我国葡萄根癌农杆菌Ti质粒的特征

以窄宿主葡萄农杆菌Ag162Ti质粒的T-DNA区tmr、tmsl和ocs基因座位以及T_A-DNA和T_B-DNA片段为探针,对12株我国分离的不同生物型、质粒类型和寄主范围的葡萄根癌农杆菌的引质粒转移DNA(T-DNA)进行Southern杂交分析。在9株生物3型octoplne Ti质粒菌株中,与上述探针均同源。其中窄宿主葡萄根癌农杆菌菌株杂交片段彼此较一致。广宿主葡萄根癌农杆菌菌株的杂交片段彼此差异较大。1株无致瘤能力的生物1型菌株与5个探针均不杂交。1株生物3型nopaline Ti质粒菌株及1株诱导冠瘿瘤中只合成精氨酸的菌株,杂交带的变化也大。由此可见葡萄农杆菌在生物进化过程中其转移DNA呈多态性,成为农杆菌中特殊类群。本分析对葡萄根癌农杆菌致病菌株的鉴定亦有帮助。     

植物基因工程中Ti质粒的研究与应用进展

Ti质粒是双子叶植物转化的普通而有效的载体,近年来又广泛应用于单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、小麦等。该方法以转基因低拷贝、遗传稳定及能够转化大片段的DNA等优点,又受到人们的极大关注。本文对Ti质粒在植物基因工程转化的机理、方法,及应用等方面的新进展和方向作一评述,并提出有价值的研究方向。     

发根农杆菌Ri质粒及其在植物科学中的应用

阐述了发根农杆菌的性质及Ri质粒的结构和功能,介绍了毛状根的诱导及其鉴定方法,并对Ri质粒在植物基因工程、植物次生代谢产物生产、植物品种改良和植物栽培等方面的应用进行了综述。     

海南快生根瘤菌蛋白,多位点酶及质粒电泳

在本室以前的研究中,海南快生根瘤菌具有分类上的多型性。其一部分归于已知各根瘤菌种,另有一部分菌株构成独立的表观群及相应的ＤＮＡ同源群（亚群Ⅱ和Ⅳ）。本文采用不同的电泳方法,分析了海南快生根瘤菌和已知根瘤菌种的代表共５５个菌株的全细胞蛋白、酯酶、过氧化物酶及质粒组成。结果表明：同一亚群的菌株间有相似的蛋白图谱,种群之间有较明显的差异,根瘤菌中普遍存在酯酶,酶带的数量和迁移率具有菌株专一性,更适合于苗株的鉴别。过氧化物酶只在部分菌株中观察到,亚群Ⅱ与亚群Ⅳ的菌株均显示一条酶带,但二者之间的相对迁移率有明显差别。质粒电泳中,大多数海南快生菌中存在着大质粒,分子量范围是２０－４０００Ｋｂ,同一亚群中的不同菌株间具有一定相似性,这些结果为海南快生型根瘤菌的分类提供了一些辅助证据。     

海南快生根瘤菌蛋白、多位点酶及质粒电泳

在本室以前的研究中,海南快生根瘤菌具有分类上的多型性。其一部分归于已知各根瘤菌种,另有一部分菌株构成独立的表观群及相应的ＤＮＡ同源群（亚群Ⅱ和Ⅳ）。本文采用不同的电泳方法,分析了海南快生根瘤菌和已知根瘤菌种的代表共５５个菌株的全细胞蛋白、酯酶、过氧化物酶及质粒组成。结果表明：同一亚群的菌株间有相似的蛋白图谱,种群之间有较明显的差异,根瘤菌中普遍存在酯酶,酶带的数量和迁移率具有菌株专一性,更适合于苗株的鉴别。过氧化物酶只在部分菌株中观察到,亚群Ⅱ与亚群Ⅳ的菌株均显示一条酶带,但二者之间的相对迁移率有明显差别     

Ri质粒诱导的植物发根培养系及其应用

阐述了具Ri质粒的发根农杆菌的生物学特性,介绍了毛状根的诱导、筛选及增殖培养的具体方法,提出了农杆菌转化植物细胞的影响因素,对国内外利用植物发根培养系进行次生代谢物质生产方面的研究进行了综述,并对Ri质粒诱导的发根培养系的应用作了展望。     

发根农杆菌Ri质粒及其应用

土壤微生物(Agrobacterium)的作用引起人们的极大兴趣。Agrobacterium与根瘤菌(Rhizobium)接近,同属于根瘤菌科,为革兰氏阴性菌。同属内已知有引起不同病征的许多种类。     

发根农杆菌Ri质粒在药用植物生物工程中的应用

发根农杆菌(Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ)与根癌农杆菌(Ａ.ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ)属于根瘤菌科,均为革兰氏阴性菌[1]。它们在侵染植物后引起的症状不同,含有Ｔｉ质粒的根癌农杆菌在侵染植物后形成冠瘿瘤(ｃｒｏｗｎｇａｌｌ),而含有Ｒｉ质粒的发根农杆菌表现与其不同,它在感染植物后在植物的伤口部位诱发产生毛状根(ｈａｉｒｙｒｏｏｔ)。由发根农杆菌侵染植物诱导产生的毛状根具有生长快、分枝多、根毛多等特点。发根农杆菌Ｒｉ质粒与根癌农杆菌Ｔｉ质粒结构相似,都具有高效率转移的Ｔ-ＤＮＡ区和致病的Ｖｉｒ区…     

费氏中华根瘤菌内源质粒的不相容性及其在质粒消除中的应用

用Tn5 Mob sacB转座子标记费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobiumfredii)HN0 1和WWG1 8的内源质粒 ;在含有 1 0 %蔗糖的TY培养基上进行了质粒消除试验以鉴定其功能。将HN0 1的标记共生质粒pSymHN0 1b转入费氏中华根瘤菌WWG1 8SR和C361SR中 ,质粒快速检测、质粒消除和植物盆栽结瘤试验结果证明 :HN0 1的共生质粒与WWG1 8SR的共生质粒具有不相容性 ,但能与其非共生质粒相容。相反 ,HN0 1的共生质粒可与C361SR的共生质粒相容 ,但与其中一个非共生质粒具有不相容性。利用费氏中华根瘤菌不同菌株质粒间的不相容性 ,本研究成功地消除了WWG1 8SR的共生质粒和C361SR的一个非共生质粒。     

Ri质粒介导的毛状根体系建立及其在植物次生代谢产物合成中的研究进展

发根农杆菌Ri质粒可诱导植物产生毛状根体系,该体系具有遗传性状稳定且增殖速度快的特点,可用于药用植物次生代谢产物的生产研究,为利用生物反应器技术进行药用植物有效成分工业化水平的发酵培养开辟了新途径。本文主要综述了发根农杆菌Ri质粒介导的植物毛状根体系遗传转化机理,并对毛状根体系在药用植物次生代谢产物生产中的研究现状进行了深入分析,为从基因水平上调控植物次生代谢产物的合成提供新思路。     

棒状杆菌中质粒DNA的快速检测方法

在棒状杆菌质粒DNA快速检测中,比较了三种方法:强碱法、快裂法和我们设计的酶法。用强碱法抽提的质粒带很淡,快裂法其次,且不能区别两个分子量相近的质粒;而用酶法则显带清晰,且能很好地区分两个大小相近的质粒,分辨率高,认为在棒状杆菌质粒快速检测中是一种很好的方法。     

两种质粒中gus基因在植物细胞和根癌农杆菌中的表达特性研究

以含有基因转化操作过程中常用的两种质粒载体pBI121和pCAMBIA2301的根癌农杆菌EHA105为材料,分别转化甜瓜子叶,应用组织化学方法检测了甜瓜子叶和子叶培养后的愈伤组织及根癌农杆菌菌液的瞬时转化效果,研究了两种不同的质粒载体上所含的gus基因在根癌农杆菌中和植物细胞中的表达特性.结果表明,不同质粒载体上所含的gus基因的表达特性不同,质粒载体pBI121上所含的gus基因既能在植物细胞中能表达,也能在根癌农杆菌细胞中表达,而质粒载体pCAMBIA2301上所含的gus基因能在植物细胞中表达,但是不能在根癌农杆菌细胞中表达.     

根癌农杆菌在丝状真菌转化中的应用

原生质体转化法是丝状真菌转化的传统方法,但其过程繁琐且转化效率低。根癌农杆菌介导的转化方法原本是进行植物遗传转化的标准方法,但近年来发现该方法还可用于丝状真菌的转化。根癌农杆菌介导的丝状真菌转化具有操作简便、转化效率高、重复性好等优点,从而可以解决丝状真菌转化难的问题。在本文中,就其转化机制、特点和转化条件优化等方面的最新研究进展进行了综述。     

农杆菌介导法在橡胶树遗传转化中的应用与展望

综述农杆菌介导法在巴西橡胶树遗传转化中的应用进展,分析影响农杆菌转化的关键因素,如植物基因型与外植体、菌株与载体类型、菌液浓度与侵染时间、vir诱导物、筛选剂与抑菌剂、培养基的组成和附加成分等,并对提高巴西橡胶树转化效率的策略进行探讨。     

甘露醇在根癌农杆菌转化石斛兰中的作用

以淡绿色细小且致密的石斛兰原球茎为材料,研究甘露醇在根癌农杆菌转化石斛兰中的作用.结果表明:原球茎侵染前经过附加0.3 mol/L甘露醇的高渗固体培养基中进行前处理6 h,GUS瞬时表达率为60.00%,而对照的GUS瞬时表达率为0.0.甘露醇高渗处理对石斛兰根癌农杆菌的转化具有提高转化效率的作用.     

一种简易的分离根癌土壤杆菌质粒的方法（简报）

土壤杆菌属的一些菌含有分子量达100兆道尔顿的大质粒。根癌土壤杆菌的Ti质粒是潜在的植物遗传工程载体。目前制备这类大质粒主要用Currier＆Nester[1]和van Larebeke ＆ Schell[2]的方法。一般认为土壤杆菌破壁困难,需用溶菌酶、蛋白酶。虽然Currier＆Nester[1]把DNA变性后以酚和氯仿-异戊醇清除了一些染色质,但残存染色质仍多。两法最后都靠密度梯度离心法获得纯质粒。这样,就限制了制备Ti质粒的规模。我们采用Hensen＆Olsen[3]4 ％SDS和热冲击方法破壁,在控制温菌量和破壁液比例的条件下,不用酶也能破壁。然后,用酚和氯仿-异戊醇抽提去蛋白;不经 DNA变性,用Zasloff等人的酸酚法去染色质DNA; 再用Humphreys等人的方法,以PGA6000沉淀浓缩质粒DNA.经琼脂糖电泳鉴定,得单一DNA带,无染色质扩散带。这就为大规模制备根癌土壤杆菌Ti质粒提供了可能。目前正在进一步工作。     

我国葡萄根癌土壤杆菌的生化型与质粒类型的初步研究

从我国内蒙古、辽宁、吉林、北京、山东等地采集的49份葡萄冠瘿标本中,分离到根痛土壤杆菌(Agrobacterium tumefactens)67株,经鉴定有生化1型21株,生化II型4株,生化III型42株。葡萄根癌土壤杆菌中以生化ill型占优势。生化111型有97％、生化I型有24％的菌株能使葡萄或向日葵致瘤。鉴定了2S株生化l型和生化[I]型菌株所致冠瘿中的opines,其中有2株生化III型菌株合成nopaline,3株生化III型菌株合成精氨酸,其余菌株合成octopine。     

改良质粒快提法及其在酶切检查中的应用

基因重组后,从转化的细菌中快速提取小量质粒作限制性酶切检查,以筛选出阳性克隆,现已或为分子生物学实验的一项常用技术,至今已建立了多种方法。目前常用的为碱法和煮沸法。虽然现今所用的最新方法比传统的方法大大简化,但仍然相当耗时,即使是一个熟练的技术人员,提取获得18—24个样品仍需约2.5—3小时,这还不包括酶切、电泳等步骤。此文介绍我们改良的快提法,此法可在10分钟之内迅速有效地提取质粒,结合改进随后的酶切、电泳等过程,即可在三小时内筛选18个样品。     

影响根癌农杆菌转化的因素及其在单子叶作物上的应用

在植物转基因方法中,根癌农杆菌介导的遗传转化应用最为广泛,进一步提高其转化频率并扩大其宿主范围到禾谷类作物是人们所关注的问题。有多种因素影响根癌农杆菌的转化频率,包括植物的受伤反应、细菌的吸附、致病基因的诱导、植物细胞ＤＮＡ合成及修复的活力、外植体的状态等。最近的研究结果证明在适宜的条件下,根癌农杆菌还是可以有效地转化禾谷类作物。本文试就这两方面的研究进展作一论述。