细胞色素b5还原酶缺乏症的分子病理机制

细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症的分子病理机制凌光鑫（广东医学院,湛江５２４０２３）关键词细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症,突变酶接触某些药物或化学制品,或是先天性ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）缺乏,均可造成高铁血红蛋白（ＭＨｂ）血症。一组从事ｂ５Ｒ研究的...     

猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析

采用硫酸铵分级分离,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析以及５＇－ＡＭＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶,提纯倍数为７５０－８００。总回收率为４０％左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,Ａ２７３／Ａ４６０比值为５．８．在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为３２ｋｄ。ＮＡＤＨ和２,６－     

NADH-细胞色素 b5 还原酶在甲状腺过氧化氢生物合成中的作用

应用高香草酸荧光分析技术及NADH－高铁氰化钾还原酶法,对正常和Graves病甲状腺过氧化氢（H2O2）和NADH－细胞色素b5还原酶（b5R)进行测定,发现Graves病甲状腺b5R活性和H2O2水平均明显高于正常,而H2O2酶活性在Graves病和正常甲状腺间无显著差异。加b5R抑制剂对氯汞苯甲酸抑制b5R活性,Graves病和正常甲状腺b5R活性降低近85％,同时H2O2降低近50％,蛋白结合碘形成减少近52％。b5R活性和H2O2水平两者呈显著正相关关系。以上结果表明,b5R参与甲状腺内H2O2的生物合成,是甲状腺内产生H2O2的重要酶系。     

NADH-细胞色素b5还原酶在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化

为了探讨 NADH-细胞色素 b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制 ,研究突变型 ( b5R)蛋白结构和功能的关系 ,用基因重组技术将野生型和突变型 ( C2 0 3Y) b5Rc DNA克隆于 p GEX- 2 T载体 ,在大肠杆菌 BL2 1中诱导表达 .Western印迹鉴定所表达的蛋白为GST- b5R融合蛋白 .应用谷胱甘肽 - Sepharose 4B亲和层析 ,还原型谷胱甘肽洗脱得到纯化的GST- b5R和 GST- b5RC2 0 3Y融合蛋白 .比较 GST- b5R和 GST- b5RC2 0 3Y酶活性及稳定性 ,发现野生型和突变型的酶活性基本相同 .但与野生型酶相比 ,突变型酶对热的稳定性较差 ,对胰蛋白酶更加敏感 .结果提示 ,C2 0 3Y突变可引起蛋白质二级结构改变而导致酶的稳定性下降 .     

人红细胞NADH－细胞色素b5还原酶的分离纯化与鉴定

 人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的分离纯化与鉴定黄长晖,朱忠勇,唐玉钗（南京军区福州总院全军医学检验中心实验科,福州３５０００１）ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ,Ｅ．Ｃ．１．６．２．２．）是红细胞内催化高铁血红蛋白还原为血红蛋白的关键酶...     

琥珀酸细胞色素c还原酶系中细胞色素b的多相氧化还原反应

呼吸链中从泛醌到细胞色素c一段一向受到人们的重视。尤其是细胞色素b的动力学行为,虽然文献上报道很多但结果却不一致。早在工929年Keilin就已经观察到细胞色素b的氧化还原速度比细胞色素系统其它组份都慢一些。1952年Chance也观察到这一现象。但他发现在不具氧化磷酸化能力的制剂中细胞色素b的还原速度才比c_1或c慢,而在具有氧化磷酸化能力的制剂中细胞色素b的还原速度并不比c_1慢。于是他认为也许是磷酸化系统受到损害而影响到细胞色素b的还原速度。Chance还发现b的还原在动力学上是快慢两相。后来有一些作者也都报道了b的两相还原现象。     

单基因遗传性高胆固醇血症与非低密度脂蛋白受体致病基因的关系

家族性高胆固醇血症（FH）是一类异质性很强的单基因常染色体遗传性疾病。最近发现,除低密度脂蛋白受体和载脂蛋白B-100以外．前蛋白转化酶一枯草溶菌素9、衔接子蛋白、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5和G8、胆固醇-7-α-羟化酶等多种基因的变异都能导致FH样表型。该文对利用基因剔除和过表达、RNA干扰、反义技术对单基因遗传性高胆固醇血症非低密度脂蛋白受体致病基因的功能和调控机制进行综述,有助于深入认识这些基因．从而为临床家族性高胆固醇血症的诊断和治疗提供新的思路。     

叶绿体中的细胞色素b—559

细胞色素b-559是由叶绿体基因编码α,β亚基为单位构成的一种血红蛋白,是光系统II反应中心的重要组分。以叶绿体为实验材料的研究表明,细胞色素b-559可通过还原变化调节光系统Ⅱ的光抑制敏感性,并对发生在供体侧和受体侧抑制的光系统II反应中心具有保护作用,但对整体植物在生理条件下的作用却未得到证实,这也正是今后需要研究的问题。     

细胞色素b5家族蛋白序列分析

以牛肝微粒体细胞色素b5(CYB5-BOVIN)为切入点,利用生物学信息学方法获得一系列细胞色素b5家族的成员蛋白,同时对蛋白序列进行多重对齐分析及进化分析,借此为细胞色素b5蛋白的分子设计与构建提供指导意义。     

单基因遗传性高胆固醇血症与非低密度脂蛋白受体致病基因的关系档

家族性高胆固醇血症(FH)是一类异质性很强的单基因常染色体遗传性疾病.最近发现,除低密度脂蛋白受体和载脂蛋白B-100以外,前蛋白转化酶-枯草溶菌素9、衔接子蛋白、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5和G8、胆固醇-7-α-羟化酶等多种基因的变异都能导致FH样表型.该文对利用基因剔除和过表达、RNA干扰、反义技术对单基因遗传性高胆固醇血症非低密度脂蛋白受体致病基因的功能和调控机制进行综述,有助于深入认识这些基因,从而为临床家族性高胆固醇血症的诊断和治疗提供新的思路.     

膜上斑点洁显示人红细胞b_5还原酶活性

人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶是使高铁血红蛋白还原的主要酶类,其缺陷将导致遗传性高铁血红蛋白血症．目前,主要通过分光光度法测定ｂ５还原酶活性．我们将ｂ５还原酶抗体点于硝酸纤维膜上,以此捕获并富集红细胞胞浆ｂ５还原酶．有ｂ５还原酶活性的斑点用噻唑蓝染色．此法简单直观,可用于ｂ５还原酶的定性和半定量测定,为遗传性高铁血红蛋白血症的诊断提供了一种新的实验手段．     

高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b5还原酶I的克隆、表达和功能鉴定

【目的】鉴定产油微生物高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b_5还原酶Ⅰ的功能。【方法】将高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b_5还原酶Ⅰ基因与人可溶性细胞色素b_5还原酶基因序列比对,去除该基因N端穿膜区域后,与人可溶性细胞色素b_5基因分别在大肠杆菌中异源表达;通过钴离子亲和层析、离子交换和分子排阻色谱等方法对表达产物进行纯化;以2,6-二氯靛酚钠(DCIP)为底物,测定细胞色素b_5还原酶Ⅰ的体外活性及其对NADH和NADPH的偏好性;在反应体系中存在NADH时,通过全波长扫描方法检测细胞色素b_5还原酶Ⅰ与细胞色素b_5的相互作用。【结果】高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b_5还原酶Ⅰ被成功可溶表达,经纯化后检测到体外活性:使用NADH时酶活为564.57 U,使用NADPH时为51.97 U;在NADH存在时,细胞色素b_5还原酶Ⅰ能够还原细胞色素b_5,其吸收峰从411 nm偏移至422 nm,并在521 nm和554 nm处吸光值增加。【结论】细胞色素b_5还原酶Ⅰ N端穿膜区域的去除增加了其可溶性,并保持了蛋白质活性;高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b_5还原酶Ⅰ基因编码的是一种NADH-细胞色素b_5还原酶,其在体外能与细胞色素b_5相互作用。     

猪肝微粒体NADH－细胞色素b_5还原酶的纯化及特性分析

采用硫酸铵分级分离,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析以及５＇－ＡＭＰ～Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶,提纯倍数为７５０～８００。总回收率为４０％左右。纯化的酶是典型的黄素蛋白吸收光谱,Ａ２７３／Ａ４６０比值为５．８。在ＳＤＳ－聚丙烯酸胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为３２ｋｄ。ＮＡＤＨ和２,６－二氯酚靛酚的Ｋｍ值分别为２４和４５μｍｏｌ／Ｌ,以２,６－二氯酚靛酚为底物时,该还原酶的催化作用可能为乒乓机制。该酶的纯化为分子水平研究其反应机制及制备相应的抗体以建立免疫学检测方法创造了条件。     

真菌一氧化氮还原酶细胞色素P—450nor 2 cDNA序列的测定

真菌一氧化氮还原酶细胞色素Ｐ４５０ｎｏｒ２ｃＤＮＡ序列的测定刘德立（华中师范大学生命科学学院武汉４３００７０）ＨｉｒｏｆｕｍｉＳＨＯＵＮ（筑波大学应用生物化学系日本）在真菌的反硝化作用中,一种细胞色素Ｐ４５０起着一氧化氮还原酶的作用,被称为细胞色...     

不同花色矮牵牛细胞色素b5蛋白的cDNA克隆及序列分析

以云南不同花色矮牵牛的花瓣为材料,提取总RNA,用Oligo(dT)作为引物反转录合成cDNA第一链。以此为模板,用根据国外报道的矮牵牛细胞色素b5蛋白的cDNA序列设计合成的引物进行PCR扩,均扩增到一条约450bp的片段,分别克隆到pGEM-T载体上。对重组克隆进行序列分析,结果表明所克隆到的矮牛细胞色素b5蛋白的cDNA的编码区均含有447个核苷酸,编码149个氨基酸残基,与国外报道的一致;但其核苷酸及氨基酸的序列与国外报道的有所不同,即与国外的相比,紫红色、蓝紫色矮牵牛中的该cDNA的核苷酸有1个不同,而氨基酸完全相同;粉红色、白色矮牵牛中的3个核苷酸不同,并导致了2个氨基酸的不同。暗示该基因对花色的调控可能与其编码cDNA的一级结构有关。     

膜上斑点洁显示人红细胞b5还原酶活性

人红细胞NADH-细胞色素b₅还原酶是使高铁血红蛋白还原的主要酶类, 其缺陷将导致遗传性高铁血红蛋白血症. 目前, 主要通过分光光度法测定b₅还原酶活性. 我们将b₅还原酶抗体点于硝酸纤维膜上, 以此捕获并富集红细胞胞浆b₅还原酶. 有b₅还原酶活性的斑点用噻唑蓝染色. 此法简单直观, 可用于b₅还原酶的定性和半定量测定, 为遗传性高铁血红蛋白血症的诊断提供了一种新的实验手段.     

菠菜和水稻细胞色素b—559的分离纯化及其光谱性质研究

采用一种快速简捷的方法从菠菜（Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ Ｌ．）和水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）中分离纯化了光系统Ⅱ反应中心内的细胞色素ｂ－５５９,并且研究了其低温可见光区荧光光谱、室温紫外区荧光光谱、吸收光谱以及电泳特性。该方法的主要特点：１．以放氧核心复合物为起始材料以避免其他细胞色素的干扰;２．选用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ为层析介质,用等度洗脱除去杂蛋白和叶绿素;３．用同一