人畸胎瘤细胞株PA-1的体外诱导分化

PA-1细胞是一株从人卵巢性畸胎瘤衍生的细胞株,经10~(-5)mol/L视黄酸诱导后,部分细胞的形态和排列方式发生一定的改变。通过细胞免疫荧光染色,发现诱导后细胞的结蛋白和胞外基质(纤粘连蛋白、层粘连蛋白和腱粘连蛋白)表达与分布模式有较大的变化,并且这些变化与细胞形态改变相关。但大部分PA-1细胞诱导后的生长状况并没有较大的改变,仍分泌与表皮生长因子、类胰岛素生长因子-Ⅰ相关的活性物质。以上结果提示PA-1细胞经视黄酸诱导后一部分细胞可能向肌细胞方向分化。     

人衰老成纤维细胞经紫外线损伤后的DNA修复和细胞周期调控

 以体外培养的不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞（２ Ｂ Ｓ）为对象,紫外线诱导 Ｄ Ｎ Ａ 损伤后,观察细胞形态、增殖特性、细胞周期、 Ｄ Ｎ Ａ 修复变化等细胞应答以及 ｇａｄｄ１５３、ｐ２１ Ｗ Ａ Ｆ１／ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｓ Ｄ Ｉ１、ｐ５３ 等基因的转录水平的表达变化．结果显示：紫外线诱导 Ｄ Ｎ Ａ 损伤后,衰老（＞ ５５ 代）２ Ｂ Ｓ细胞形态及增殖能力的改变不如年轻细胞（＜ ３０ 代）显著;不同代龄的细胞损伤后均出现 Ｇ１ 期阻滞现象,年轻细胞 Ｇ１ 期阻滞率明显高于衰老细胞（ Ｐ＜ ００５）;衰老细胞总的修复能力较年轻细胞明显下降（ Ｐ＜ ００１）;同时,ｇａｄｄ１５３、ｐ２１、ｐ５３ 等的可诱导性均低于年轻 ２ Ｂ Ｓ细胞．由此,分别在细胞水平与基因水平反映了衰老细胞经紫外线照射损伤后的细胞应答变化与修复机能减退的关系．     

视黄酸诱导细胞分化分子机制的研究进展

本文从视黄酸（ＲＡ）对早期即刻反应基因表达,多种蛋白激酶活性变化及核转录因子ＡＰ－１和Ｑｃｔ－３／４基因转录产物功能、白血病细胞对ＲＡ出现抗生的可能原因以及ＰＲ蛋白在ＲＡ诱导造血干／祖细胞,白血病细胞分化成熟中的调节作用,ＰＲＢ与其它核转空蛋白的相互关系等方面分析,综述了近年来有关ＲＡ诱导细胞分化可能的分子机制。     

HL－60细胞诱导分化过程中蛋白质酪氨酸磷酸化水平的改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＢ_（６５２）诱导ＨＬ－６０细胞过程中,细胞浆和膜溶脱部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了对比研究,结果发现,在胞浆部分主要有四种含有Ｐ－Ｔｙｒ的蛋白,而且８０ｋＤ蛋白酪氨酸磷酸化水平随着诱导发生变化。诱导前后内源性蛋白上Ｐ－Ｔｙｒ百分含量也发生了改变。     

表面活性物质相关蛋白表达的调控研究进展

特异性的肺表面活性物质相关蛋白（ＳＰ）包括亲水性的ＳＰ－Ａ、ＳＰ－Ｄ和疏水性的ＳＰ－Ｂ、ＳＰ－Ｃ．它们的表达与合成受众多生理、病理因素影响。本文综述了该领域的研究进展。１．ＳＰ表达的组织细胞特异性调控：只有肺内某些细胞（肺泡Ⅱ型细胞、Ｃｌａｒａ细胞等）能合成分泌ＳＰ,这可能是由ＳＰ基因中特定序列决定的,如ＳＰ－Ｂ基因的细胞特异性表达的调控成分。２．ＳＰ表达的发育期调控：ＳＰ基因属发育控制基因家族。在人类妊娠前３ｍｏｎ胎肺中,ＳＰ基本不表达：妊娠１５－１８ｗｋ时,气管、支气管上皮细胞即可见ＳＰ－Ｂ、ＳＰ－ＣｍＲＮＡｓ和表达蛋白,它们可能比ＳＰ－Ａ出现早：妊娠１９－２０ｗｋ时可见ＳＰ－ＡｍＲＮＡ和表达蛋白,胎肺组织在体外无激素条件下培养可很快诱导ＳＰ表达,在妊娠后３ｍｏｎ内,各ＳＰｍＲＮＡｓ及其表达蛋白水平与磷脂水平平行升高,也与ＳＰ降低表面张力的特性逐渐增强相关,羊水中可检出这些蛋白,板层体的出现与ＳＰ－Ｂ的表达密切相关,而比ＳＰ－Ａ的表达早,胎肺发育过程中ＳＰｍＲＮＡｓ增加至少部分是由于其基因转录率升高,可能同时也与翻译增加有关。３．糖皮质激素对ＳＰ表达的调控：糖皮质激素对ＳＰ－Ａ表达的调控极复杂,且与剂量     

阿片成瘾与中脑边缘DA系统的适应性变化

中脑－边缘ＤＡ神经阿片奖赏效应中起着关键性作用。长期应用阿片类药物可引起该系统靶神经元独特的适应性改变。主要包括：（１）中脑腹侧被盖区（ＶＴＡ）的ＴＨ被诱导增加、ＧｌｕＲ１受体上调、神经纤维丝蛋白的减少以及ＤＡ神经元的形态萎缩等；（２）伏核（ＮＡｃ）ＤＡＤ１受体超敏、Ｇｉ／ｏα亚单位的减少，ｃＡＭｐ－ＰＫＡ系统活性上调以及ｃＡＭＰ反应元蛋白（ＣＲＥＢ）和ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达的改变等。阿片     

衰老细胞转录因子AP_1/CREB结合活性对EGF的可诱导性下降

转录因子与ＤＮＡ的结合是基因转录的关键环节．通过迁移位移法分析了转录因子ＡＰ１、ｃＡＭＰ反应元件结合蛋白（ＣＲＥＢ）、糖皮质激素反应元件（ＧＲＥ）结合蛋白在衰老细胞中的结合活性．结果表明,ＡＰ１与ＣＲＥＢ的结合活性在衰老细胞中对表皮生长因子（ＥＧＦ）的反应性低于年轻细胞;而ＧＲＥ结合蛋白的结合活性在衰老细胞中对ＥＧＦ的反应性无明显变化．这提示ＥＧＦ不能有效刺激衰老细胞增殖可能与其转录因子结合活性的改变有关     

HL—60细胞诱导分化过程中蛋白质酪氨酸磷酸化水平的改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＢ６５２诱导ＨＬ－６０细胞过程中,细胞浆和膜溶脱部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了对比研究。结果发现,在胞浆部分主要有四种含有Ｐ－Ｔｙｒ的蛋白,而且８０ｋＤ蛋白酪氨酸磷酸化水平随着诱导发生变化。诱导前后内源性蛋白上Ｐ－Ｔｙｒ百分含量也发生了改变。     

重组人骨形态发生蛋白－2成熟肽在大肠杆菌中的表达及其诱导成骨活性

报告了人骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）成熟肽的基因克隆,及其在大肠杆菌中的表达。用ＡｆｌⅡ酶剪除ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ中的信号肽及前肽部分的序列,将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３′端０．３６ｋｂ基因片段克隆于大肠杆菌表达载体ｐＭＸ－１质粒的ＡＴＧ下游,受控于ＰＬＰＲ启动子。重组子以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主细胞进行温度诱导表达。工程菌经４２℃６ｈ诱导后,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新蛋白带,分子量约为１２ｋＤ,约占菌体总蛋白的２０％。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后,可获得纯度较高的重组人骨形态发生蛋白－２成熟肽（ｒｈＢＭＰ－２ｍ）。小鼠肌肉植入试验发现。ｒｈＢＭＰ－２ｍ植入后的不同时间,在局部出现间质细胞的聚集和增生、软骨细胞及软骨基质的生成和硬质骨的形成,证明ｒｈＢＭＰ－２ｍ具有明显的诱导新骨形成的作用。     

Egr－1诱导的内皮基因表达：一个血管损伤的共同课题

Ｅｇｒ－１诱导的内皮基因表达：一个血管损伤的共同课题血管结构急性机械损伤后许多病理学上相关的基因,包括血小板源性生长因子－Ｂ链（ＰＤＧＦ－Ｂ）被诱导。血管内皮ＰＤＧＦ－Ｂ表达的诱导可能对血管平滑肌细胞具有趋化和促有丝分裂效应,从而参与实验性动脉损伤、...     

几种扩血管多肽对bFGF促血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的和方法：研究肾上腺髓质素（Ａｄｍ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及Ｃ－型心房利太（ＣＮＰ）对碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）促血管平滑细胞（ＶＳＭＣ）增殖作用的影响及其机制。结果：孵育２４ｈ后,ｂＦＧＦ刺激ＶＳＭＣ增殖较对照组增加２．１倍（Ｐ〈０．０１）,细胞内蛋白磷酸化程度增加１．４倍（Ｐ〈０．０１）,ＰＫＣ及ＭＡＰＫ活性分别增加１．５和２．５倍（Ｐ〈０．０１０;Ａｄｍ．ＣＧＲＰｔ ＣＮＰ     

转化生长因子—β1对前单核白血病细胞系THP—1的分化诱导作用

本文研究了重组人转化生长因子０β１对前单核白血病细胞系ＴＨＰ－１细胞增殖抑制作用和分化诱导作用。细胞染色计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入数据表明,在０．０７８－１．２５ｎｇ／ｍｌ浓度范围内,ｒｈＴＧＦ－β１剂量与增殖抑制呈正相关,在抑制细胞增殖的同时,ｒｈＴＧＦ－β１诱导细胞分化,诱导体系中细胞形态和生长方式的发生明显变化,细胞转为贴壁生长,表现出Ｍφ的细胞形态。α－醋酸萘酚酯酶、硝基蓝四唑的、细胞吞噬试     

细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响

用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ）,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１,４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６０细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化,发现１２至２４ｈ酶活性达到一个高峰,为５０．１４ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（１０６ｃｅｌ）,此时细胞处在分裂间期,其它各测定时间变化不大．用ＰＭＡ,ＲＡ等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其活性发生了较明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其酶活性在２４ｈ变化最大,升高到对照的１．３２倍;而ＲＡ处理的细胞其酶活性在７２ｈ变化最大,升高到对照的２．１５倍．     

诱导的HL60细胞表面β1—4半乳糖基转移酶的研究

本文用荧光标记的受体底物〔Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ〕,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞表面β１－４半乳糖基转移酶的活性检测方法。用这种方法研究ＨＬ６０细胞,发现不同的培养时间,其细胞表面的酶变化明显,在２４小时酶活性最高,此时细胞处在分裂间期。用佛波酯（ＰＭＡ）,视黄酸（ＲＡ）等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其表面活性发生了明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其表面酶活性在２４小时变化最大,升高到对照的１．３倍;而ＲＡ处理的细胞其表面酶活性在７２小时变化最大,升高到对照的１．７２倍。     

衰老细胞转录因子AP1／CREB结合活性对EGF的可诱导性下降

转录因子与ＤＮＡ的结合是基因转录的关键环节,通过迁移性法分析季转录因子ＡＰ１、ｃＤＡＭＰ反应元件结合蛋白（ＣＲＥＢ）、糖皮质激素反应元件（ＧＲＥ）结合蛋白在衰老细胞中的结合活性,结果表明,ＡＰ１与ＣＲＥＢ的结合活性在衰老细胞中对表皮生长因子（ＥＧＦ）的反应性低于年轻细胞;而ＧＲＥ结合蛋白的结合活性在衰老细胞中对ＥＧＦ的反应性无明显变化,这提示ＥＧＦ不能有效刺激衰老细胞增殖可能与其转录因子结合活性的     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

人血管内皮细胞生长因子受体Flt—1胞外区cDNA在毕赤酵母中的？…

将编码血管内皮细胞生长因子受体ＦＩｔ－１胞外区１－３ｌｏｏｐ３１６个氨基酸残基的ｃＤＮＡ插入到含ＡＯＸ１启动子和α分泌信号肽序列的Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母载体中,构建了重组表达质粒ｐＰＩＣ９Ｋ／ＦＩｔ＝１（１－３）,转化酵母景菌ＧＳ１１５,筛选Ｈｉｓ＾＋Ｍｕｔ＾ｓ表型转化子,经插瓶培养,１％甲醇诱导表达４ｄ后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示,培养上清中ＦＩｔ－１（１－３）表达这总蛋白的３０－％     

人肝癌细胞的IGF—BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、质谱等方法,研究了人肝癌细胞（ＨｅｐＧ２）分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白－１（＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１）的分子结构、特性,及其被内源性蛋白酶降解的特点,＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１的经抗体免疫沉淀、生化分离,纯化为均一体,其分子是由多个亚构成的蛋白质,分子量约为２７ｋＤ;细胞ＵＭＲ、ＨｅｐＧ２、Ｈ３５ＢＲＬ３Ａ分泌的蛋白酶能将＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１催     

ＳＰ—Ａ及其磷脂代谢的发育性调节研究进展

ＳＰ－Ａ的发育性调节及其对磷脂代谢的影响相当复杂,不同胎龄的肺Ⅱ型细胞ＳＰ－ＡmRNA有为蛋白质表达水平不同,主要受顺式作用元件和甲状腺转录因子１（ＴＴＦ－１）、蛙皮素样肽（ＢＬＰ）的调节,且人ＳＰ－Ａ与其他动物在基因结构和调节序列方面存在明显差异。随着ＳＰ－Ａ受体成熟ＳＰ－Ａ发挥多种不同的效应,ＳＰ－Ａ受体发育水平不同与ＳＰ－Ａ对肺０２８２型细胞磷脂代谢调节明显相关。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ ＰＡ 对人肝癌细胞系ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的生长调控、诱导凋亡作用。结果表明： ４ － ＰＡ 对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞增殖抑制的ＩＣ５０ 为４ －９ｍ ｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０ 增加。作用效果迅速,在０ ．５ 小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ ＰＡ 浓度的增加和作用时间的延长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞凋亡的分析发现：４ － ＰＡ 对细胞增殖期（Ｓ期、Ｇ２ 期） 有较强的抑制和逆转作用,使细胞群截止在Ｇ１ 期。随着作用时间的延长和４ － ＰＡ 浓度的增加,细胞凋亡的比例增加,凋亡细胞多来自于细胞增殖期（Ｓ 期、Ｇ２ 期） 。诱导凋亡和使细胞截止于细胞静息期是４ － ＰＡ 抑制细胞增殖的主要途径。