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为利用patatin class-I启动子的块茎表达专一性以达到马苓薯的目的,利用PCR技术从马铃薯总DNA中扩增出Pataitn class-I启动子及信号肽基因,并将其克隆;序列分析发现该基因片段与已发表cDNA相应片段约94%同源。 相似文献
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应用PCR技术从破伤风梭状芽孢杆菌DNA中扩增出1.4kb DNA基因,将其克隆到pCU18质粒中,经测序证明该DNA片段为破伤风片段C的基因,并将此基因片段亚克隆到时pGEX-45-2,构建成表达质粒pGEX-TC,在E.coli中进行表达。 相似文献
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PCR——四步两段扩增法分离人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因 总被引:2,自引:0,他引:2
引物是决定PCR结果的关键,本实验中,引物Ⅰ,Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5′端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列,所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对,采用标准的PCR方法时不能产生理想结果,经采用PCR-四步两段扩增法从人胎盘cDNA文库中分离得到了-484bp的DNA片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该DNA片段为hbFGF基因。 相似文献
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精氨酸加压素(AVP)C端片段AVP4-8,具有增强记忆的功能,它在大鼠脑内引发一系列的生理和生化变化。采用差示PCR(DD-PCR)技术,寻找注射AVP4-8前后在大鼠海马中差异表达的基因。抽提总RNA,以反转录产生的cDNA为模板进行PCR,经过9组引物组合,获得了十几个差异片段,挑选其中差异最大的片段ddl进行克隆,测序,并与Genedank等数据进行同源比较 有找到同源基因,可能是个新基因 相似文献
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利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
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以分离提取的HeLa细胞总RNA为模板,通过RT-PCR反应扩增得到了1017bp的人可溶性白细胞介素6受体(sIL-6R)cDNA片段,将扩增片段克隆到pUC19质粒中进行序列测定。结果证明该片的序列与文献报道的sIL-6RcDNA的序列完全一致,将sIL-6RcDNA与链霉素信号肽melCl的编码序列融合后得到的融合基因mel/sIL-6R克隆到链霉菌质粒pLJ459中,构建成重组表达质粒pL 相似文献
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人血小板生成素(hTPO)的cDNA克隆,序列测定及其在COS—7细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本文利用反转录PCR技术从人胎肝mRNA中分别扩增出hTPO N-端和C-端两个cDNA片段,然后经酶切分别连接重组到质粒pUC19中进行序列分析,在确证其序列与国外文献报道完全一致的基础上,酶切、回收、连接其N-端、C端cDNA,并以此为模板,用PCR法扩增出全长TPOcDNA片段,并将其重组到穿梭质粒pSVK3中,在COS-7中进行了瞬时表达并检测出表达产物的活性 相似文献
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为利用Patatinclass-Ⅰ启动子的块茎表达专一性以达到改良马铃薯的目的,利用PCR技术从马铃薯总DNA中扩增出Patatinclass-Ⅰ启动子及信号肽基因,并将其克隆:序列分析发现该基因片段与已发表的CNDA相应片段约94%同源。 相似文献
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17个新的C2H2型锌指基因片段的分离与克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
按照C2H2型锌指基因保守结构域的DNA序列设计一对简并引物,以人基因组DNA为模板进行PCR同源扩增,将由此获得的锌指基因片段为探针,从人胎肾、骨骼肌、骨骼组织的cDNA分子库中筛选到22个C2H2型锌指蛋白cDNA片段,经国际NCBI数据库查询检索,其中17个为新的锌指基因片段。对从胎肾cDNA分子库中分离到的K3-4和K5-12克隆进行了表达谱分析,发现K3-4在肾脏中的表达量明显高于其他几 相似文献
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从端粒酶活性呈性阳的水生细胞株人肺SCP-A-1中分离了总RNA,以此为模板,结合RT-PCR技术和长模板PCR技术,用hTERT基因特异性引物扩增到一长约2.2kb的cDNA片段。将该片纯化后克隆到通用测序本T-easy vector上得到重组质粒。用测引物SP6和T7对该片段进行部分双向测序。经序列分析和同源比较推测该片段包含了hTERT基因的第3内含子。该结果提示了RT-PCR技术和长模板P 相似文献
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扩增大段靶DNA的PCR方法 总被引:3,自引:0,他引:3
扩增大段靶DNA的PCR方法陈尚武,王章(中山大学生命科学学院,广州)PCR和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Taq(Thermusaquaticus)DNA聚合酶的应用以及PCR技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使DNA片段的PCR扩增成... 相似文献
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采用PCR及RT-PCR方法结合核酸分子杂交技术,首镒确定了与Grp94cDNA2231-2500碱基片段对应的Grp94基因序列上有内含子。含有内含子的扩增片段长约708bp。对三种癌细胞系进行了PCR和RT-PCR反应,电泳结果显示存在差异。 相似文献
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大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶基因的克隆与真核表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
根据Genbank中大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)基因的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,以大肠杆菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,并将扩增产物定向连接到克隆、测序及真核表达载体PCDNA3中,进行酶切鉴定、测序及序列分析。结果表明PCR扩增出741bp大小的片段,通过酶切和序列分析证明含完整的PNP基因序列且基因插入方向正确,此序列与文献报道的PNP基因的同源性为99.7%。说明克隆的PNP基因与文献报道的基本一致,pcDNA3-PNP的构建成功为今后用其进行基因转染来研究PNP/Mep-dR自杀基因系统在肿瘤基因治疗中的应用打下了基础。 相似文献
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小鼠cAMP应答元件结合蛋白基因在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
采用PCR技术,删除了小鼠CREBcDNA5‘端和3’端非编码序列,并引入便于基因操作的酶切位点。经30次循环的扩增,得到改造后的CREBcDNA,全和工071bp。亚克隆后,对此扩增片段进行了限制性内切酶物理图谱分析,测定了DNA序列,并以其为插入物,构建了pBV220-PcR CREB重组表达载体Western印迹法分析证明,在大肠杆菌中的表达获得成功。 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKSDNA的多克隆位点及其侧翼序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的EcoRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终止法/PCR扩增/银染色,从片段两端测定了全部919bp序列,这种ddNTP/PCR/银染测序法简化了操作,大大缩短了测序模板的制备时间,易于实现自动化操作。 相似文献
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用PCR方法从基因组DNA中扩增人睫状神经营养因子基因杜方勇,甘思德,范明,刘淑红(北京军事医学科学院基础医学研究所100850)PCR方法具有操作方便、对模板要求不高、能快速高效地从原材料中得到微克水平的基因片段等优点,但用它从基因组DNA扩增长片... 相似文献
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RACE: cDNA末端快速扩增技术进展 总被引:2,自引:0,他引:2
RACE:cDNA末端快速扩增技术进展明洪黄秉仁中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所国家分子生物学重点实验室北京100005基因表达水平和模式的变化驱动着生物体内主要的生物学过程。分离和克隆基因是研究基因结构、功能以及表达的基础。以往建立和筛选cDNA和DNA文库来分离克隆目的基因的经典方法繁琐而且工作量大。PCR技术的出现极大地提高了分离克隆目的基因的效率。反向PCR、锅... 相似文献
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马立克氏病病毒(MDV)814株B抗原基因的克隆及部分序列分析 总被引:6,自引:1,他引:6
提取感染鸡胚成纤维细胞MDV-I弱毒株814病毒DNA为模板,根据RBIB株gB基因5′及3′两端核苷酸离列设计引物,利用PCR技术扩增了我国MDV-I弱毒株814gB基因(2.9kb)将扩增片段平末端克隆到载体pBluescriptSK中EcoRV位点,经BamHI,HindIII酶切鉴定得到不同插入方向的重组质粒。构建圹增片段的酶切图谱及部分序列分析证明与RBIB株gB基因无差异,显示了极高的 相似文献