人表皮生长因子发酵液的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

一般蛋白质样品的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)通常只用一种浓度的分离胶(单层分离胶)。我们发现,将这种方法用于未经处理的重组人表皮生长因子(rhEGF)发酵液的电泳时,效果不好。我们推测可能是由于发酵液成分复杂,蛋白分子大小不均。基于这种考虑,我们就分离胶浓度对电泳效果的影响进了一些探索。     

重组人表皮生长因子的中试工艺研究

人表皮生长因子(hEGF)是最早发现最早应用于临床的多肽生长因子之一,由53个氨基酸组成,分子量约为6200Da。它具有多种生物学功能,能促进表皮和上皮细胞的增殖,刺激多种培养细胞的生长,增强蛋白质及DNA合成等。在临床上主要用于创烧伤救治、皮肤     

测定多肽分子量的SDS聚丙烯酰胺电泳

一般说来,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE),分离分子量10,000以下的多肽样品效果不佳。本文介绍了一种用强电解质离子为前导离子和拖尾离子、加尿素的SDS-PAGE系统,可对分子量2,000—20,000范围内的蛋白质多肽样品进行分子量的测定。     

应用单克隆抗体免疫亲和柱纯化干细胞因子

应用抗人干细胞生长因子(SCF)单克隆抗体,通过化学偶联方法制备成亲和层析柱,用于纯化大肠杆菌表达的可溶性重组人rh-SCF.结果表明,经亲和柱纯化的样品经SDS-PAGE电泳检测纯度达95%以上,计算蛋白回收率为23.4%,并且纯化后rh-SCF生物活性明显高于纯化前样品.     

地龙蛋白对人增生性瘢痕成纤维细胞的作用研究

目的:研究鲜地龙提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖作用,及从其分离纯化的活性蛋白对基质金属蛋白酶(MMP-1、9)表达影响。方法:地龙提取物依次通过DEAE离子柱层析、葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,应用HSF细胞模型,以活性为导向得到活性组份。获得样品组份进行部分理化性质实验,及对HSF细胞基质金属蛋白酶(MMP-1、9)表达影响。结果:地龙样品组份明显抑制HSF细胞增殖;样品经化学反应定性为蛋白,SDS-PAGE电泳法测定分子量为38k Da,p H值的平均值为7.82。分离纯化的DB-2样品使基质金属蛋白酶表达量下调,P0.05。结论:地龙样品组份能够显著抑制HSF细胞增殖,具有开发成为治疗瘢痕药物的潜力。     

小分子肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法

在蛋白质的生化分析和基因表达产物的分离纯化中 ,经常要把某种或某些蛋白质成分分离开来。聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE)是分离蛋白质的常用生化方法 ,样品的蛋白质分子热变性解聚后与 SDS结合形成带负电的蛋白质 - SDS复合物 ,复合物在电泳中的迁移率取决于蛋白质的分子大小 ,使用均匀浓度的 SDS-PAGE来分析分子量在 15～ 2 0 0 k D的蛋白质时 ,电泳迁移率与分子量的对数成线性关系。但常规定 Tris-甘氨酸 -盐酸系统中电泳分离分子量小于 10 k D的多肽效果差。作者在分离小分子肽的实验中改进了一套较简便的分离小分子肽的 T…     

一步法电泳分析肌联蛋白亚型和肌球蛋白重链

目的为研究超大分子量肌小节蛋白肌联蛋白(titin)的生理病理功能,在一次电泳过程中同时分离titin各亚型和中分子量肌小节蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)。方法使用16cm×18cm垂直电泳系统,在电泳板下1/3灌注10g/L SDS-PAGE胶,上2/3灌注60g/L SDS-琼脂糖(SDS-VAGE)胶。低温8℃下持续电泳5h,在电泳板上层以SDS-VAGE胶电泳分离titin亚型,下层以SDS-PAGE胶电泳分离MHC。电泳后VAGE胶使用银染法标记titin各亚型,PAGE胶使用考马斯亮蓝染色法标记MHC。结果 titin各亚型得到有效的分离,目标蛋白条带显示清晰,与其分子量大小一一对应,分离效果明确。结论一步法垂直电泳系统可应用于超大分子量蛋白的电泳,同时可分离多个分子量差距大的蛋白,提高蛋白电泳实验效率。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳在分离小分子物质中的应用

SDS-PAGE将SDS所带的大量阴性电荷和聚丙烯酰胺凝胶的高分辨率相结合,使蛋白自身的电荷被大量的阴性电荷所淹没,这样蛋白在电泳时的迁移率仅与其分子大小有关。蛋白电泳时凝胶的孔径大小和电泳介质对不同大小分子的分辨率有不同的影响,特别对相对分子量小于10000的低分子量蛋白,常规的电泳方法完全不能分辨,国外报道的尿素、缓冲液浓度及聚丙烯酰胺中的单体和双体的比例对蛋白的分辨率有较大的影响,但将几种不同因素进行综合研究,未见报道。     

火菇素的分离纯化及其分子量的测定*

火菇素是一种从金针菇FlammulinaVelutipes中分离纯化出来的具有抗癌活性的简单蛋白。用SDS-PAGE系统,通过与已知分子量的标准参照蛋白比较,确定火菇素的分子量为24kDa,这一结果与其氨基酸组成分析相比偏大,进一步通过电喷雾离子化质谱法(ESIMS)分析,精确测定火菇素的分子量为19891.13Da。推测由于火菇素蛋白与SDS的非正常结合是造成蛋白质在SDS-PAGE中迁移变慢导致偏差的原因。     

火菇素的分离纯化及其分子量的测定

火菇素是一种从金针菇Flammulina Velutipes中分离纯化出来的具有抗癌活性的简单蛋白。用SDS-PAGE系统,通过与已知分子量的标准参照蛋白比较,确定火菇素的分子量为24kDa．这一结果与其氨基酸组成分析相比偏大,进一步通过电喷雾离子化质谱法(ESIMS)分析,精确测定火菇素的分子量为19891．13Da。推测由于火菇素蛋白与SDS的非正常结合是造成蛋白质在SDS-PAGE中迁移变慢导致偏差的原因。     

DNA分子量标准制备技术：方法与进展

DNA分子量标准是一组分子量大小已知的DNA片段混合物,用于指示核酸电泳中未知样品的分子量大小,从而帮助实验人员判断DNA样品的性质。因而DNA分子量标准成为目前分子生物学和基因工程领域不可或缺的一种电泳耗材。综述了目前各种DNA分子量标准产品的制备方法和技术原理及近年来该领域的一些技术进展情况。     

苹果多酚氧化酶的纯化与表征

运用丙酮浸漬干燥、磷酸盐缓冲液提取、低温离心、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex(A-50)、Sephadex(G-75) 和DEAE-celluse(DE-52)层析等方法从苹果中分离获得一种新的含铜酶蛋白,该酶被命名为多酚氧化酶Ⅱ(polyphenol oxidase Ⅱ, PPOⅡ),纯化倍数是215,纯化收率是23%.PAGE、SDS-PAGE和MALDI-TOF 等技术用于测定所获的酶的纯度和分子量.在PAGE和SDS-PAGE 均显示一条带,表明PPOⅡ只由一个亚基组成,且已达到单一组分(MALDI-TOF的结果更证实了这一点).SDS-PAGE 和 MALDI-TOF 的结果都表明PPO的分子量为 38204 Da.pH值对酶活性和稳定性研究的结果显示,从pH值4.0～7.0随着pH值的增加,酶活性也不断增加;从pH值 7.0～11.0, 酶活性不断降低.PPOⅡ的最适pH值为6.6最适温度为30℃.     

多花黄精多糖的分级提取及结构初步分析

本文研究了多花黄精多糖的分级提取及化学结构,为进一步开发利用提供理论依据。多花黄精样品粉碎经石油醚脱脂后,经用热水和不同浓度的NaOH溶液分级提取、乙醇沉淀得到多花黄精多糖(Polygonatum cyrtonema Hua polysaccharides)PCP1、PCP2、PCP3、PCP4和PCP5等五个样品,采用糖组成分析、红外光谱分析、分子量及其分布、核磁波谱分析及热稳定性分析的方法分析其理化性质及结构特征。结果表明,五个样品都含有一定量的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸,以及少量的木糖和葡萄糖醛酸,但是水提和进一步碱提的多糖样品在单糖相对含量上呈现出了显著的差异;红外光谱结果显示多花黄精多糖具有明显的糖类物质特征吸收峰且是含有吡喃环的酸性多糖;高效凝胶色谱法(HPGPC)测得PCP1、PCP2、PCP3、PCP4和PCP5等五个样品的重均分子量分别为2090 Da、38600 Da、42600 Da、34300 Da和24100 Da;与水提的样品相比,进一步碱提得到的样品分散度高,分子链长短分布不均匀,热稳定性较差;提取时碱液浓度越高,热稳定性越差;13C NMR进一步表明PCP1异头碳构型主要是β型,有少量α型,含有六种糖残基,而进一步碱提得到的PCP3和PCP5的异头碳构型为α型,PCP3含有四种糖残基,PCP5含有两种糖残基。     

用有限酶切法分析蛋白质的氨基酸序列

报道了一个通过有限酶切蛋白质产生多肽片段的方法.蛋白质经单向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离和用考马斯亮蓝短暂染色后,切下所需的蛋白质带,将其放入另一个SDS-PAGE凝胶的样品槽内,在电泳过程中该蛋白质被蛋白酶如蛋白酶V8降解,所产生的多肽片段随之被分离.电泳结束后,将多肽片段电印迹至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene difluoride,PVDF)膜上.这些多肽片段从PVDF膜上切下后可以直接被用于分析氨基酸序列.该方法能广泛适用于分析一般蛋白质和N端被修饰蛋白质的氨基酸序列.     

不经染色直接从SDS-PAGE制备凝胶中准确切下所需蛋白条带的方法

蛋白样品的垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)不但是一种最常用的蛋白分析方法,也经常用于蛋白质的制备。从电泳凝胶上纯化蛋白,一般都要先用考马斯亮蓝染色,然后切下所需的蛋白条带。这里介绍一种可以不染色,直接从SDS-PAGE制备凝胶上准确切割所需蛋白条带的方法。与染色后切胶的方法相比,这种方法简单、省时,分离到的蛋白容易从胶中洗脱回收,并可明显提高回收率,而且省去了令人烦怖的从回收的蛋白中脱去染色时结合的染料的问题。作者曾用此方法分离过多种蛋白,屡试不爽。这种方法与一般的SDS-PAGE制备电泳的差别主要在电泳结束后对凝胶的处理上。     

促红细胞生成素可特异性地作用于大鼠睾丸间质细胞

近来的证据表明,一些生长因子如表皮生长因子(EGF)、胰岛素生长因子-1(IGF-I)、转化生长因子(TGF)、纤维母细胞生长因子(FGF)和胰岛素与睾丸功能的调节有关。促红细胞生成素,一种分子量34akD的糖蛋白类激素,是正常红细胞生成的重要生长因子。研究表明,促     

用PCR和SDS-PAGE两种方法对转基因大豆的检测

采用PCR和SDS-PAGE电泳两种方法对转基因大豆(美国)和非转基因大豆(国内3个不同样品)进行了检测．结果显示：转基因大豆可以检测出195bp的花椰菜花叶病毒启动子(CaMV35S)序列片段和320bp的抗草甘膦基因(EPSPS)片段;SDS-PAGE蛋白质电泳中有一约40kDa的蛋白带出现;而非转基因的3个国内大豆品种中均没有CaMV35S启动子序列片段和抗草甘膦基因片段,SDS-PAGE蛋白质电泳检测也没有发现转基因大豆中存在的40kDa的蛋白带．     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的纯化和性质

将人胎盘组织粗匀浆经105000×g超速离心后,用S-已基谷胱甘肽-琼脂糖-6B亲和层析一步纯化法获得电泳纯的人胎盘GST(简称GST-π)。其比活性较粗匀浆高194.7倍,回收率为50％。再经DE_(52)交换柱进一步纯化,用KCl浓度梯度洗脱后为单一锐峰,等电聚集电泳呈一条带,等电点(pI)为4.60。GST-π经TSKgel-G3000SW柱高效液相层析,也为单一对称锐峰,测得其分子量为45.2kD;在SDS-PAGE电泳也为单一区带,测得其亚基单位的分子量为22.5kD。GST-π氨基酸组成分析可检出十六种氨基酸,其中以谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸及甘氨酸含量较高。 GST-π酶动力学研究证明GST-π以GST和CDNB为底物时km值分别为0.16mmol/L和0.55mmol/L,经测定表明,GST-π的最适作用pH值为7.5,在pH6.5—9的范围内较为稳定,体外GST-π在温度超过25℃对容易失活。以GST-π为抗原,得到兔抗人GST-π抗血清,其效价为1:32,与人肝GSTs不发生免疫交叉反应。     

小伞山羊草高分子量麦谷蛋白亚基及其基因的鉴定

运用SDS-PAGE和分子克隆技术,对小伞山羊草(Aegilops umbellulata,UU, 2n = 2x = 14)的高分子量麦谷蛋白亚基(1Ux, 1Uy)及其编码基因进行了鉴定.SDS-PAGE分析表明小伞山羊草不同基因型中的1Ux的电泳迁移率接近或慢于普通小麦1Dx2.2亚基的电泳迁移率,1Uy亚基的电泳迁移率一般接近或慢于普通小麦的1Dy类亚基.采用PCR扩增技术获得了1Ux和1Uy亚基编码基因的全长编码区,并对一个1Uy基因的全长编码区进行了全序列测定.对推导的氨基酸序列进行比较发现1Ux和1Uy亚基具有与来自于其他物种的高分子量麦谷蛋白亚基一致的一级结构,聚类分析显示1Ux和1Uy亚基与D基因组编码的高分子量麦谷蛋白亚基在起源和进化上具有较高的相似性.     

响应面法优化氧化胁迫提高透明质酸分子量

本文研究了氧化剂NaClO胁迫培养兽疫链球菌Streptococcuszooepidemicus对透明质酸(HA)分子量的影响。运用响应面分析法优化发酵工艺条件,在单因素实验基础上,采用中心复合法研究了NaClO的加入时间和加入浓度对HA分子量的影响。利用Mintab 16软件分析确定最佳提取工艺,根据实际条件,得到HA最佳的发酵工艺参数为:NaClO加入时间7 h,NaClO加入浓度为0.415 mL/L。HA分子量由178万Da提高到219万Da。