我国一些地区的家兔饲养群中发生了一种急性传染性疾病,病程短,死亡率高,濒死前体温升高1—2℃,稽留8—24小时。病死兔经解剖检查,主要病变是多种器官和组织出现(氵弥)散性或灶状出血。我们对病变器官如肝、肺、肾等的超薄切片曾作电子显微镜观察,发现在病变细胞的胞质中存在很多病毒样颗粒(图1)。张哲夫等也有相同的报道。为了弄清这种颗粒的性质,及其与家兔的这种传染性疾病确切的病因关系,本文报道我们在病毒的分离、纯化、鉴定和家兔感染的一些实     

海洋细菌Bacillus sp.2—羧基还原酶的纯化和性质

从一株海洋细菌Bacillus sp,中通过硫酸铵分级盐析,Q Sepharose FF阴离子交换层析,Hydroxyapatite柱层析和Sephadex G-100凝胶过滤,分离纯化出一种3－脱氧]葡糖醛酮代谢酶,定性为2－羧基醛还原酶,以粗酶液作起始,所获样品纯度提高141．4倍,活力回收率11．4％,2－羧基醛化合物对酶是特异性很好的底物,该酶对3－脱氧葡糖醛酮的Km和2.5mmol/L,分子量约为33kD,反应最适pH为6．2,在pH5．0－8．0,温度30℃以下酶活保持稳定,适量的ED－TA,巯基乙醇或二硫苏糖醇能提高酶的活性,碘乙酸,N-乙基顺丁烯二酰亚胺均造成酶部分失活。     

黑曲霉纤维素酶系中β-葡聚糖纤维二糖水解酶的提纯和性质

通过硫酸铵分段,Sephadex G-100凝胶过滤及DEAE-SephadexA-25(A-50)离子交换柱层析等提纯步骤,从黑曲霉(Aspergillus niger)培养液中分离到β-葡聚糖纤维二糖水解酶的两个组分(Ⅰ-3a,Ⅰ-3b),经凝胶电泳鉴定均为单一带,Ⅰ-3a和Ⅰ-3b的最适pH分别为4.0及4.5,最适温度50℃及45℃,在pH2.0—8.0之间稳定,保温1h时的半失活温度t 1/2分别为52℃及48℃。SDS-凝胶电泳法测得Ⅰ-3a和Ⅰ-3b的分子量分别为57000及55000;聚丙稀酰胺凝胶等电聚焦法测得二者的等电点分别为3.2和3.0。在所测定的化学试剂中,Ag~+、Hg~(2+)和Cu~(2+)对该酶均有较强的抑制作用。     

夏威环毛蚓纤溶酶的分离纯化及部分性质研究

以夏威环毛蚓（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａ ｈａｗａｙａｎａ）为材料,采用磷酸盐缓冲液抽提、（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐析,离子交换树脂 Ｄ２９０、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和 ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０三种连续柱层析方法得到一种在 ＰＡＧＥ上显示单一区带的纤溶酶组份。采用凝胶柱层析和 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测其分子量为 １２ ０００和 １２３００,由一条肽链组成。该酶具有强烈的纤溶活力和水解ＢＡＥＥ的活力,能直接作用纤维蛋白和间接激活纤溶酶原。其最适反应温度为４５℃,最适反应ｐＨ为８．０。该酶水解ＢＡＥＥ的活力可被Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｈｇ２＋、金属离子和ＥＤＴＡ、巯基乙醇抑制,Ｃａ＋则有激活作用。该酶中性糖含量为５％,氨基酸组成中Ａｒｇ、Ｌｅｎ含量较多．     

厚果鸡血藤凝集素的纯化及性质

从厚果鸡血藤（ＭｉｌｅｔｉａｐａｃｈｙｃａｒｐａＢｅｎｔｈ．）的种子中分离纯化出一种具强凝集活性和强促有丝分裂原的凝集素。种子经磨粉、浸取、硫酸铵分级、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳＰＡＧＥ上均呈现单一蛋白染色带的凝集素纯品,分子筛层析测得分子量为４０７００,ＳＤＳＰＡＧＥ测得亚基分子量为１９８００;含有１７８％的中性糖。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ和Ｌｅｕ,同时含有４个Ｔｒｐ,当凝集素浓度为０．４８μｇ／ｍＬ时,即可凝集兔红细胞;对人Ａ、Ｂ和Ｏ型血细胞都能发生凝集,故无血型专一性;其凝集兔红细胞的凝集活性,不能被常见糖类抑制,但可被甲状腺球蛋白、胃粘蛋白和卵粘蛋白所抑制;其凝集活性强烈地依赖于Ｃａ２＋的存在,但Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋对其凝集活性全无促进作用;该凝集素是一种强促有丝分裂原,对人外围血中淋巴细胞的转化率高达８４３％,细胞分裂比率可达７８％。     

体外冲击波碎石术对兔肝酶活性的影响

采用超微组织化学方法,观察了体外冲击波碎石术(ESWL)对家免肝脏酶活性的影响。实施 ESWL 后,肝细胞的琥珀酸脱氢酶(SDH)和毛细胆管壁上的碱性磷酸酶(ALP)、焦磷酸硫胺素酶(TPPase)反应活性减弱或消失。TPPase 从损伤的肝细胞高尔基体分泌面扁囊、溶酶体样小泡和毛细胆管内溢出,并伴有肝细胞面的质膜上出现了 TPPase 反应产物和形成膜包内凹小泡。结果提示 ESWL 可对肝细胞及毛细胆管的功能和结构有损伤作用。     

叶绿体小分子RNA的分离纯化和鉴定

本文采用低速匀浆、过筛的方法从植物叶中分离得到了完整、纯净的叶绿体。将叶绿体与提取缓冲液、苯酚混合匀浆抽提叶绿体 RNA。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳与文献已发表的已知酵母5S RNA、菠菜叶绿体4.5S RNA 及小麦5S RNA、4.5S RNA 的电泳迁移距离进行比较,发现芹菜叶绿体中小分子 RNA(沉降系数为5S 左右的 RNA)中除含有5S RNA 和4S RNA 外,还含有两种4.5S RNA。而水杉和银杏叶绿体小分子 RNA 中只含有5S RNA 和4S RNA。     

克鲁维酵母Y-85菊粉酶的纯化和性质

克鲁维酵母(Kluyveromyces sp.)Y-85产生的胞内菊粉酶(endocellular inulinase)和胞外菊粉酶(exocellular inulinase)粗酶液分别经PEG6000-磷酸盐缓冲液双水相抽提得部分纯化酶液。前者进一步用硫酸铵分级沉淀、Protein-PAK DEAE离子交换、Protein-PAK200SW凝胶过滤后得到两个菊粉酶组分EⅠ和EⅡ;后者采用DEAE-Sephacel离子交换、Sephadex G150凝胶过滤后得到菊粉酶Eexo。经Waters 650E蛋白纯化系统鉴定,三者均呈单一的对称峰;EⅠ和EⅡ达聚丙烯酰胺盘状凝胶电泳纯。EⅠ、EⅡ和Eexo的分子量分别为42kD、65kD和57kD;三者均为糖蛋白,多糖含量分别为30％、35％和25％;I/S(Inulinaseactivity/Sucrase activity)比值分别为0.086、0.078和0.072;三者均属外切菊粉酶。EⅠ、EⅡ和Eexo酶反应最适pH分别为4.6、4.5和4.6,最适温度分别为52℃、52℃和55℃;Ag^+、Hg^(2+)和PCMB对酶活性有强烈的抑制作用;三者水解菊芋粉糖液的产物均为果糖(86.5％)和葡萄糖(13.5％)。     

苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。