人羊膜来源干细胞的生物学特性及应用潜力

干细胞移植是一种有潜力的替代治疗方案,虽然大量实验模型研究已经证实了干细胞移植能够修复受损或退化的组织并恢复其功能,但是在实际治疗中仍面临诸多困难,如免疫排斥、伦理障碍以及致瘤性等。围产期干细胞可以解决干细胞治疗所面临的问题,被认为是潜在的可靠干细胞来源。与其他干细胞相比,人羊膜来源干细胞(human amniotic stem cells, hAMSCs)具有显著优势。动物实验发现,hAMSCs具有高分化潜能以及免疫调节活性,在妇科疾病、神经系统疾病、肾脏疾病、肺部疾病、皮肤疾病、糖尿病、癌症等多种疾病的治疗中表现出了巨大潜力。随着科学的进步以及临床的迫切需求,hAMSCs的临床应用也逐渐突破了传统治疗的局限性。综述hAMSCs生物学研究进展及应用潜力,以期为hAMSCs的实验研究和临床应用提供理论依据。     

抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的:研究抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,评价其作用为导向治疗药物的临床应用价值.方法:将体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为hdsFv-hEDN治疗组和对照组,分别给予尾静脉注射hdsFv-hEDN和生理盐水,1次/日,共2周.比较各组裸鼠皮下移植瘤生长速度、肿瘤体积和重量,并计算肿瘤的抑制率.取各组裸鼠肿瘤组织,心,肺,肝,肾组织HE染色,光学显微镜下观察.结果:抗肝癌hdsFv-hEDN治疗组裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用显著,肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积从42.62±0.57 mm3增加到74.28±2.59 mm3、瘤重为155.82±14.43 mg,而对照组肿瘤体积从41.94±0.91 mm3增加到127.42±4.81 mm3、瘤重为283.28±15.21 mg,两组比较差异非常显著.肿瘤体积抑瘤率和瘤重抑瘤率分别达到41.59±0.02%和45.51±0.09%.组织学观察抗肝癌hdsFv-hEDN组肿瘤组织出现大片坏死,凋亡明显增加,心、肝、肺、肾等重要器官未见明显异常.结论:抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长具有良好的抑制作用.     

感染HCMV的U251干细胞裸鼠大脑移植瘤模型的建立

研究人巨细胞病毒(HCMV)感染的U251干细胞(GSC_S)裸鼠颅内成瘤情况。用单克隆培养法从U251细胞系中分离出GSC_S,采用流式细胞仪检测分离出的GSC_S中CD133的表达,感染HCMV病毒,制备细胞密度为1×10~7个/mL的GSC_S悬液。取20只SPF级BALB/c裸鼠腹部麻醉,固定在立体定位仪上,在裸鼠颅脑钻一小孔,将3μL干细胞悬液缓慢接种于裸鼠颅内,随机分为HCMV感染组和未感染HCMV组。观察HCMV对肿瘤生长及裸鼠存活情况,处死濒死裸鼠取脑组织做免疫组化检测HCMV感染组胶质瘤内IE蛋白是否持续表达及HCMV感染对胶质瘤干细胞分化为血管的影响。结果显示,经单克隆法分选出的GSC_S在无血清培养基中成球生长;经流式细胞仪检测,分离出的GSC_S中CD133比例为98.00%;裸鼠脑内出现膨胀性生长的肿瘤;HCMV感染组肿瘤组织中检测到IE高表达,HCMV感染可促进CD133阳性胶质瘤干细胞分化为CD34阳性血管内皮细胞。以上结果表明,HCMV的IE蛋白能在通过此方法建立的HCMV阳性移植瘤中持续表达,且HCMV能促进GSC_S分化为血管内皮细胞。     

G6PD缺陷抑制人黑色素瘤细胞裸鼠移植瘤的生长

敲减葡糖6-磷酸脱氢酶(G6PD)表达的人黑色素瘤A375细胞(A375-G6PDΔ) 呈现生长增殖抑制和凋亡率升高. 为明确G6PD缺陷对裸鼠体内成瘤的影响及其可能机制,用A375-WT与A375-G6PDΔ细胞制作裸鼠荷瘤模型,观察体内瘤体生长,real-time PCR、免疫组织化学染色与紫外分光光度法分别检测瘤体组织G6PD mRNA、G6PD蛋白及酶活性,Western 印迹分析凋亡相关蛋白,分光光度法测定NADPH和GSH/GSSG水平. 结果显示,A375-G6PDΔ细胞注射组的裸鼠成瘤时间延长,瘤体生长明显减慢,瘤体的体积与质量显著低于A375 WT细胞注射组（P <0.01）;与A375-WT细胞注射组相比,A375 G6PDΔ细胞注射组的裸鼠瘤体组织中G6PD mRNA表达、G6PD阳性细胞数与G6PD活性分别降低了87.10%、77.20%与75.77%（P<0.01）,G6PD、p53和Bcl-2的表达分别降低了67.92%、65.54%和62.32%（P<0.01）,Fas升高了86.38%（P<0.01）,NADPH和GSH/GSSG分别降低了74.37%和86.02%（P<0.01）. 结果提示,G6PD缺陷可能通过减少核酸等合成的原料、改变细胞内氧化还原状态及凋亡相关蛋白表达抑制裸鼠瘤体生长与增殖,这为黑色素瘤发生和治疗研究提供了新的线索.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型转化人胚肺细胞在裸鼠体内成瘤实验

对三系转化的人胚肺细胞,分别在裸鼠体内进行了成瘤试验。其中两系转化细胞(29—33代)的成瘤率达100％,另一系(47代)为66％。转化细胞诱生的肿瘤生长迅速,局部瘤可循淋巴转移。瘤细胞可在裸鼠体内传代。瘤细胞形态学检查证实为低分化癌。该细胞带有HSV抗原。     

人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的初步建立不同浓度下制备人胃癌细胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤模型,观察其生物学特性。方法培养人胃癌细胞系BGC-823细胞,并分别以四个浓度皮下注射于裸鼠腋下每只0.2 mL。根据BGC-823细胞注射浓度将40只裸鼠随机分为四组：组一5×107个活细胞/mL（n=10）;组二1×107个活细胞/mL（n=10）;组三1×106个活细胞/mL（n=10）;组四1×105个活细胞/mL（n=10）。观察各组裸鼠摄食、活动情况、精神状态、死亡率、成瘤时间、成瘤率、肿瘤生长情况,采用免疫组化法检测肿瘤微血管密度。结果各组裸鼠摄食、精神情况正常,无死亡现象。除组四1×105个活细胞/mL浓度组成瘤率为0%外,其余各组成瘤率均为100%,瘤体出现时间在3～7 d,肿瘤血管密度MVD平均为：（123.26±31.57）个/mm2。结论初步建立了人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型及建立此细胞系模型的最低浓度。为胃癌的进一步研究奠定了基础。     

转染hTERT基因的大鼠神经干细胞生物学特性研究

目的:旨在研究hTERT基因所表达的蛋白对NSCs生物学特性的影响.方法:通过脂质体转染法将构建的重组质粒pEGFP-N1-hTERT转染到大鼠胎儿NSCs中,对转染的NSCs进行体外诱导分化试验、裸鼠致瘤性试验、RT-PCR、Western blot和流式细胞仪分析.结果:转染的NSCs在体外培养中仍具有干细胞的生长特性和多潜能性、无致瘤性,转染重组质粒的NSCs中,存在hTERT基因mRNA的转录产物和融合蛋白hTERT-GFP的表达.结论hTERT基因对神经干细胞端粒酶活性有上调作用,可促进NSCs的体外增殖和永生化趋势.     

硝酸甘油对胰腺癌皮下成瘤的抑制作用及对HIF-1α与P-gp,GST-π的表达影响

目的:探讨一氧化氮供体药物硝酸甘油对对裸鼠胰腺癌皮下成瘤的抑制作用及对瘤体组织中低氧诱导因子1α(hypoxia induced factor 1α,HIF-1α),P糖蛋白(P-glucoprotein,P-gP)和谷胱甘肽S转移酶-π(Glutathione S-transferase pi,GST-π)的表达影响.方法:40只6-8周的18-22g的BALB/c裸鼠双侧腹股沟皮下注射胰腺癌PANC-1细胞成瘤,瘤体超过150mm3后随机分组,干预组用硝酸甘油帖剂干预,对照组贴安慰剂,并分别绘制生长曲线.采用免疫组织化学方法检测成瘤裸鼠中瘤体组织中HIF-1α、P-gP和GST-π的表达.结果:32例裸鼠成瘤,成瘤率80%,干预28天后,干预组和对照组的瘤体大小分别为1550.4±148.6mm3和750.6±71.2mm3.16只对照组瘤体组织中HIF-1α阳性表达12例(75%),P-gp阳性表达10例(62.5%),GsT-π阳性表达8例(50%).在16例干预组裸鼠瘤体组织中HIF-1α、P-gP、GST-π阳性表达分别是11例(68.8%),8例(50%),7例(43.8%).结论:特定剂量硝酸甘油对裸鼠皮下成瘤有明显抑制作用,且对HIF-1α及P-gp、GsT-π的表达也有一定的抑制作用.     

Sec23a基因对人乳腺癌类肿瘤干细胞的干性抑制作用研究

该文使用新型悬浮细胞连续培养法从人乳腺癌细胞MDA-MB-435中分离出类肿瘤干细胞株(MDA-435-spheroid enrichment,MDA-435-SE),并通过流式细胞术检测细胞表面标志物以及裸鼠皮下成瘤实验,对MDA-435-SE细胞的类肿瘤干细胞特性进行了验证。然后对MDA-435-SE细胞进行慢病毒感染,建立了稳定敲低Sec23a基因表达的细胞株MDA-435-SE-sh Sec23a和阴性对照细胞株MDA-435-SE-LV3NC,通过Cell Counting Kit-8增殖实验、96孔板单克隆成球实验和裸鼠皮下成瘤实验探索Sec23a基因对乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的干性调控作用。在乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE中敲低Sec23a基因后,细胞的增殖曲线和倍增时间并没有明显改变,但细胞的体外成球直径和单细胞克隆效率均显著增强。动物实验表明,Sec23a基因的敲低可以显著提高乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的体内成瘤能力。该研究使用新型悬浮细胞连续培养的方法获得来源于人乳腺癌的类肿瘤干细胞株,并使用体内和体外干性相关实验验证了敲低Sec23a基因后,可以显著提高乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的干性,对肿瘤干细胞的研究具有重要的参考意义。     

茶多酚抑制肺鳞癌细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探索茶多酚对肺鳞癌细胞的抑制效应及相关机制.方法:以肺鳞癌PC10为研究对象,进行裸鼠成瘤实验.观察茶多酚对裸鼠成瘤的影响.应用免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关Bc12和Caspas3和增殖相关蛋白PCNA的表达,应用TUNNEL法检测细胞凋亡.结果:茶多酚可抑制裸鼠移植瘤的生长.茶多酚可促进促凋亡蛋白caspase3表达并抑制抑凋亡蛋白Bc12表达,并抑制增殖细胞核抗原的表达.TUNNEL实验结果提示茶多酚可促进PC10细胞凋亡.结论:茶多酚可抑制肺鳞癌移植瘤生长,与促进癌细胞凋亡和抑制细胞增殖有关.