安徽虫瘟霉对桃蚜的生物测定与时间-剂量效应分析

用“孢子浴”法将人工培养的安徽虫瘟霉（Ｚｏｐｈｔｈｏｒａａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ）对桃蚜（Ｍｙｚｕｓｐｅｒｓｉ ｃａｅ）接种而进行定量生物测定（１８℃,光周期为Ｌ∶Ｄ１２∶１２）,包括１０个剂量（１．５～１９７．７个分生孢子／ｍｍ２）,每剂量处理蚜虫６４～１２０头,逐日观察记载死亡数至第７ｄ。接种后第３ｄ在高剂量处理中始见少量死蚜,第４～６ｄ为死蚜盛期。所获数据很好地拟合时间 剂量 死亡率模型,由模型参数估计出该菌作用于桃蚜的时间效应随剂量增大而减小,在３７．１～１９７．７个分生孢子／ｍｍ２的剂量范围内ＬＴ５０值为４．５～６．７ｄ;剂量效应在接种后随时间递减,第５～７ｄ的ＬＤ５０分别为８６．８、４３．７和３４．１个分生孢子／ｍｍ２。结果表明,安徽虫瘟霉是一种较为理想的杀蚜微生物,在寄主体内的潜伏期为４～５ｄ。     

安徽虫瘟霉菌株的强毒杀蚜效应与侵染速率*

报道安徽虫瘟霉（Zoophthoraanhuiensis）菌株F97028对挑蚜（Myzuspersicae）的强毒杀蚜活性。以7个孢子剂量（0．4～10．4个孢子／mm2）接种2～3龄若蚜（52～86头／剂量）,连续观察7d所获数据经时间－剂量－死亡率模型模拟分析,接种后第3～7d的LD50分别为34.8、8.7、1.5、0.7和0.4个孢子／mm2。在所用剂量范围内LT50为29～6.0d,随剂量增大而缩短。在接种后不同时段用0.1％百菌清水溶液处理被接种蚜体表面,结果显示,在15～20℃下,在0.7～1．8个孢子／mm2的剂量下接种后2h内的有效侵染率为42～58％,4h内为44％～74％,6h时达90％以上;在69～9．0个孢于／mm2的剂量下接种后1h,有效侵染率为57％～67％,2h内为77％～86％,4h内为78％～90％;高剂量（499～54．8个孢子／mm2）下接种后1h即达90％以上。与虫瘟霉属其它菌种或菌株对蚜虫的毒力比较,F97028菌株的毒力高28～117倍,为罕见的强毒杀蚜菌株。     

安徽虫瘟霉诱发的桃蚜流行病与流行模型

在15℃与100％RH的组合条件下以接种安徽虫瘟霉（Zoophthora anhuiensis)和未接种的桃蚜（Myzus persicae)成蚜按不同比例混合（0：6,1：5,2：4,3：3,4：2,5：1及6：0）建立蚜群,3次重复,考察流行病的发生与发展,结果表明,在带菌蚜50％以上的蚜群中,活蚜的数量增长因高强度的流行病发生而得到有效控制,活蚜数妈终未超过50头／90cm^2,第22天观察结束时与对照（0：6）jah vtk r 656udi /90cm^2相比控蚜效果高达93．24％－100％,在接菌与未接菌比例1：5和2：4的蚜群中,蚜病的发生虽未能充分控制蚜虫的数量增长,但结束时的蚜虫数量均显著低于对照,分别为356头／90cm^2和207头／90cm^2,控蚜效果亦分别达46％和68％,各处理蚜群中病害流行随时间的变化很好地拟合Gompertz模型（r^2=0.97),由此估计出虫瘟霉不同初始菌量在蚜群中的流行速度（R）及最高流行水平（K）,线性回归分析表明,初始侵染体密度确定了R（r^2=0.89)和K（r^2=0.90)估计值的90％变异,充分显示安徽虫瘟霉流行病的发生及流行强度对初始侵染体和寄主密度的依赖性。     

环境因素对安徽虫瘟霉生长发育的影响

安徽虫瘟霉是目前仅发现于我国的重要蚜虫病原真菌,对桃蚜具有明显的自然控制作用。本研究了温度和紫外光对安徽虫瘟等固体培养性状及不同温湿度组合对安徽虫瘟霉分生孢子萌发的影响。     

不同温湿度组合对安微虫瘟霉诱发桃蚜病害的影响

用孢子浴方法,对４２批次桃蚜Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ（３０－６０头／批）接种大剂量（孢子７９－９０个／ｍｍ＾２）安徽虫瘟霉Ｚｏｏｐｈｔｈｏｒａ ａｍｈｕｉｅｎｓｉｓ的分生孢子,在２０℃下保湿２４ｈ后转入不同温度（１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃及自然变温下１．５－１６．６℃和８．５－２０．２℃）和温度（５０％、６５％、８０％、９０％９５％及１００％ＲＨ）的组合条件下观察桃蚜的反应。结果表     

温湿度对安徽虫瘟霉在桃蚜居群中流行的影响

用安徽虫瘟霉(Zoopphthoraanhuiensis)接种桃蚜(Myzuspersicae)无翅成蚜3头和健蚜3头组成新的蚜群若干,在不同温湿组合条件下任其繁殖、发病和传染,以评价温湿度对该菌在蚜群中流行的影响.持续26d观察,在偏低温与各湿度(90～100%RH)的组合中均成功诱发了蚜病流行,其程度受湿度影响较小.在10℃与各湿度组合中,最终感病死亡率为72.9%～98.2%,15℃下为78.7%～94.4%,流行强度极大.而20℃下仅100%RH诱发了高强度流行病,其余湿度下感病死亡率仅为5.1%～12.8%.在25℃,100%RH下死亡率仅27.2%.与所有湿度组合中的对照蚜群相比,10℃下流行病控蚜效果为89.5%～96.9%,15℃下为96.1%～98.2%,20℃下为45.9%～85.7%,25℃下为56.4%～69.7%.逐步回归分析表明,安徽虫瘟霉引发的蚜病流行与温度及其相对湿度和蚜群带菌后天数的互作项密切相关(r2=0.82,a＜0.01),这些变量在很大程度上决定了安徽虫瘟霉是否在蚜群中流行.     

不同温湿度组合对安徽虫瘟霉 诱发桃蚜病害的影响

用孢子浴方法,对42批次桃蚜Myzus persicae（30～60头/批）接种大剂量（孢子79～90个/ mm²）安徽虫瘟霉Zoophthora anhuiensis的分生孢子,在20℃下保湿24 h后转入不同温度（10℃、15℃、20℃、25℃、30℃及自然变温1.5～16.6℃和8.5～20.2℃）和湿度(50%、65%、80%、90%、95%及100% RH)的组合条件下观察桃蚜的反应。结果表明,各组合条件下的桃蚜均能发病死亡,而且累计死亡率的显著差异存在于不同温度（F=7.46, P<0.01)和湿度间（F=12.54, P<0.01）。最适发病的温度为恒温20℃和变温8.5～20.2℃（日均温12.4℃）,死亡率随湿度升高而增大。在10～25℃和100% RH的组合中,温度的变化几乎不影响桃蚜的累计死亡率,但影响发病速率,在10℃、15℃、20℃和25℃下的致死时间LT₅₀值分别为8.4 天、7.1 天 、4.0 天和3.4 天。回归分析表明, 在100% RH下安徽虫瘟霉诱发桃蚜发病的起始温度为1.65℃。在10～15℃及自然变温下,病死蚜尸顺利产孢的湿度为80% RH;而在20～30℃下,蚜尸产孢的湿度为90% RH。在所有温湿组合的蚜尸中未见安徽虫瘟霉的休眠孢子发生。     

安徽虫瘟霉在侵染潜伏期内对桃蚜无翅成蚜生殖力的影响

在8个剂量（0．48－61．15个孢子.mm^-2)下测定安徽虫瘟霉F97029菌株对桃蚜（Myzus persicae (Sulzer))2-3龄若蚜（57－84头／剂量（的毒力,接种后第3－7d的半致死剂量LD50分别为3．09,.88,1.33,1.28,1.26个孢子／mm2,致死中时LT50为2－6d,随剂量增大而缩短,将该菌株按60个孢子.mm^-2的剂量接种桃蚜的无翅成蚜,在10,15,20,25℃下其侵染潜伏期分别为7．2,5．3,4．9,3．9d,温度与潜伏期呈显著负相关（r^2=0.94),在相同梯度温度下,接种成蚜在病害潜伏期内平均产若蚜7．97头,11．20头,11．86头和11．20头,与同期对照相比依次下降56．45％,41．58％,39．98％,49．02％,根据日观察数据建立接种后潜伏期内45．54％（15℃）,43．11％（20℃）,和50．84％（25℃）,内禀增长率（rm)比对照分别下降24．28％,16．98％,14．12％和20．13％,表明安徽虫瘟霉感染引发的真菌病害对桃蚜种群增长具有显著的抑制作用。     

安徽虫瘟霉的黍米培养及其对桃蚜的侵染力

安徽虫瘟霉Zoophthora anhuiensis (Li) Humber是较难人工培养的蚜虫专化性病原真菌。将灭菌并适度熟化的黍米Panicum miliaceum L.作为固体基质与挑碎的安徽虫瘟霉平板菌落混合,在20℃和12L∶12D的温光条件下静止固体培养,获得了产孢潜能大、杀蚜活性强的米粒培养物。培养7天的黍米的产孢量达13.0×10⁴个孢子/粒,产孢持续时间长达6天。用此黍米培养物弹射的孢子对桃蚜Myzus persicae (Sulzer) 若蚜进行7.9～134.9个孢子/mm²共9个剂量的孢子浴接种,所获数据很好拟合时间 剂量 死亡率模型。接种后第5～7天各天的LC₅₀依次为59.8, 39.5和33.5个孢子/mm²,LC₉₀依次为354,234和198个孢子/mm²。在57.7～134.9个孢子/mm²的接种剂量范围内,致死中时LT₅₀从5.1天下降到4.3天。由此表明,安徽虫温霉的黍米培养不仅简单易行,而且菌种的产孢和侵染生物学特性在培养物中被充分体现,每颗米粒如同自然罹病而死的蚜尸,值得进一步研究开发和利用。     

安徽虫瘟霉菌株的强毒杀蚜应与侵染速率

报道安徽虫瘟霉（Ｚｏｏｐｈｔｈｏｒａ ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ）菌株Ｆ９７０２８对桃蚜（Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ）的强毒杀蚜活性。以７个孢子剂量（０．４￣１０．４个孢子／ｍｍ＾２）接种２￣３龄若蚜（５２￣８６头／剂量）,连续观察７ｄ,所获数据经时间－剂量－死亡率模型模拟分析,接种后第３￣７ｄ的ＬＤ５０分别为３４．８、８７、１．５、０．７和０．４个孢子／ｍｍ＾２;在所有剂量范围内ＬＴ５０为２．９￣６     

温度与光照对安徽虫瘟霉产孢格局的影响*

在不同温度（10～30℃）与光照（连续光照和连续黑暗）组合条件下进行了安徽虫瘟霉（zoophthoraanhuiensis）离体产孢格局的研究。结果表明,适于安徽虫瘟霉产孢的温度为10～20℃,但以15℃最适,不仅产孢快和产孢量大,而且不受光照的影响。在25℃下虽能产孢,但产孢量大幅减少,30℃下则不产孢,25℃可能是安徽虫瘟霉产孢的高温极限。全光照各温度处理的产孢量总是比全黑暗相应温度处理的产孢量高,说明光照对产孢具有刺激作用。在10℃和全光照的组合中,累计产孢量最高且持续产孢时间最长,而相同温度与全黑暗处理的产孢量却很低,显示光照在偏低温度下是影响安徽虫瘟霉产孢的关键因素。概而言之,光照主要影响安徽虫瘟霉的产孢量,而温度主要影响其产孢速率或进程。     

飞虱虫疠霉分生孢子在桃蚜体壁上的附着与入侵*

用飞虱虫疠霉(Pandora delphacis)初级分生孢子接种桃蚜(Myzus persicae),24 h内定时取样,在扫描电镜下观察孢子的萌发及其对寄主体壁的入侵。结果表明,附着到蚜体表面的孢子在4 h内有30~40%已萌发产生芽管,其中多数为侵染性芽管,少数是呈叉状分枝的营养生长型芽管。具侵染性芽管的孢子部分陷入体壁蜡质层中,显示孢子有分泌物产生并作用于寄主体壁。接种10 h内,侵染性芽管通过顶端膨大的附着胞或直接穿透侵入寄主体壁。到24 h时,产生侵染性芽管的孢子全部侵入寄主体内,寄主体表仅留下少数未萌发的孢子或营养生长型芽管。初级分生孢子在蚜体表面很少产生次级分生孢子,说明桃蚜是适合该菌侵染的寄主。陷入寄主体壁的孢子不因若蚜蜕皮而被去掉,表明该菌对成蚜和若蚜都具有侵染力。     

蚜虫的病原真菌新种——安徽虫疫霉

1984年初冬在安徽长江南北大面积蔬菜的桃蚜种群中发生真菌流行病。病原鉴定为虫霉目新种安徽虫疫霉(Erynia anhuiensis Li sp.nov)。分生孢子梗二歧分枝;初生分生孢子单核,双囊壁,长椭圆形、长卵形或倒拟卵形,前二者大小为17.1—33.3×5.9—12.9μm(平均24.7×8.3),长径比2.0—5.4(平均3.0),后者12.6—30.8×8.1—16.5μm(平均22.7×11.6),长径比1.4—2.5(平均2.0);有囊状体及假根,假根有固着器。外休眠孢子球形,光滑,透明,直径22.1—31.9μm(平均26.6)     

飞虱虫疠霉液培菌丝的凝胶化及其杀蚜活性*

用丙烯酰胺淀粉凝胶包埋飞虱虫疠霉(Pandora delphacis)液培菌丝,制成含营养和不含营养的虫霉凝胶,并测试其产孢能力及对桃蚜(Myzus persicae)的侵染力。经持续9 d产孢观察,相同菌丝量条件下,含营养的虫霉凝胶的累计产孢量(1910.9 个/mm2）为不含营养的虫霉凝胶的3.14倍（608.5个/mm2）和对照（纯液培菌丝）的4.69倍（387.5个/mm2）。用虫霉凝胶的“孢子浴”接种桃蚜居群（成蚜与不同龄期若蚜的混合）,在2.23个/mm2的剂量下,接种后第7 d的死亡率达82.3%。结果表明,丙烯酰胺淀粉凝胶作为载体材料,与飞虱虫疠霉的基本生物学特性相容,对虫霉的剂型化具有重要意义     

温度与光照对安徽虫瘟霉产孢格局的影响

在不同温度（１０－３０℃）与光照（连续光照和连续黑暗）组合条件下进行了安徽虫瘟霉（Ｚｏｏｐｈｔｈｏｒａ ａｎｈｕｉｅｎｓｉｓ）离体产孢格局的研究。结果表明,适于安徽虫瘟霉产孢的温度为１０－２０℃,但以１５℃最适,不仅产孢快和产孢量大,而且不受光照的影响。在２５℃下虽能产孢,但产孢量大幅减少,３０℃下则不产孢,２５℃可能是安徽虫瘟霉产孢的高温极限。全光照各温度处理的产孢量总是比全黑暗相应温度处理的产     

飞虱虫疠霉分生孢子在桃蚜体壁上的附着与入侵

用飞虱虫疠霉（Pandora delphacis)初级分生孢子接种桃蚜（Myzus persicae),24h内定时取样,在扫描电镜下观察孢子的萌发及其对寄主体壁的入侵。结果表明,附着到蚜体表面的孢子在4h内有30－40％已萌发产生芽管,少数是呈叉状分枝的营养生长型芽管。且侵染性芽管的孢子部分孢入体壁蜡质层中,显示孢子有分泌物产生并作用于寄主体壁。接种10h内,侵染性芽管通过顶端膨大的附着胞或直接穿透入寄主体壁。到24h时,产生侵染性芽管的孢子全部侵入寄主体内,寄主体表仅留下少数未萌发的孢子或营养生长型芽管。初级分生孢子在蚜体表面很少产生次级分生孢子,说明桃蚜是适合该菌侵染的寄主。陷入寄主体壁的孢子不因若蚜蜕皮而被去掉,表明该菌对成蚜和若蚜都具有侵染力。     

努利虫疠霉感染桃蚜过程的扫描电镜观察

利用扫描电镜观察了努利虫疠霉Pandora nouryi (Remaudière & Hennebert) Humber初生分生孢子接种桃蚜Myzus persicae (Sulzer)后孢子萌发、入侵以及菌体突破虫体的整个侵染过程。结果表明：附着于虫体表面的初生分生孢子在3～5 h后即有60%以上的萌发率,萌发的孢子形成芽管或产生球形或棍棒状的附着胞;12 h后大部分孢子均已萌发,并成功入侵寄主虫体;接种60 h后,呈掌状分枝的假根首先从桃蚜胸部的腹面突破虫体长出体外,明显区别于新蚜虫疠霉Pandora neoaphidis (Remaudière & Hennebert) Humber假根突破虫体的位置;假囊状体不多见,且仅分布于蚜虫身体两侧,这可在一定程度上解释努利虫疠霉产孢对湿度条件要求较高的生物学现象。     

不同寄主来源的根虫瘟霉菌株对小菜蛾幼虫的毒力比较

在不同寄主来源的4株根虫瘟霉Zoophthora radicans对小菜蛾 Plutella xylostella 2龄幼虫的生物测定中,发现源于小菜蛾的菌株ARSEF1100毒力最强,在0.53～319.32/mm²的孢子剂量下,接种后第8 天累计死亡率为2.38%～97.44%,虫尸全部表现典型的虫瘟霉症状;源于叶蝉的ARSEF2699和F99101菌株的同日累计死亡率分别为2.38%～50.00% (剂量为1.56～314.84/mm²孢子)和2.38%～57.89% (剂量为1.84～484.08/mm²的孢子);而源于菜粉蝶的ARSEF1342菌株在3.54～633.0/mm²的孢子剂量下只引发6.52%～13.63%的累计死亡率,后3个菌株致死的小菜蛾幼虫仅部分表现典型症状。所获数据经时间剂量-死亡率模型模拟分析,剂量效应参数依次为ARSEF1100 (1.89) > F99101 (1.48) > ARSEF2699 (1.23) > ARSEF1342 (0.37),相互间差异均达极显著水平。接种后4～8 天内,ARSEF1100的LD₅₀值分别为231.68、113.08、71.41、40.87和35.30/mm²的孢子,其毒力远高于其余3个菌株;ARSEF2699的相应LD₅₀值为1344.43、922.39、555.58、410.06和397.07/mm²的孢子;F99101的LD₅₀值为666.86、451.64、413.82、350.65和332.57/mm²的孢子,而ARSEF1342的毒力太弱难以估计。这些结果表明,ARSEF1100菌株最有希望用于小菜蛾的微生物防治。     

近藤虫疠霉分类地位的分子证据*

对近藤虫疠霉和伊萨卡虫瘴霉的18SrRNA基因进行克隆测序(登录号分别为AF351133和AF351134),并于GenBank中的新蚜虫疠霉相应序列(登录号AF052405)进行比较。近藤虫疠霉有43个碱基差异,而伊萨卡虫瘴霉仅有38个碱基差异。这证明近藤虫疠霉作为一个独立的种存在是合理的。系统发育进化树发现近藤虫疠霉和伊萨卡虫瘴霉的亲缘关系比它和新蚜虫疠霉更近。这对Humber的新系统提出了异议。