Quantitative Bestimmung isometrischer Pflanzen-Viren mit Hilfe des Radialimmundiffusionstestes

Abstract

This study compared the nutritional indices in third instar female nymphs of the tropical grasshopper, Poecilocerus bmtonius, after feeding on Calotropis procera or wheat seedling. Analysis of the main and interactive effects of feeding on C. procera indicates that nymph performance was not affected by the cardenolides present in C. procera. The rate of consumption and assimilation on C. procerawas higher when compared with that of wheat seedlings and weight gain of the nymphs on C. procera was correlated to higher assimilation. The relative consumption rate (RCR) and relative growth rate (RGR) were significantly higher in nymphs fed on C. procera than in those fed on wheat seedlings. Feeding on wheat seedlings significantly reduced the approximate digestibility (AD), efficiency of conversion of ingested food (ECI), and efficiency of conversion of digested food (ECD). Feeding on wheat seedlings resulted in 60% mortality of nymphs before moulting to the fourth instar stage. The nutritional indices were also estimated after feeding on C. procera only by fourth instar nymphs.     

Die Bestimmung des Solaningehaltes von Pflanzen mit Hilfe vonCladosporium fulvum

Ohne Zusammenfassung     

Eine Methode zum Nachweis von hydrolytischen Enzymen mit sukzedaner zytophotometrischer Bestimmung von DNS,Histon und Gesamtprotein

Zusammenfassung Bei der zytophotometrischen Bestimmung von Kernproteinen an gemischten Zellpopulationen wie Lymphknoten, Knochenmark oder Milz ist die Zuordnung der jeweils zu untersuchenden Einzelzelle zu einer bestimmten Zellrasse oft schwierig. Durch diesen Unsicherheitsfaktor kann die Aussagekraft derartiger Messungen stark eingeschränkt werden. Um diese Fehlermöglichkeit zu vermindern, wird ein Verfahren beschrieben, welches durch Anwendung zytochemischer Enzymnachweismethoden eine zuverlässige Klassifizierung der zu messenden Einzelzelle vor der anschließend vorzunehmenden eigentlichen quantitativen Analyse derselben Zelle erlaubt, ohne die Meßergebnisse zu beeinträchtigen.

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A method for the demonstration of hydrolytic enzymes with sequential cytophotometric measurement of DNA, nuclear histone and total protein

Summary In cytophotometric analyses of nuclear proteins of mixed cell populations such as lymph nodes, bone marrow or spleen it is frequently difficult to place a single cell to be explored into a precise category of cell types. This factor of uncertainty concerning the classification of cells may substantially reduce the value of those measurements. In order to eliminate or diminish such sources of error a method is described which by means of cytochemical enzyme tracing allows for a reliable classification of single cells to be examined prior to the real quantitative analysis of the same cell without impairment of the results of the measurements.

     

Bestimmung von Folgebruten aus Legemustern

Summary With the assumption of a genetic basis of the determination of dates of laying in birds a method is described to obtain the percentage of repeat layings from the seasonal distribution of clutches.     

Bestimmung von Citrinin in Getreide

A simultaneous reversed-phase HPLC determination of citrinin and ochratoxin A in cereals is proposed. Both mycotoxins are eluted on a RP-amid C16 column using a gradient eluent acidified with phosphoric acid. The limits of detection, for a signal-to-background ratio of 3, are 1 μg/kg for citrinin and 0,4 μg/kg for ochratoxin A.

Presented at the 25^th Mykotoxin Workshop in Giessen, Germany, May 19–21, 2003     

Quantitative DNS-Bestimmungen von Ameisenhirnzellen

Zusammenfassung Gehirnzellen von Myrmica laevinodis-Arbeiterinnen wurden Feulgengefärbt und dabei 1–6 oder 15 Std im Schiffschen Reagens behalten. Die Farbintensität wurde mikrospektrophotometrisch bestimmt. Die Tiere des einen Nestes zeigten ein Extinktionsmaximum nach 1 Std Aufenthalt im Schiffschen Reagens, die eines anderen Nestes nach 5 Std. Die Färbedauer ist also ein weiterer Faktor, der bei quantitativen DNS-Bestimmungen zu berücksichtigen ist.

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Quantitative determination of DNA in feulgen stained brain cells of antsI. The effect of the staining duration on the extinction

Summary Brains of adult Myrmica laevinodis (Hymenoptera, Formicidae) workers were Feulgen stained. They were kept in Schiff's reagens for 1 to 6 hours. In specimens from one nest the colour maximum was reached after 1 hour, in others from a different nest after 5 hours. The colour intensity measured by microspectrophotometry depended on the time the brains stayed in Schiff's reagens. This result means that the time of staying in Schiffs reagens is another factor influencing the amount of measurable DNA.

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Die Untersuchung wurde mit Unterstützung durch den Schweizerischen Nationalfond durchgeführt.

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Die Laborantin Frl. Elisabeth Räber trug mit tatkräftiger, selbständiger Arbeit zum Fortgang der Untersuchung bei. Prof. Dr. F. Ruch stellte uns großzügigerweise sein Mikrospektrophotometer zur Verfügung, wofür ich ihm herzlich danke.     

Quantitative DNS-Bestimmungen von Ameisenhirnzellen

Brains of workers and males of the ant species Lasius fuliginosus were Feulgen stained. The amount of Feulgen dye of diploid nuclei of the “Perikaryenschicht” were measured microspectrophotometrically. When the slides were kept in the dark at 4° C the colour intensity did not decrease during half a year. Hydrolysis in Schiffs reagent with 0,09 N HCl did not influence the colour significantly. When the same method was used the results were more or less reproducible; 6 of 8 series gave identical values. — Feulgen dye and nuclear volume of diploid cells of ants from a natural habitat decrease from spring to autumn by ca 30 % and 10% respectively. — Ants which were kept in the laboratory for nearly two years did not show such a regular change in the Feulgen dye in their brain cells. These nuclei never reached the colour intensity of those ants from a natural habitat. — No difference in the Feulgen intensity has been found between ants kept in 4° C and at room temperature, respectively. The staining maximum was reached after 1 h by animals from the natural habitat, after 2 h by those from the laboratory. As expected the amount of Feulgen dye of haploid male cells was half of that of diploid worker cells, but the nuclear volume of haploid male cells was larger than half of that of worker cells (Zusammenfassung see p. 93).     

Kulturversuche mit Keimlingen von Mangrovepflanzen

Ohne Zusammenfassung     

Quantitative Proteinbestimmung in Einzelzellen mit Amidschwarz

Zusammenfassung Amidschwarz B (ASB) bildet in wässriger Lösung bei pH 5,5 mit Rinderserum-Albumin (RSA) stabile und definierte Komplexe, die säulenchromatographisch isoliert werden können. Die Reaktion gehorcht einer komplexen Kinetik und besteht im wesentlichen aus einer schnellen Reaktion, bei der nach etwa vier Stunden drei Moleküle ASB pro Mol RSA gebunden sind und einer wesentlich langsamer verlaufenden, die auch nach 24 h noch gegen keinen Grenzwert konvergiert. Mit Äther/Äthanol denaturierte Filme von ASB zeigen dagegen nur die schnelle Reaktion, die hier jedoch bereits nach zehn Minuten den Grenzwert erreicht hat. Der molare dekadische Extinktionskoeffizient des ASB-RSA-Komplexes läßt sich an diesen Proteinmodellen bestimmen: die säulenchromatographisch isolierten Komplexe haben ihr längstwellings Absorptionsmaximum bei 620 nm und können bei pH 12,3 dissoziiert werden. Nachdem die Additivität der Einzlabsorptionen von ASB und RSA bewiesen werden konnte, ist es möglich, aus den Gesamtspektren sowohl den Protein-, als auch den ASB-Gehalt und daraus den Extinktionskoeffizienten, des bei pH 5,5 gebildeten Protein-ASB-Komplexes, zu ermitteln. Er beträgt nach 3–5stündiger Reaktionszeit rund 110000.Auch bei den denaturierten RSA-Filmen kann, bei bekannter Filmdicke und Dichte, der Extinktionskoeffizient der ASB-Bande bei 620 nm in guter Nährung zu rund 96000 bestimmt werden.Mit Äther-Alkohol fixierte tierische Zellen zeigen ebenfalls nach Einwirkung von ASB und Auswaschen des überschüssigen Farbstoffes das Absorptionsmaximum im Bereich von 600 nm; als Lösungsmittel für den Farbstoff werden Wasser pH 5,5, bzw. Äthanol-TCA mit 200 mg, bzw. mit 150 mg pro 100 ml verwendet. Mit beiden Farbstofflösungen zeigt die Zeitabhängigkeit der Färbung, in Analogie zu den fixierten RSA-Filmen, nur die schnelle Reaktion, die ebenfalls nach 15–20 min bereits den Endwert erreicht. Dieser liegt bei Verwendung der alkoholischen Lösung zwei- bis dreimal höher, als bei Verwendung der wässrigen Lösung. Nach Optimierung der Färbung mit beiden Lösungsmitteln werden die Gesamtextinktionen von EATZ, YATZ, Ratten-Hepatocyten, Hühner-Thymus-und-Bursazellen gemessen und gegen die makroskopisch nach Lowry bestimmten Gesamtproteingehalte [mg/10⁶ Zellen] aufgetragen. Dabei ergeben sich für die Färbung in beiden Lösungsmitteln hochsignifikante positive Linearkorrelationen. Aus der Steigung der Ausgleichsgeraden errechnet sich der spezielle dekadische Extinktionskoeffizient [g^–1·1000 cm²] für die mit ASB gefärbten Zellproteine zu 1,76 (wässrige Lösung) und 3,83 (äthanolische Lösung). Bei den in wässriger ASB-Lösung gefärbten RSA-Filmen ergibt sich aus den molaren Extinktionskoeffizienten ein Konfidenzbereich für den speziellen von 1,21 bis 1,80, beim molekular gelösten RSA ein von 1,67.

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Quantitative determination of proteins in single cells with amidoblack

Summary In aqueous solution Amido Black B (ASB) forms stable and well-defined complexes with bovine serum albumin (RSA) at pH 5.5. The complexes can be separated by column chromatography. The formation of the complexes consists in a fast reaction during which, after 3 to 5 h approximately, 3 molecules of ASB have been bound per molecule RSA, and of a much slower reaction which, even after a laps of 24 h, is still far from approaching its final stage. With solid films of RSA, after denaturation with ethanol, fast reaction is found to approach its final stage after 10 min reaction time. With these model protein preparations, the molar extinction coefficient of the ASB-protein complexes can be determined: the soluble ASB-RSA complexes can be brought to complete dissociation at pH 12.3. After the additivity of the specific absorptions of both RSA and ASB had been proven, it was possible to determine the content of the solution of ASB and RSA, and therefrom the molar extinction coefficient of the ASB-RSA-complex at pH 5.5: ₆₂₀=110,000. ASB-stained ethanolfixed RSA films show an ₆₂₀ of approximately 96,000, if their thickness and specific weight are known.After incubation in watery or ethanolic/TCA solutions of ASB, also animal cells fixed with ether-ethanol show the ASB absorption band to be in the region of 600 nm after removal of the surplus of ASB by thorough washings. As already observed with the RSA films, the kinetics of the staining of the cells show the fast reaction reaching its final stage already after 15 to 20 min. When alcoholic solution of ASB is used, the extinctions are found to be twice or three times higher than those achieved by an aqueous one. After standardization of the staining procedures with both solvents the total extinctions of EATZ, YATZ, rat hepatocytes, chicken thymus and bursa cells were measured and plotted against the macroscopically determined protein content of the respective cells. Highly significant positive linear correlations resulted with staining both in watery and alcoholic solutions, respectively. From the slope of the straight lines, the specific extinction coefficient of ASB stained cellular proteins could be calculated up to ₆₂₀=1.76 with watery ASB solution and ₆₂₀=3.83 with the alcoholic solvent. The soluble ASB-RSA complexes have an ₆₂₀=1.67 the ASB stained ethanol denaturated films of RSA an ₆₂₀ of within a range of 1.21 to 1.80.

     

Bestimmung von Substratverbrauchskoeffizienten für Paraffinkohlenwasserstoffe

The empirical determined constant of 3.14 gram biomass per available electron is a good base for the calculation of minimum substrate consumption coefficients in the aerobic fermentation of paraffins by yeasts. The analysis of experimental determined specific substrate consumption coefficients and their comparison with the corresponding theoretical values show that the theoretical ones can be reached only if the substrate composition referring to carbon and hydrogen is of optimal composition for all syntheses.     

Bestimmung des Wuchsstoff- und Hemmstoffgehaltes von Pflanzenextrakten

Ohne ZusammenfassungMit 1 Textabbildung     

Bestimmung von Deoxynivalenol in Brot und Bier

Analytical procedures for the determination of deoxynivalenol (DON) in bread and beer, using enzyme immunoassay (EIA) and HPLC methods, were developed. For determination of DON by EIA, aqueous raw extracts of bread or degassed beer were extracted by liquid-liquid partitioning with ethyl acetate, the organic solvent evaporated, and the residue redissolved in phosphate buffered saline (PBS) for analysis. For determination by HPLC (UV detection at 218 nm), DON in bread extracts or beer was purified on immunoaffinity chromatographic columns. In bread, detection limits for DON of 15 µg/kg (EIA) and 7 µg/kg (HPLC) were achieved, with mean recoveries of 81%. In beer, the detection limit for DON was 2 µg/l both in EIA and HPLC, with recoveries of 91–93%. Both methods showed good agreement of the results for naturally contaminated sample materials, with r²=0.993 for bread and r²=0.823 for beer, respectively.     

Bestimmung des Turgordruckes an einer Einzelzelle mit dem Manometer

Ohne ZusammenfassungMit 3 Textabbildungen.Vortrag Um novo metodo de determinação direta da pressão osmotica numa celula vegetal dom manometro auf dem ersten südamerikanischen Botanikerkongreß in Rio de Janeiro am 17. 9. 38.     

Bestimmung von Deoxynivalenol und Deepoxy-Deoxynivalenol in Milch

A HPLC method with UV/diode array detection for the determination of deoxynivalenol (DON) and deepoxy-deoxynivalenol (DOM-1) in milk was developed. Milk was incubated with β-glucuronidase and then defatted. After purification by immunoaffinity chromatography, DON and DOM-1 were separated on a C18 reversed phase column with acetonitril/water (10/90) as the mobile phase and detected at 218 nm. Limits of quantification were 1 μg/l for both toxins, with mean recoveries (1–10 μg/l) of 97% (DON) and 84% (DOM-1), respectively. Milk samples (pasteurized, UHT; n=32) from German retail shops were analysed by this method. Neither DON/DOM-1 nor their glucuronides were found in any sample. These results are consistent with published studies indicating that in lactating cows, DON and DOM-1 are mostly eliminated through urine, and that the carry-over into milk is negligible.