金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1,-3)mRNA在小鼠胎盘中的表达

本实验利用原位杂交对小鼠妊娠不同时期胎盘中MMP－2,TIMP－2,－3mRNA的表达进行了研究。结果表明;MMP－2主要在具有很强的侵润能力的海绵滋养层细胞中表达,到妊娠13．5天时,MMP－2的表达明显降低,说明此时的滋养层细胞基本上失去侵润能力。TMIP－1和TMIP－3在滋养层细胞和蜕膜细胞中都有表达,这两种抑制因子的协同表达,一方面能够调控滋养层细胞侵入子宫内膜的深度,另一方面,滋养层细胞自身既表达MMP－2又表达TIMPs,可能对其自身有保护作用,使得MMP的水解功能局限于子宫蜕膜的特定区域。在妊娠10．5天,滋养层巨细胞同时表达TIMP－1,－3mRNA,这可能与其功能的转换是一致的;因为此时小鼠滋养层巨细胞体积最大,且不再增殖,同时其功能屯从侵入型向内分泌型转换。所以,MMPs和TIMPs在小鼠滋养层细胞和子宫蜕膜中的协同表达表明其在着床过程中可能发挥重要作用。     

人绒毛膜促性腺激素对绒癌细胞系TIMP表达的影响

目的：研究人绒毛膜促性腺激素(hCG)对滋养层细胞或绒癌细胞侵袭性的影响。方法：采用RT—PCR方法,观察不同浓度hCG对JEG—3绒癌细胞系表达金属蛋白酶组织抑制因子TIMP—1和TIMP—2的影响。结果：用不同浓度hCG处理48h后,JEG—3细胞中TIMP—1 mRNA的表达略降低,而TIMP—2 mRNA的表达则被诱导增加。结论：人绒毛膜促性腺激素(hCG)可能通过改变绒癌细胞中TIMP的表达,影响绒癌细胞的侵袭性。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂mRNA在正常及异位子宫内膜中的表达

目的：观察正常及异位子宫内膜中基质金属蛋白酶－1,－2（MMP－1,－2）和基质金属蛋白酶组织抑制剂－1（TIMP－1）基因表达的变化,以探讨其与子宫内膜异位症的关系。方法：应用原位技术,采用地高辛生物素标记的cDNA探针（MMP－1,MMP－2,TIMP－1）对子宫内膜异位症患者（EM组）的子宫内膜（14例）、异位病灶组织（20例）及非子宫内膜异位症患者（对照组）的子宫内膜（12例）,分3批进行分子杂交检测,结果：3批结果相似。MMP－1,－2,TIMP－1mRNA在腺上皮细胞和间质细胞均有表达,EM组的子宫内膜MMP－1,－2及TIMP－1mRNA表达量与对照组无显著性差异（P＞0．05）,异位病灶组织的MMP－1,－2mRNA表达量明显高于对照组（P＜0．05）,而TIMP－1mRNA表达量则低于对照组（P＜0．05）。结论：子宫内膜异位症患者的异位病灶中,存在MMP－1,－2和TIMP－1明显的平衡失调,这可能与子宫内膜异位症的发生、发展和不孕有关。     

乙型肝炎病毒对HepG2细胞侵袭的影响

目的研究HBV全长对HepG2细胞侵袭相关基因表达及活性的影响,探讨HBV在整体水平对HepG2细胞侵袭的影响。方法采用定量PCR分析HBV对HepG2细胞MMP2、9和TIMP1-4基因转录的影响;通过明胶酶谱及反相明胶酶谱检测MMP2、MMP9及TIMPs的活性;应用体外侵袭小室法检测细胞的侵袭能力。结果HBV的复制可以促进HepG2细胞MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP3基因的转录,抑制TIMP4基因转录,增强HepG2细胞MMP2、MMP9的活性并增强细胞中TIMP1、TIMP3功能,HBV稳定复制的细胞具有更强的体外侵袭能力。结论HBV可影响HepG2细胞MMPs和TIMPs的基因转录、表达及功能,促进HepG2细胞的体外侵袭,这可能与HBV相关的HCC侵袭转移密切相关。     

基质金属蛋白酶MMP-26能有效促进人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3浸润能力

胚胎植入过程中,滋养层细胞浸润与肿瘤的迁移过程非常相似,但显著的区别在于前者是受严格调控的有节制的浸润,基质金属蛋白酶(MMPs)的许多成员在其中起重要的作用.MMP-26是近年来发现的MMPs家族的新成员,它在滋养层细胞中的作用所知甚少.利用国际常用的人滋养层细胞模型——人绒毛膜上皮癌细胞系(JEG-3)作为体外实验模型,探讨MMP-26在人滋养层细胞浸润调节中的作用.将含有MMP-26全长cDNA的pCR3.1质粒转染到JEG-3细胞中,获得过量表达MMP-26基因的稳定细胞系JEG-3/MMP-26;细胞浸润分析表明JEG/MMP-26细胞的浸润能力较母本细胞明显增强;RT-PCR和明胶酶谱分析显示JEG-3/MMP-26细胞中MMP-9的表达和分泌水平提高;双荧光免疫细胞化学进一步显示MMP-26和MMP-9蛋白在细胞中有共定位现象.上述结果表明MMP-26能有效促进人滋养层细胞浸润,其作用可能是通过与其他MMP分子(如MMP-9)的协调来实现的.     

胰腺应激蛋白PSP/reg抑制胰腺星状细胞TIMPs:MMPs及RECK表达

目的 观察胰腺应激蛋白PSP/reg对胰腺星状细胞(PSC)合成和分泌基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)以及RECK表达的影响.方法 分离纯化慢性胰腺炎患者纤维化区的PSC,基因重组胰腺应激蛋白PSP/reg,以终浓度为10和100 ng/mL对PSC进行干预,实时荧光定量PCR检测MMP1/2、TIMP1/2及RECK基因表达,Western blot测定MMP1/2、TIMP1/2及RECK蛋白,细胞免疫荧光观察细胞膜表面RECK分布.结果 PSP/reg对MMP1/2、TIMP1/2及RECK表达无明显影响;PSP/reg轻度抑制PSC培养上清中MMP2水平(P＜0.05),而显著抑制TIMP1/2水平(P ＜0.01);PSC细胞膜表面发现有RECK蛋白,PSP/reg减少PSC的RECK含量(P＜0.01).结论 胰腺应激蛋白PSP/reg能够降低TIMPs:MMPs比率、减少RECK蛋白水平表达,从而解除对MMPs的部分抑制,使MMPs活性相对增高,有利于纤维化的分解消散,促进胰腺损伤后的再生修复.     

金属蛋白酶组织抑制剂在心血管疾病发病中的作用

金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)由4个成员组成:TIMP1、TIMP2、TIMP3和TIMP4,它们是基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的生理性抑制剂.同时它们也具有MMP非依赖的功能.T I ...     

胶原酶—3活性在大鼠动情周期及胚泡着床中的变化

大鼠动情周期以及胚胎着床过程中,子宫内膜会发生结缔组织的降解与重构。胶原酶3（MMP－13）是降解纤维类胶原的主要蛋白水解酶类之一。其活性在这些过程中的变化值得研究。采用液体闪烁计数测定^3H标记胶原的方法,对大鼠动情周期及早期妊娠子宫中胶原酶3（MMP－13）的活性进行了测定。结果表明：在动情周期中,激活型MMP－13在间情期最低,酶原型及激活型的MMP－13在动前期达高峰,动情后期酶原型和激活型MMP也明显高于间情期（P＜0．05）（Fig.1)。妊娠第1、2天酶原型的MMP－13的活性显著高于第3－7天,第3、4天酶原型和激活型MMP－13的活性均低于妊娠第1、2天（P＜0．05）;而第5天酶原型MMP－13的活性却显著高于第4、6两天（P＜0．05）,激活型MMP－13的活性也高于第4天（P＜0．05）（Fig.2）。着床部位酶原型MMP－13的活性明显高于非着床部位（P＜0．05）,而激活型MMP－13的活性则无明显差异（P＞0．05）（Fig.3）。大鼠假孕早期子宫中MMP－13的活性变化与正常早期妊娠相似,但其活性却明显低于正常早期妊娠（Fig.4）。结果提示:粝鼠子宫中MMP－13参与大鼠动情周期及早期妊娠过程,尤其是在胚胎着床过程中可能起着重要作用。     

67ku层黏连蛋白受体促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的 研究分析67ku层黏连蛋白受体（laminin receptor,67LR）与肝癌细胞基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）及其组织抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs）表达的关系,探讨67LR促进肝癌细胞体外侵袭能力的分子机制.方法 以67LR转染HepG2的稳定细胞株及其对照细胞为材料,采用半定量RT-PCR分析目前已知的23种MMPs和4种TIMPs的表达及变化情况,对表达有变化的基因采用荧光定量PCR进行验证,采用明胶酶谱分析MMP活性的变化。结果 半定量RT-PCR和荧光定量PCR发现,67LR高表达的LR4细胞,其MMP2,9的表达比67LR低表达的LR6及对照组pcDNA-1细胞明显升高,明胶酶谱分析也揭示,LR4细胞分泌的MMP-2和MMP-9的活性明显上升。结论 67LR可以促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达和分泌,从而促进肝癌细胞体外侵袭能力。     

原位杂交检测组织金属蛋白酶抑制因子—1 mRNA在IgA肾病肾脏中的表达

为探讨组织蛋白酶抑制因子在IgA肾病肾小球硬化中的作用。本文用原位杂交法研究组织金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）mRNA在3种类型IgA肾病（轻度系膜增生型、中度系膜增生型及局灶型）肾组织中的表达。结果表明：TIMP－1 mRNA原位杂匀的阳性信号主要分布于部分肾小管上皮细胞内。在肾小球系膜细胞也可检测到TIMP－1 mRNA阳性信号,但较肾小管弱,中度系膜增生型的TIMP－1 mRNA阳笥信号明显地较其他两型IgA肾病为强。以上结果表明：由肾小管上皮细胞及系膜细胞合成的TIMP－1通过抑制基质金属酶的活性,可导致细胞外基质（ECM）在肾小管间质及肾小球内过度沉积,从而对肾小球硬化有促进作用。     

细胞外信号调节激酶在乳腺癌组织中的活化

目的：探讨人乳腺癌中细胞外信号调节激酶（Erk2,p42MAP）在蛋白表达水平、mRNA表达水平和激酶活性水平的变化。方法：应用Western-blotting,免疫沉淀、激酶活性测定和RT-PCR方法检测37例人乳腺癌及其周围正常组织的Erk2表达及活性变化。结果：与周围正常组织相比,37例人乳腺癌中Erk2蛋白表达显增加（100％）;其激酶活性亦显增高（75.68％）;在mRNA水平,Erk2的表达亦明显增高;Erk2表达与其活性变化无相关性。结论：人乳腺癌中Erk2蛋白表达、mRNA表达和激酶活性均显高于周围正常组织。提示Erk2参与乳腺癌的信号转导,为乳腺癌的活化信号,可能成为人乳腺癌治疗的新靶点。     

肾小球系膜细胞中硫氧还蛋白1过表达对基质金属蛋白酶9表达的影响

为进一步探讨硫氧还蛋白1（thioredoxin1,Trx1）过表达对高糖环境下肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase9．MMP0）表达的影响．采用RT-PCR和明胶酶谱法检测细胞中MMP-9mRNA和酶活性的变化．用脂质体介导瞬时转染法转染正义Trx1及反义Trx1,观察高糖环境Trx1过表达对MMP9表达的影响．结果表明．HBZY-1高糖组与正常糖组比较,MMP9mRNA在12h,24h,48h时表达增加（P〈0．05）,同时酶活性于12h、24h、48h也明显增高（P〈0．01）．转染正义Trx1组细胞,MMP．9mRNA水平及MMP9酶活性,在高糖组与正常糖组差异无统计学意义（P〉0．05）;但转染反义Trx1组和未转染组细胞的MMP9 mRNA水平及酶活性．高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义（P〈0．01）．提示Trx1过表达可抑制高糖环境诱导的肾小球系膜细胞MMP9高表达．     

酶谱法测定肝星状细胞合成的基质金属蛋白酶活性

目的：建立检测肝星状细胞（HSC）合成的基质金属蛋白酶（MMPs）活性的方法。方法：用含SDS－明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳为基础的酶谱法,检测体外培养的HSC所合成的MMPs活性。结果：酶谱法能灵敏地检测到HSC细胞内和分泌到培养基中的MMP－2和MMP－9,培养基中MMP－2活性高子MMP－9,并观察到药物作用以后酶活性的改变。结论：酶谱法是研究HSC调节肝纤维化过程中细胞外基质（ECM）代谢的有效手段。     

银屑病皮损中IL—10及IL—12 p35、p40 mRNA表达的研究

探讨IL－10和IL－12在银屑病发病机理中的可能作用,为应用基因治疗银悄病提供理论基础。采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测了12例银屑病患者及6例正常皮肤组织中IL－10和IL－12p35、p40mRNA的表达情况。研究结果表明：（1）与正常皮肤组织相比银屑病皮损中IL－10mRNA明显降低（P＜0.01）。（2）IL－12p35 mRNA在银屑病皮损和正常皮肤组织中均呈阳性表达,IL－12p40 mRNA只在银屑病皮损中呈阳性表达,而在正常皮肤中为阴性。推测IL－12在银屑病的发生和发展中可能起重要,而IL-10可能在银屑病消退中起一定作用。     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA表达的研究

目的探讨系统性红斑狼疮（system lupus erythematosus,SLE）患者外周血单个核细胞（peripheral blood monouuclear cells,PBMC）中细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）表达的意义。方法应用半定量RT—PCR方法检测38例SLE患者和21名正常人PBMC中cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA的表达水平,并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分进行相关性分析。结果①SLE患者PBMC中cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA表达水平均明显高于正常对照组（P〈0．01）;SLE患者活动组cFLIP—L mRNA表达水平显著高于非活动组（P〈0．05）,cFLIP—S mRNA表达水平在SLE患者活动组与非活动组之间没有显著性差异（P〉0．05）。②SLE患者cFLIP—L mRNA表达水平与SLEDAI评分呈正相关（r=0．423,P〈0．01）;而eFLIP—S mRNA表达水平与SLEDAI评分无明显相关性（r=0．270,P〉0．05）。结论cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA可能在SLE发病机制中起重要作用。     

胶原酶-3活性在大鼠动情周期及胚泡着床中的变化(英文)

大鼠动情周期以及胚胎着床过程中,子宫内膜会发生结缔组织的降解与重构。胶原酶3（MMP－13）是降解纤维类胶原的主要蛋白水解酶类之一。其活性在这些过程中的变化值得研究。采用液体闪烁计数测定~3H标记胶原的方法,对大鼠动情周期及早期妊娠子宫中胶原酶-3（MMP－13）的活性进行了测定。结果表明：在动情周期中;激活型MMP－13在间情期最低,酶原型及激活型的MMP－13在动前期达高峰,动情后期酶原型和激活型MMP也明显高于间情期（P＜0.05）（Fig．1）。妊娠第1、2天酶原型的MMP-13的活性显著高于第3～7天,第3、4天酶原型和激活型MMP-13的活性均低于妊娠第1、2天（P＜0.05）;而第5天酶原型MMP-13的活性却显著高于第4、6两天（P＜0．05）;激活型MMP－13的活性也高于第4天（P＜0．05）（Fig．2）。着床部位酶原型MMP－13的活性明显高于非着床部位（P＜0．05）,而激活型MMP－13的活性则无明显差异（P＞0．05）（Fig．3）。大鼠假孕早期子宫中MMP－13的活性变化与正常早期妊娠相似,但其活性却明显低于正常早期妊娠（Fig．4）。结果提示：大鼠子宫中MMP-13参与大鼠动情周期及早期妊娠过程,尤其是在胚胎着床过程中可能起着重要作用。     

hCG对绒癌细胞系MMP-2和MMP-8表达的影响

为了探讨人绒毛膜促性腺激素（hCG)对绒并且吕细胞侵袭性相关基因表达的影响作用。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测方法,观察了不同浓度hCG不同处理时间对JEG-3绒癌细胞系表达基质金属蛋白酶（MMP-2和MMP-8）的影响。结果显示,绒癌细胞系JEG-3表达MMP-2和MMP-8;分别用0、50、500、5000、25000IU/LhCG处理48h后,JEG-3细胞中MMP-2mRNA的含量无明显变化。MMP-8mRNA的表达则被诱导,并随hCG作用浓度增高而增强,进一步研究处理时间对MMP表达的影响。结果发现经25000IU/LhCG处理的JEG-3细胞,MMP-8的表达随处理时间的延长逐渐增强,而MMP-2的表达则在第6h被显著诱导后逐渐降低,以上结果提示,hCG可诱导绒癌细胞系JEG-3中MMP-2和MMP-8两种基质金属蛋白酶的表达,并因此可能对绒癌细胞系的侵袭性具有影响作用。然而hCG对这两者表达的影响规律并不完全一致。     

B波段紫外线照射对ＮＨ３Ｔ３细胞bcl—2、n—myc、c—fos三种基因表达的影响

用免疫组织化学SPTM试剂盒标记,用Quantimet520型图像分析仪定量分析B波段紫外线照射对NIH3T3细胞bcl-2,n-myc,c-fos三种基因表达的影响,结果发现Bcl-2(bcl-2表达的蛋白质）定位于细胞质,N-myc,c-Fos(分别为n-myc,c-fos表达的蛋白质）在细胞核中高表达,在细胞质中低表达,三种基因蛋白在对照组（未受紫外线照射的正常NIH3T3细胞中）均有表达,NIH3T3细胞经B波段紫外线照射后,9小时前Bcl-2无显变化。9小时后急剧增高,超过最初值;N-myc于照射后1小时前无显变化。1小时后降低,9小时后显剧增高,并超过最初值;c-Fos于照射后即下降,0.5小时后回升,逐渐达到最初值。     

基质金属蛋白酶与血管壁细胞外基质重建

细胞外基质（ECM）不仅维持血管壁的完整性,而且还为血管细胞传递增殖,迁移,分化和凋亡的调控信号,基质金属蛋白酶（MMP）及其内源性抑制剂（TIMP）通过调节ECM合成与降解之间的动态平衡,使ECM维持正常的结构与功能。在高血压,动脉粥样硬化与血管再狭窄的发生与发展过程中,MMP和TIMP的合成与分泌出现异常,由此所引起的ECM合成与降解失调使ECM迅速发生重建。     

血管紧张素—（1—7）对大鼠血管平滑肌细胞PKC和ERK1／2的抑制作用

采用Western blot,氘－胸腺嘧啶（3H－TdR)和氘－亮氨酸（3H－Leu)掺入等技术和方法,用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)和血管紧张素－（1－7）[Ang-(1-7)]刺激大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs),观察和分析Ang-(1-7)对VSMCs增殖及蛋白激酶C（PKC）和胞外调节蛋白激酶（ERK）表达的影响,Ang-(1-7)能明显抑制基础和AngⅡ刺激下的VSMCs PKC-Ⅱ和ERK1／2蛋白表达（P＜0．01或P＜0．05）,减少3H－TdR和3H－Leu掺入量（P＜0．01或P＜0．05）,结果提示,Ang-(1-7)对VSMCs增殖有抑制作用,这可能与影响PKC－ζ和ERK1／2蛋白表达有关。