有效分离1kDa小肽的Tricine-SDS-PAGE方法

为了建立能有效分离 1kDa的特小分子肽的Tricine SDS PAGE方法 ,调整分离胶中聚丙烯酰胺凝胶的分子组成 ,使致密胶中丙烯酰胺和双丙烯酰胺的交联度为 5 %,并加入 36 5 %的尿素 ,用于分离小至 1kDa的小分子肽 ,并与常规的SDS PAGE和先前报道的Tricine SDS PAGE相比较。结果改进的致密胶可以有效分离分子量小至 1kDa的小肽 ,明显优于常规的SDS PAGE和现有的Tricine SDS PAGE方法。     

一种简单而灵敏的蛋白质肽图分析方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已广泛用于多组分蛋白质体系的分离、纯化和分子量比较分析,而蛋白质肽图分析方法则能进一步在寡肽的水平上对蛋白质进行比较研究。部分揭示蛋白质氨基酸组成的异同。常规的肽图分析方法所需样品量较大(n mole或接近mg量),制备样品不仅步骤繁杂而且损耗量大,因而限制其广泛应用.1977年Elder等对PAGE分离得到的凝胶小片中的蛋白质,直接用放射性碘标记,然后进行酶解、电泳-层析、放射自显影     

不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对双向电泳中蛋白分离的影响

目的：探讨双向电泳中不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对肠道菌蛋白分离效果的影响。方法：制备弗氏2a志贺菌2457T野生株37℃晚期全菌蛋白质样品,进行不同浓度及梯度的SDS-PAGE,研究分离肠道菌蛋白最适宜的SDS-PAGE胶浓度。结果：获得了3个不同浓度（10%、12.5%和15%）的均一胶电泳图谱和3个不同梯度（4%～15%、10%～20%和12%～14%）的电泳图谱,并比较了这些图谱的分离效果;同时,为了分析肠道菌天然表达蛋白的相对分子质量范围,鉴定了8个极端相对分子质量蛋白。结论：对于肠道菌蛋白质的分离来说,12.5%的均一胶或12%～14%的梯度胶较为适宜。     

黄原胶降解菌BIT-BJ001培养条件的优化

黄原胶在采油工程中有重要的应用,但其难降解性质给采油工程带来很多问题。从塔里木油田胡杨木根部样品中分离得到1株黄原胶降解菌BIT-BJ001,对其发酵条件的研究表明,此黄原胶降解菌最适培养条件为:黄原胶0.3%,酵母粉0.5%,Na+浓度0.8%,Mg2+浓度0.8%,初始pH值为10,温度60℃。菌种BIT-BJ001降解黄原胶的能力与发酵时间、发酵液中还原糖浓度有关,发酵96 h,黄原胶降粘率达到最高,发酵液中还原糖浓度过高,将抑制菌株对黄原胶的降解。     

应用SDS—PAGE显示小分子多肽技术的探讨

为探讨显示小分子多肽技术,应用SDS－PAGE寻找更简单,快捷的分析小分子多肽的方法。采用8％,T,3％C的丙烯酰胺浓缩胶和含6mol/L脲（或含24％的甘油）的16％T,6％C的丙烯酰胺分离胶 的双层不连续SDS－PAGE和三羟基甘氨酸电泳缓冲液显示蛋白分子量标准（2．512－16．949KD）和待测样品,并对蛋白分子量标准在这两种分离胶中进行了回归分析。结果表明在这两种条件下均能显示分子量小至2．512KD的多肽;多肽样品在含脲和在含甘油的2L－T－SDS－PAGE中均有较好的显带,蛋白分子量标准的直线回归系数分别为r=-0.966和r=-0.964,它们是显示小分子多肽和估测其相对分 子质量及对多肽分子进行进一步分析和更为简便易行的方法。     

用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较

对于小分子多肽的分析目前多采用甘油—SDS—PAGE系统,但经实践后发现,此系统电泳时间太长,导致小分子扩散丢失较多,小分子成像不清。后经用尿素代替甘油,同时降低三层胶的浓度,制成15.5%T(C=6%)的分离胶、10%T(C=3%)的间隙胶与4%T(C=3%)的浓缩胶,结果不但节省了电泳时间,且小分子多肽成像清楚。     

反相C18固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理

针对少量且复杂蛋白质组样品,开发一种耗时短、操作简便的分离方法。以人的脑海马组织蛋白样品为研究对象,采用反相C18固相萃取小柱,采用不同乙腈浓度对酶切后样品进行梯度洗脱,与反相高效液相色谱法对比分离效果。通过比较不同乙腈梯度洗脱方案所鉴定到的谱图数、非冗余多肽数、蛋白数和各洗脱组分间重复率分析,确定一种样品量少、简单易行、分离效果好的实验方案。虽然反相C18固相萃取小柱法鉴定蛋白总数占高效液相色谱法的85.5%,但其操作简单,耗时少。通过4种不同乙腈浓度方案比较,确定乙腈洗脱浓度优化为5%、15%、20%和90%时,分离30μg人的海马多肽混合物可以得到较优的分离效果。其蛋白鉴定数为反相液相色谱法的67.0%,且重复性良好。该结果证实反相C18固相萃取小柱分离效果比反相高效液相色谱法稍差,但此方法可以分离少量复杂蛋白质组样品。该方法分离样品充分,操作易行,耗时短,是进行蛋白质组学分析中少量样品的一个简便预处理方法。     

小麦低分子量麦谷蛋白亚基组成研究

利用改良的两步一向SDS—PAGE(two—step one—dimensional SDS—PAGE)分析了几种小麦低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)组成。70％热乙醇提取总谷蛋白,11％分离胶进行第一步SDS—PAGE分离．电泳1h后切取顶端1cm胶条并置于巯基乙醇溶液进行还原,还原后的胶条于11%～16．5％的梯度胶进行第二步SDS—PAGE分离。结果显示。两步一向SDS—PAGE可以彻底除去清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白对LMW—GS分离的背景干扰。提高LMW—GS的分辨率。对几种小麦低分子量麦谷蛋白亚基分析表明：LMW-GS组合比HMW—GS更为丰富,每种小麦含有2～5种B亚基,2～4种C亚基．B、C亚基的总数量为4～8种。     

双梯度超薄胶PAGE分离DNA及其银染与回收

双浓度梯度超薄胶PAGE分离DDRT-PCR扩增产物表明,在30cm长的凝胶板上能清晰分辨长度仅差1bp的DNA,清楚的显示出100多条分离谱带,并可直接从银染PAGE胶中回收DNA谱带。     

如何正确估计蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品加样量

在做蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）时,使用的仪器设备、做胶和制样的方法都差不多,但结果却五花八门,相去甚远。有的条带清新,背景干净,令人赏心悦目;有的却条带模糊、肥瘦不均,其貌不扬;有的甚至歪歪扭扭,画成了地图。看来并不困难的操作,结果为什么会有如此之大的区别？除了试剂质量、制胶过程和跑胶的具体细节外。失败的主要原因往往在于样品制备的缺陷和加样量不适当。只有在样品制备良好、加样量又适当的情况下,     

脲梯度电泳方法的技术关键

介绍在应用丙烯酸胺－脲梯度电泳技术进行蛋白质折叠、去折叠研究工作中的实验步骤和技术关键,并在文献方法的基础上作了改进。通过加入15％～0％的甘油,抵消在凝胶中由于脲浓度不同而引起的溶液粘度变化,保证在凝胶上脲浓度不同的部位对蛋白质保持同样的电泳阻力,防止前沿偏斜．采用核黄素光照催化合脲凝胶的聚合,以防止凝胶在梯度灌制完成前发生聚合．加浓缩胶和样品梳于脲梯度胶上可较好地克服边缘效应,获得好的样品迁移图谱．     

尿素改善SDS-PAGE分离小分子肽的效果

目的：探讨尿素对Tricine—SDS—PAGE系统分离小分子蛋白的影响。方法：利用常规SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE分离小分子肽,比较不同组成的分离胶的分离效果。结果：调整聚丙烯酰胺凝胶的分子组成,使丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度为5．05％,能够改善小分子肽的分离效果。加入36％的尿素比加入甘油可以更有效分离1kD的小肽。但尿素胶聚合太快影响分离效果。结论：尿素改善SDS—PAGE分离小分子肽的效果,制作尿素胶时,宜采用低浓度的AP和TEMED使凝胶慢速聚合。     

人表皮生长因子发酵液的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

一般蛋白质样品的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)通常只用一种浓度的分离胶(单层分离胶)。我们发现,将这种方法用于未经处理的重组人表皮生长因子(rhEGF)发酵液的电泳时,效果不好。我们推测可能是由于发酵液成分复杂,蛋白分子大小不均。基于这种考虑,我们就分离胶浓度对电泳效果的影响进了一些探索。     

一种简单快速高分辨率的PAGE胶显带方法

尽管使用常规方法对聚丙烯酰胺胶(PAGE胶)进行DNA显带, 能获得高分辨率图片, 但常规方法操作步骤繁琐, 耗时较长。文章报道了一种PAGE胶DNA显带的改进方法, 分别使用改进的显带方法和常规的显带方法进行了PAGE胶的显影和比较。结果表明, 使用改进的显带方法得到的PAGE胶图片, DNA带型和背景具有更高的对比度, 因此具有更高的分辨率; 同时操作步骤少, 耗时短, 使用试剂少。这种方法在本实验室中已经完全代替了常规PAGE胶显带方法。     

凝胶电泳分析蛋白酶活性的技术改进

蛋白酶在植物生长代谢过程中具有重要的生理作用。本文探讨了利用“凝胶电泳技术”分析蛋白酶活性的改进方法,通过改变电泳分离胶中底物蛋白浓度估算了“目标蛋白酶”分子量;通过改变电泳前的样品处理条件了解蛋白酶的部分特性;采用分离胶切割法了解“目标蛋白酶”的最适反应温度范围、最适反应pH范围及蛋白酶的类型等。并对影响凝胶电泳蛋白酶活性检测结果的各种因素作了分析。     

凝胶电泳分析蛋白酶活性的技术改进

蛋白酶在植物生长代谢过程中具有重要的生理作用。本文探讨了利用“凝胶电泳技术”分析蛋白酶活性的改进方法 ,通过改变电泳分离胶中底物蛋白浓度估算了“目标蛋白酶”分子量 ;通过改变电泳前的样品处理条件了解蛋白酶的部分特性 ;采用分离胶切割法了解“目标蛋白酶”的最适反应温度范围、最适反应pH范围及蛋白酶的类型等。并对影响凝胶电泳蛋白酶活性检测结果的各种因素作了分析     

用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较

对于小分子多肽的分析目前多采用甘油－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ系统,但经实践后发现,此系统电泳时间太长,导致小分子扩散丢失较多,小分子成像不清,后经用尿素代替甘不同,同时降低三层胶的浓度,制成１５.5％Ｔ（Ｃ＝６％）的分离胶、１０％Ｔ（Ｃ＝３％）的间隙胶与４％Ｔ（Ｃ＝３％）的浓缩胶档但节省了电泳时间,且小分子多肽成像清楚。     

采用滤袋技术快速测定杜仲叶片中杜仲胶含量

采用滤袋技术依据减重法原理测定了杜仲叶片中杜仲胶含量。通过正交设计比较了不同滤袋孔径、样品量和提取时间对提取效果的影响,并采用该方法比较了同一产地不同品种、同一品种不同产地的杜仲叶中胶含量的差异。结果表明,不同孔径的提取效果差异显著(F=3.685,p=0.043),样品量和提取时间对提取效果无显著影响。适宜的测定条件是样品量0.1 g、滤袋孔径25μm/10μm、提取时间60 min。滤袋法测得的‘华仲6号’胶含量为4.49%,传统碱煮法为3.64%。同一产地不同品种、同一品种不同产地的杜仲叶中胶含量差异极显著(F=92.689,P=0.001),其中郑州的‘华仲11号’含量最高,平均为7.00%,灵宝的‘华仲12号’含量最低,为4.28%。生产杜仲胶的原料应标明品种、产地以及树龄,这样有助于合理评估预期产量和生产成本。     

黄瓜悬浮细胞蛋白质组双向电泳分析技术

为建立适于黄瓜悬浮细胞蛋白质组分析的双向电泳体系,对黄瓜悬浮细胞蛋白质双向电泳分析所采用的胶条pH范围、样品制备方法、裂解液配方及分离胶浓度等参数进行研究。结果表明,采用pH范围为4～7的IPG胶条,直接裂解后丙酮沉淀法制备黄瓜悬浮细胞蛋白质,裂解液为8mol/L尿素、2mol/L硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol/L DTT、2mmol/L EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,分离胶浓度为11%,可获得蛋白质点分离清晰的双向电泳图谱。     

HAV病毒液的3种浓缩方法比较

目的:对HAV病毒液的3种常见浓缩方法进行分析比较,为HAV病毒研究及规模化疫苗生产提供参考。方法:使用MILLIPORE PELLICON超滤、PEG 6000沉淀、蔗糖-甘油垫三种方法对纯化HAV病毒液进行浓缩,用ELISA方法对浓缩液进行抗原滴度检测,计算不同浓缩方法的回收率。结果:HAV病毒液经过7次超滤循环浓缩,平均回收率为86%;PEG浓缩方法回收率平均72.5%;蔗糖-甘油离心浓缩方法平均回收率53.3%。结论:蔗糖/甘油超离心法,集纯化浓缩一体,适用于样品量较少,需要高浓度样品的试验;PEG浓缩得率适中,操作简单,应用范围较广;超滤膜浓缩在大规模疫苗生产或样品量较大时适用,但需控制样品浓度及浓缩倍数不能太高,以免样品损失。