鸡胚肝凝集素受体的放射自显影和扫描电镜观察

近些年来用标记过的外源凝集素作探针以研究细胞膜的结构和功能已取得很大进展。本文首次用~(125)I标记鸡胚肝凝集素,再以~(125)I-凝集素亲和标记鸡胚肝细胞。标记的鸡胚肝细胞经放射自显影(ARG),可用扫描电镜(SEM)对细胞表面受体的位点进行直接观察,以研究鸡胚肝凝集素受体的分布特征。     

新生大鼠辣椒素处理后脊髓内阿片受体的变化

本实验用受体放射自显影方法,研究了新生大鼠辣椒素皮下注射,成年后脊髓内３Ｈ－埃托菲（３Ｈ－ｅｔｏｒｐｈｉｎｅ）结合位点数的变化。发现新生鼠辣椒素处理可以引起脊髓后角浅层及中央管周围’Ｈ－ｅｔｏｒｐｈｉｎｅ结合位点明显减,其中Ⅰ、Ⅱ层自显影银粒数减少３６％左右。Ⅲ层减少２０％,中央管周围减少１１％。而前角及背外测束３Ｈ－ｅｔｏｒｐｈｉｎｅ结合位点数无显著性差异。结果表明脊髓内初级感觉传入细纤维上有阿片受体分布。本研究为探明阿片类物质在脊髓水平的痛觉调控机制提供一定的形态学依据。     

放射自显影技术应用的现状及未来趋势

放射自显影通常指结合了放射标记探针的分子或组织通过感光材料（如X光胶片）曝光、显影、定影获得金属银颗粒图像的实验技术，它是定性、定量分析与探针结合的靶分子含量及其在组织中分布的传统手段，在生物学基础研究以及临床前新药研究等方面有着广泛的应用。近年来磷屏成像技术的普及显著缩短了放射自显影技术的实验周期，并拓展了在短半衰期正电子放射核素中的应用。本文重点介绍放射自显影技术应用中尚不能全面被非放射性替代技术取代的一些实验工作进展，主要包括某些酶活性的测定、磷酸化位点分析、低丰度核酸检测以及与放射性探针特异结合的靶点（如受体等）在组织中的分布等实验技术工作。适应当前应用趋势的变化对放射示踪共用技术平台的建设，对帮助技术支撑人员提供更好的、具有针对性的技术性服务具有一定的指导意义。     

用电镜放射自显影术研究TMV-RNA在烟叶细胞中的复制

在放线菌素D(AMD)抑制细胞RNA合成时,用3H-尿嘧啶核苷标记TMV侵染的和健康的烟草叶片,经固定,包埋,切片,RNA酶处理及放射自显影后,在电镜下观察。结果表明,3H-尿嘧啶核苷向病毒基因组或其复制中间体的掺入主要发生在细胞核内,叶绿体内有少量掺入,线粒体内未发现有掺入。因此认为TMV—RNA的合成主要是在缅胞核内进行的。切片如先经蛋白酶和RNA酶处理,再进行放射自显影,则自显影上的银粒几乎全部消失。从超薄切片后的剩余样品取小样,用酚一SDS法和Serva纤维素柱层析,从TMV侵染的烟叶中分离到了抗RNA酶的’H—ds—RNA。从而推测复制中间体在体内很可能主要是单链的,其复制过程很可能不经过双链复制型(RF)。提取到的’H一‘is—RNA：,可能是提取过程中的人为产物。     

电刺激大鼠尾核头部镇痛的中枢效应——〔~3H〕-2脱氧葡萄糖放射自显影研究

本文利用[~3H]-2脱氧葡萄糖定量放射自显影方法,研究了电刺激大鼠尾核头部镇痛时中枢神经系统有关结构的葡萄糖代谢率变化。结果表明,痛刺激后,皮层躯体感觉Ⅰ,Ⅱ区、扣带回皮质、丘脑束旁核、丘脑中央中核、丘脑腹后核、尾核、外侧缰核、外侧隔核、中缝背核及中脑导水管周围灰质等结等的葡萄糖代谢率均明显升高(P<0.05)。电刺激大鼠尾核头部后,中缝大核及延髓旁巨细胞网状外侧核的葡萄糖代谢率显著升高,中脑导水管周围灰质和中缝背核的葡萄糖代谢率亦有升高趋势。电刺激大鼠尾核头部可部份降低痛刺激引起的有关结构葡萄糖代谢率升高(如皮层躯体感觉Ⅰ、Ⅱ区、扣带回皮质、丘脑束旁核、丘脑中央中核、丘脑腹后核、外侧隔核及外侧缰核等)。上述结果提示,电刺激大鼠尾核头部镇痛时抑制了与痛感觉有关的结构,同时激活了与镇痛有关的结构。中缝大核、中缝背核、中脑导水管周围灰质及延髓旁巨细胞网状外侧核等结构是实现尾核镇痛的重要环节。     

小麦花药培养中小孢子DNA合成的放射自显影研究

用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H－胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2．5天后营养细胞核中有3H－胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是同步进行的。在多细胞花粉形成时逐渐变为不同步,生殖核的DNA合成不活跃,偶而能被标记上,个别合成DNA的生殖细胞形成类胚柄结构,当培养基中蔗糖浓度低（3％）时,培养早期小孢子内核的DNA合成正常进行,3H－胸腺嘧啶核苷比高糖浓度（9％）更易惨入小孢子,但经1－2次分裂后,核不再分裂,细胞壁不形成,所以3％的糖浓度中,多细胞花粉不能形成,主要不是DNA不能复制,而是细胞分裂和细胞壁的形成受阻所致。     

酪氨酸酶活性的微量分析

本文介绍了两种灵敏、精确和较简便的酪氨酸酶活性的微量分析技术。其中之一是[³H]-酪氨酸分析,直接测羟基化的酪氨酸量。根据测得的“总dpm”、“酶样品dpm”和“空白dpm”计算出微量样品中酪氨酸酶的活性。另一种方法是将各个含酶样品通过SDS-PAGE分离和适当处理,放入含多巴的磷酸缓冲液中染色,待深棕色的酶带完全显现后,再经过固定等,直接将凝胶进行光密度扫描,根据各酶带吸收峰的高度即可测出酶活性的相对变化。     

小麦花药培养中小孢子DNA合成的放射自显影研究

用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H－胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2．5天后营养细胞核中有3H－胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是同步进行的。在多细胞花粉形成时逐渐变为不同步,生殖核的DNA合成不活跃,偶而能被标记上,个别合成DNA的生殖细胞形成类胚柄结构,当培养基中蔗糖浓度低（3％）时,培养早期小孢子内核的DNA合成正常进行,3H－胸腺嘧啶核苷比高糖浓度（9％）更易惨入小孢子,但经1－2次分裂后,核不再分裂,细胞壁不形成,所以3％的糖浓度中,多细胞花粉不能形成,主要不是DNA不能复制,而是细胞分裂和细胞壁的形成受阻所致。     

电脱耦联延迟参与κ-阿片受体兴奋引起的心肌保护作用

目的:研究κ-阿片受体兴奋诱导的心肌保护作用是否与其对心肌缺血期间电耦联的影响有关,并探讨这种作用的可能机理。方法:采用雄性SD大鼠心脏Langendorff离体灌流模型。①全心停灌30min,复灌2h,观察不同浓度κ-阿片受体特异激动剂U50,488H(10-7、10-6、3×10-6、和10-5mol/L)及其特异阻断剂nor-BNI(5×10-6mol/L)和线粒体ATP敏感性钾离子通道特异阻断剂5-HD(10-4mol/L)对缺血/复灌心肌的作用。测量指标:以分光光度计在490nm波长下测定氯化三苯基四氯唑(TTC)与活细胞反应的产物formazan含量的方法测定心肌细胞活性、测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量以及心室内压;②全心停灌70min,应用四电极法观察不同浓度U50,488H、nor-BNI和5-HD对缺血期间心肌整体阻抗和电脱耦联参数(电脱耦联时间、平台时间、电脱耦联最大速率和阻抗倍数)的影响。结果:①U50,488H可诱导心肌保护作用,并呈浓度依从性,与对照组比较,表现为for-mazan含量增加,LDH释放减少,心室功能恢复增强;②经较高浓度U50,488H(10-6、3×10-6、和10-5mol/L)预处理后,电脱耦联时间和平台时间均延迟,电脱耦联最大速率降低;③U50,488H在10-7-10-5mol/L范围内对电脱耦联时间的延迟与其对formazan含量增加和LDH释放减少的作用呈线形相关;④U50,488H对formazan含量增加、LDH释放减少和电脱耦联时间和平台时间延迟的作用均可被nor-BNI或5-HD所阻断。结论:κ-阿片受体兴奋对电脱耦联的延迟作用与其诱导的心肌保护作用有关,这种作用受到线粒体ATP敏感性钾离子通道的调节。     

大鼠脑内γ-氨基丁酸对电针镇痛和吗啡镇痛的对抗作用

给200g 左右的大鼠腹腔注射γ-氨基丁酸(GABA)合成和释放抑制剂3-巯基丙酸(3MP)25、20和10mg/kg,可以加强电针和吗啡的镇痛作用。这种加强作用可被 GABA 降解酶抑制剂氨氧乙酸(AOAA)所对抗。腹腔注射 AOAA 25mg/kg 能提高脑内 GABA 含量,同时降低电针和吗啡的镇痛作用,这种降低作用可被 GABA 合成酶抑制剂异烟肼和 GABA 受体阻断剂氯甲基荷包牡丹碱所对抗。这些实验结果表明,脑内 GABA 能系统对于电针和吗啡镇痛具有对抗作用。文中讨论了 GABA 上述作用的可能机理。