发根农杆菌附着植物细胞的离子效应

本文将光学显微镜、电镜技术和附着定量分析方法结合起来,研究了发根农杆菌各菌株附着烟草叶肉原生质体的离子效应。实验结果表明:发根农杆菌不同菌株对共培养基离子强度的敏感性有差异。菌株R1000附着植物细胞及其引起植物细胞的聚集对离子强度不敏感,而菌株A4和15834则非常敏感;农杆菌对植物细胞附着的多寡与其引起植物细胞的聚集程度有相关性;共培养基中Mg~(2 )、Mn~(2 )等二价刚离子(不包括Ca~(2 ))是农杆菌附着所必需的;植物凝集素ConA显著地促进了附着和植物细胞与细菌聚集团的形成。从菌株A4附着植物细胞的进程可以看出,附着至少是两步的过程:第一步主要是离子力的相互作用,是第二步附着发生的前提;第二步是位点专一的特异性附着,不可逆。发根农杆菌对植物细胞的附着机制不同于根癌农杆菌。     

不同理化因子对发根农杆菌Ri质粒转化骆驼刺的影响

骆驼刺苗茎切段有很强的离体培养再生能力,用野生型发根农杆菌Ａ,菌株转化骆驼刺度轩茎段,并建立了发根转化体的培养体系。高压纸电泳显示转化组织可合成冠瘿。试验不同试验经条件及理化因子对提高转化率和加快发根生长的影响。结果表明,经过３天预培养及０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇１２ｈ高渗处理后培养于ＭＳ培养基中可有效提高转化率。而２％～３％蔗糖,３ｍｇ／Ｌ,ＧＡ３,１０μｍｏｌ／ＬＣｕ＾２＋,１０ｍｇ／ＬＡｇ＾＋,     

转小鼠金属硫蛋白cDNA枸杞的获得及其检测

小鼠金属硫蛋白－ＩｃＤＮＡ通过根癌农杆菌介导转枸杞,枸杞体内的表达产物对重金属镉有一定的抗性。用带有嵌合ｍＭＴ－ＩｃＤＮＡ及Ｃａ ＭＶ３５ｓ启动子的含非致瘤性Ｔｉ持粒载体的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４感染枸杞幼茎外植体,在含有卡那霉素１００μｇ／ｍＬ和５０μｍｏｌ／Ｌ Ｃｄ＾２＋的选择培养基上筛选转化的愈伤组织,并在含卡那霉素５０μｇ／ｍＬ和１００μｍｏｌ／Ｌ,Ｃｄ＾２＋的分化培养基上得到再生小芽。     

发根农杆菌及其应用

农杆菌是一类侵染性非常广泛的Ｇ-土壤杆菌,农杆菌质粒介导的基因转移系统是植物基因工程中比较完善与有效的基因转移方法。在众多的转基因植物中有80%是由农杆菌介导转化的,但其中大部分是有根癌农杆菌Ｔｉ质粒介导法获得的。根癌农杆菌含有的Ｔｉ质粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤。发根农杆菌含有Ｒｉ质粒,侵染植物后能诱发植物细胞产生毛发状根,即发根瘤。近年来的研究发现发根农杆菌Ｒｉ质粒介导法比Ｔｉ质粒法具有一定优越性而被广泛重视,而且由其转化获得转基因植物和生物有效成分的报道愈来愈多,本文主要讨论发根农…     

彩绒革盖菌愈创木酚氧化酶活性研究

本文测定了彩绒革盖菌在ＰＤＹ液体培养基中的愈创木酚氧化酶活性。在３０℃,１１０ｒ／ｍｉｎ,恒温振荡培养条件下,第１６天达产酶高峰,酶活性２１８．０ｕ;酶作用的最适ｐＨ为４．０;最适温度３０℃;Ｂａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋、Ｃｕ＾２＋等离子对愈创木酚氧化酶有激活作用,Ａｇ＾＋离子对酶活性有明显的抑制作用。     

高等植物在发根农杆菌介导下的遗传转化

本文介绍了发根农杆菌的生物学特性、遗传转化的操作技术、RiT-DNA转化体的形态特征以及发根农杆菌转化的利用。与根癌农杆菌不同,农杆碱型发根农杆菌的RiT-DNA含有生长素合成基因、农杆碱、甘露碱合成基因,不含有细胞分裂素合成基因,它的转化体首先是转化根。发根农杆菌介导的植物遗传转化,在次生代谢产物生产,植物抗逆性育种以及细菌与植物进化关系的研究等方面具有广泛的应用前景。     

辣椒转基因植株再生

用改建的农杆菌转化辣椒,已建立有效的转化两再生系统。辣椒无菌苗（１２天苗龄）子叶在再生培养基（ＭＳ＋３ｍｇ／Ｌ ＢＡ）上预培养２天,再用农杆菌感染,共培养２天,再转入含Ｋｍ（１００μｇ／ｍｌ）的再生培养基中培养２－３周后,子叶基部有多丛芽形成。分切多丛芽,将芽转选择性的芽伸长培养基（ＭＳ基本成分＋Ｂ５维生素类＋２ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋７５μｇ／ｍｌ）上,待芽长至２－３ｃｍ后,切下并转入生根培养基（ＭＳ＋     

凝结芽孢杆菌牙孢形成注体培养基的研究

本文对一株具有疗效作用的同型乳酸发酵菌－凝结芽孢杆菌ＴＱ３３的产芽孢培养基进行了研究。该菌株在普通液体培养其中通常不形成芽孢,而在所设计的一种含Ｍｎ＾２＋（５０ｐｐｍ）的液培养其中,占总菌数的５２－５８％。     

地不容毛状根的培养

以Ｒ１０００,１５８３４,１８５５,８１９６等４种发根农杆菌菌株,在不同条件下,感染地不溶,结果在光照条件下,Ｒ１０００诱导植物幼嫩组织产生毛状根。毛状根在ＭＳ液体培养基中生长４２ｄ后,趋于稳定;异喹吉林生物碱含量在第２８ｄ时达到峰值１１０４μｇ／ｇＦＷ。６种培养基中,毛状根生长及异喹啉生物碱含量的差异很大,在在Ｂ５２基中毛状根生长最快,Ｎｉｔｓｃｈ培养基中毛状根异喹啉生物碱含量最讥。Ｂ５培养基中     

细胞外Mn^2＋对内向整流钾通道（IRK1）的阻断作用

目的和方法：采用双微电极电压钳（ＴＥＶ）法研究细胞外Ｍｎ＾２＋对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道（ＩＲＫ１）的阻断作用。结果：细胞外Ｍｎ＾２＋浓度分别为１、１．２５、２．５、５、１０和２０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＾＋浓度为９０ｍｍｏｌ／Ｌ,可见Ｍｎ＾２＋对ＩＲＫ１的瞬间电流（旋加电压后２ｍｓ）具有Ｍｎ＾２＋浓度依赖性和电压依赖性阻断作用;细胞外加Ｍｎ＾２＋浓度较高时强;细胞外Ｋ＾＋浓度为９０ｍｍｏｌ／     

纤维植物罗布麻发根的诱导及植株再生

利用3种发根农杆菌(LBA9402.R601,和R1000)转化纤维植物罗布麻无菌种子苗的根茎叶不同外植体部位,首次诱导其生成发根并实现了直接由发根途径的植株再生.罗布麻发根诱导与所用的发根农杆菌菌株,外植体部位及光周期密切相关.发根农杆菌LBA9402感染罗布麻的根外植体,实现了最高转化率达100%.与LBA9402及R601相比,被发根农杆菌R1000感染的根外植体适合在黑暗环境下培养.其诱导生成的发根密度可达平均每个外植体22条.在不加激素的1/2 MS培养基上,LBA9402和R601诱导产生的发根可以诱导生成不定芽,不定芽诱导率达20%.不定芽切下后,在不加激素的1/2 MS培养基上2周内可以诱导生根.通过聚合酶链式反应(PCR)对发根及再生植株进行了鉴定,证明发根农杆菌的T-DNA插入了植物的基因组.为罗布麻的分子育种建立了稳定的转化及再生体系,为下一步通过转入外源基因改善其农艺性状奠定了基础.     

乙型肝炎病毒包膜M蛋白在巴斯德毕德毕赤酵母中的表达

转化了乙肝病毒ｐｒｅＳ２－２基因的重组巴斯德毕赤酵母菌株经甘油培养基充分增殖,然后转移到甲醇培养基中进行诱导表达,破碎细胞并提胞内蛋白,经ＥＬＩＳＡ和ＷｅｓｔｅｎＢｌｏｔ检测证明有４株ＧＳ１１５／ＨＩ＾＋ＭＵＴ＾＋表达了ＨＢＶ Ｍ蛋白。     

发根农杆菌介导的尾巨桉遗传转化体系的建立

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）的建立对植物功能基因的验证具有重要意义,为了在桉树（Eucalyptus）中建立发根农杆菌介导的遗传转化体系,本研究以不同的发根农杆菌菌株侵染尾巨桉（Eucalyptus urophylla × E. grandis）的叶片和茎段,确定合适的农杆菌菌株和外植体类型,在此基础上开展农杆菌浓度、侵染时间对毛状根诱导的影响。结果表明：采用发根农杆菌菌株MSU440,以叶片为外植体进行发根诱导,最高获得了81.0%的毛状根诱导率,毛状根平均根长达到3.23 cm。在发根农杆菌浓度为OD₆₀₀=0.3、侵染时间为30 min时,共培养48 h后经过20 mg·L^-1卡那霉素筛选培养,通过PCR分子鉴定和GUS染色证实外源基因稳定地整合在桉树毛状根基因组中,转化率达20.2%。初步建立了发根农杆菌介导的桉树遗传转化体系,为桉树基因功能鉴定和进一步的转基因育种奠定基础。     

He—Ne激光照射对成纤维细胞内[Ca^2＋]i浓度影响的流式细胞计测定

目的：Ｈｅ－Ｎｅ激光照射治疗的机理不明,激光照射引起细胞内Ｃａ＾２＋水平变化,为治疗机理提供理论依据。方法：Ｈｅ－Ｎｅ激光照射引起鼠成纤维细胞Ｌ９２９内［Ｃａ＾２＋］ｉ的变化,用ＨＯ３４２对细胞ＤＮＡ活性染色,Ｆｌｕｏ－３ＡＭ对细胞内Ｃａ＾２＋染色,利用ＦＣＭ同时定量分析细胞ＤＮＡ和细胞内Ｃａ＾２＋的变化。结果：激光照射１５ｍｉｎ（光剂量１１．８１Ｊ／ｃｍ＾２后,ＦＣＭ分析可见ＤＮＡ分布直方图右移     

农杆菌T—DNA介导的植物转基因的分子机制

前言 根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)与发根农根菌(A.rhizogenes)同属根瘤菌科,是革兰氏阴性植物病原菌。前者感染植物引起冠瘿病(Crop gall tumour),冠瘿病用含有抗生素的培养基培养与除菌。可无限增殖;后者感染植物诱发出许多不定根,把不定根培养在上述培养基上也可迅速生长,多次分枝成毛状称毛状根(hairy root)。农杆菌感染机理很复杂。其感染作用起始于受伤的植物细胞分泌的大量化学物质时期。受伤植物细胞分泌的酚分子诱导农杆菌怀有的Ti质粒或Ri质粒上的基因活化,尔后农杆菌紧附植物细胞并把Ti质粒或Ri质粒上一部分DNA(称作T—DNA,tranfer DNA)转移到植物染色体上。T.DNA共价整合后编译合成的新的低分量的代谢物,称为冠瘿碱。     

何首乌毛状根的诱导和培养(简报)

发根农杆菌（Agrobacteriumrhizogenes）侵染后,通过其Ri质粒的T－DNA片段在植物细胞基因组中整合,诱导形成毛状根（hairyroot）l’l。利用生长迅速、生产效能高而稳定的毛状根培养物生产药用植物的次生物质,已有不少报道「一习。但未见发根农杆菌对何首乌遗传转化的报道。何首乌（Polygonu。。ltij7orumThunb．）为常用中药,其块根为乌须发、悦颜色、益精养血和抗衰老的要药。本文报道发根农杆菌对何首乌遗传转化的实验结果,为今后用毛状根培养物生产何首乌的次生物质打下基础。l材料和方法细菌菌株及培养发根农杆菌（Agrobacteri…     

影响根癌农杆菌附着禾谷类作物培养细胞的因素

本研究利用水稻、小麦、玉米等主要禾谷类作物悬浮培养细胞,观察农杆菌对禾谷类作物培养细胞的附着,实验结果表明:植物细胞的生理状态和分化发育进程对农杆菌的附着有明显的影响;通过对农杆菌的Vir 区基因进行预活化诱导处理,能显著提高其在禾谷类作物培养细胞上的附着,胭脂碱型农杆菌C 58 C 1(pMP 90+pBI 121)预处理后增加附着的效果较章鱼碱型农杆菌LBA 4404(pAL 4404+pBI121)更显著些。此外,在改善共培养环境条件下(如添加对农杆菌表现强烈趋化性的精氨酸和施行抽气减压处理),农杆菌能大量附着在经过果胶酶预处理的禾谷类作物悬浮培奍细胞上。     

Ri质粒介导GUS基因转化商陆的研究

发根农杆菌Ar1334工程菌株与商陆叶片共培养,诱导效率不同程度地受到发根农杆菌生理状态、浓度、浸泡时间、共培养时间的影响:采用稀释5倍的处于对数生长期的Ar1334工程菌株,感染商陆无菌苗幼嫩叶圆片5min,在MS培养基上共培养2d,可达最大转化效率82.2%;诱导的根在附加20mg·L-1Kan的MS无激素MS培养基上,呈现旺盛的生长态势和典型的发状根结构特点,经PCR检测扩增出了560bp的rolC基因的目的片断,组织化学检测也证实了GUS基因在发状根中的表达.     

人参发根的诱导及其适宜培养条件的研究

利用发根农杆菌A₄菌株在人参根外植体上直接诱导产生发根。在1/2MS固体培养基上建立起发根离体培养系,经连续多代的培养,发根仍保持旺盛生长状态。PCR扩增结果表明,发根农杆菌R_I质粒的rolC基因已在人参发根基因组中整合并得到表达。液体培养基中发根生长速度约为固体培养的2倍。经对发根中人参皂苷含量及比生长速率的测定,筛选出高产发根系R9923。利用HPLC法测定了R9923发根系中单体皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2和Rd的含量,人参总皂苷含量达15.2mg/g。确定1/2MS培养液（30g/L蔗糖）、摇床转速110r/min、每２周更换一次培养液、继代培养时间4周,为人参发根生长适宜条件。探讨了培养容积、发根初始接种量以及分级放大培养工艺对发根大规模生产过程中生物产量和皂苷含量的影响。     

发根农杆菌Ri质粒在药用植物生物工程中的应用

发根农杆菌(Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ)与根癌农杆菌(Ａ.ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ)属于根瘤菌科,均为革兰氏阴性菌[1]。它们在侵染植物后引起的症状不同,含有Ｔｉ质粒的根癌农杆菌在侵染植物后形成冠瘿瘤(ｃｒｏｗｎｇａｌｌ),而含有Ｒｉ质粒的发根农杆菌表现与其不同,它在感染植物后在植物的伤口部位诱发产生毛状根(ｈａｉｒｙｒｏｏｔ)。由发根农杆菌侵染植物诱导产生的毛状根具有生长快、分枝多、根毛多等特点。发根农杆菌Ｒｉ质粒与根癌农杆菌Ｔｉ质粒结构相似,都具有高效率转移的Ｔ-ＤＮＡ区和致病的Ｖｉｒ区…