火棉胶包埋组织切片及冰冻切片的连续切片与染色

近年来为了教学和研究所用之切片标本,曾广泛使用火棉胶包埋组织切片和冰冻切片法,这两种方法虽然它是有比石腊包埋组织切片稍厚一点,但它的优点是远超过了缺点。组织用石腊包埋,在组织经过不同浓度酒精脱水后,须用氯仿或二甲苯透明,再置于58℃温箱石腊中几个小时。以上透明剂具有使组织收缩变小,在经过这样高温之下,组织增加它由收缩而扭转和变形,纤维曲折,细胞及所含物质缩小,折光率增强,组织内所含之尖脂脂亦易于被以上透明剂所溶解,致染色不佳。作为观察和研究组织形态是不够美满的。因为石腊包埋组织制作切片有以上之缺点,     

巴西橡膠树幼苗乳管发达的初步观察

本试验是想通过解剖观察瞭解膠苗在各个生长时期中乳管发达和外界环境的关系。亦即探求有利於橡膠生物合成的外界环境条件。这些条件包括不同的温度、湿度、施肥处理等等。但是关於橡膠植物切片方法至今还存在着困难。就是在切片过程中,如果材料接触到某些有机溶剂(如二甲苯、乙醚等等),则橡膠很易被溶掉。乳管便难以看出。参考文献至今也还没有具体满意的方法。为此,作者企图改变石蜡法中一部份手续,调换溶剂,仍旧进行石蜡埋藏切片。然而对巴西橡膠树幼苗切片却没有能达到目的。祗是对它的老树皮切片能够使     

用石蜡包埋制作全眼球切片的改进

制作全眼球切片标本的传统方法是用火棉胶包埋,虽能使眼球切片保持完整,而不易制作较薄的切片,整个制作过程需要的时间也比较长。用石蜡包埋制作全眼球切片的方法已有过报道。由于眼球的结构与致密度差异大,各部位软硬悬殊,要做出比较完美的切片标本是不大容易。为了进一步缩短制片时间,减少脱水程序,防止切片易碎,制作出好切易展的切片,对石蜡包埋制作全眼球切片作了一些改进,方法如下:     

动物细胞压制标本方法

在观察动物各器官组织的细胞形态时,常用切片法制作标本。但制作切片需一定的设备,制作技术也较复杂。用压制标本的方法既简单,效果又好,如用脊髓压制成脊髓神经细胞标本,可见细胞质内的尼氏体和神经细胞突起。压制标本法是把一些较软的组织或经药剂处理使之变软的组织,用双载片加玻璃纸垫衬挤压,使其变成薄膜状,再经过其他制片步骤制成显微观察标本。下面举两例介绍本方法的步骤、特点。     

常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片的制作

目的探索一种结合常规染色与特殊染色的多种肌组织混合切片的制作方法。方法取实验动物狗的平滑肌、心肌、骨骼肌。所有组织均采取单一包埋制作蜡块。另取心肌组织块,制作显示心肌闰盘的特殊块染标本的蜡块。将四种蜡块切片的蜡带进行组合粘片,同时粘在一张载玻片上。对除心肌闰盘外的三种肌组织切片进行苏木素伊红染色。再将所有切片浸入二甲苯,最后共同封片。结果获得常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。可在一张混合切片上分别观察到平滑肌、心肌、骨骼肌、心肌闰盘四种结构。不同标本的形态结构保存完好,对比非常清晰。结论采取单一包埋与不同蜡带的组合粘片法,过程简单,操作容易,适合制作常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。     

介绍一个测定气孔状态的简易印迹法(乒乓球液法)

“用印跡法测定气孔的状态”一实验所採用的方法,以往常用Buscalioni等的火棉膠法,也有用铃木式万能显微印书法,最近,常用莫洛特科夫斯基法。上列三法效果都很好。但是,第一种方法所需的火棉膠,價格较昂,第二种方法现今不易买到它整套用具,最後一法的电影膠片来源不易,即使以发照相膠片代替,但也不易得到,同时手续较多。徒1952年开始,我们做这个实验时,即利用破乒乓球做材料。方法是和莫洛特夫斯基法相似,不过,事先不用在热碱水中和温水中处理,而可以直接把破乒乓球剪成小塊,溶於丙酮中     

线粒体的两种染色方法比较

取材与制作：制做光镜下线粒体的显微标本,材料可来自动、植物的不同组织,但相同的材料用不同的方法染色其效果大不相同。笔者在制作该切片过程中,取材于小鼠空肠段和肾脏器官,用Ｒｅｇａｕｄ液固定,常规石腊包埋并切片３微米。将两种不同材料的切片分别用两种方法染...     

介绍一种嫁接用的膠套

最近我采用膠套进行嫁接工作,获得良好效果,植物嫁接成活率是很高的。我觉得嫁接一般草本植物采用膠套有如下优点:(1)膠套的大小可随我们选择,(2)膠套稍有弹性,容易把接口封闭,(3)操作起来方便且省时。胶套制法:用旧照相底片一份(把底片上黑色的胶层除去)放进瓶子里,加入十份的丙酮溶液,然后把瓶口盖上,待一二小时胶片全部溶解     

细菌肥料生产中的液体深层培养

最近有很多同志写信讯问我们办小型细菌肥料厂时液体培养的情况,由于工作很忙,未能一一答复,因此利用生物学通报给我们的机会,将我们组织生产的点滴心得体会简单地介绍一下供读者参考。一、液体深层培养在配制微生物培养基时,除所需的养料物质外,通常都加些凝固剂(如洋菜),凝固剂冷却后呈膠冻状,因此习惯上將这样的培养基称为固体培养基。与固体培养基相反,液体培养基不加凝固剂(如洋菜),而其他成分则往往完全相同。应用液体培养基时,又分成为表     

不同组织在石蜡包埋中的方法和体会

在石蜡切片制作过程中,组织包埋是一重要环节,不同组织和病变的包埋则有所不同,包埋位置直接影响切片和对病变的观察,现将我们在工作中的包埋方法和体会介绍如下：     

兔皮原膠原的抽提与其若干物理化學性質

動物結締組織蛋白的研究,一向進展很慢。由於膠原不易溶解,一般化學的和物理化學的方法,難以應用。1947年和等利用檸檬酸緩衝液,自動物皮或其他膠原组織中提出一種能够結晶的原膠原。其後根據一系列的比較的和標記同位素攙入作用的研究,認為它是膠原的前體。這個發現,為結締組織的研究開闢了新的途徑。目前,蘇聯、英、美、德等國許多實驗室,正     

包埋前原位TUNEL标记凋亡淋巴细胞的电镜观察

目的用包埋前原位尾端标记技术在电子显微镜下发现小鼠淋巴结生发中心早期凋亡细胞。方法用GA,PA,PLP分别固定淋巴组织,将其分别切成50μm切片,TUNEL染色,制成1μm切片光镜确认,着色部位制成超薄切片,在电镜下,进行比较观察。结果GA固定的组织中细胞核的TUNEL染色,虽然表面清晰可见,但对组织渗透性较差;PA固定的组织清晰度稍差,但渗透性最好,在电子显微镜下观察效果满意,PLP固定染色效果差,在细胞凋亡的早期,用PA染色时凋亡的细胞核内,可见尚未出现凋亡的生发中心细胞核形态学改变以及核染色质浓缩的核。结论以PA固定的组织,用包埋前技术、TUNEL染色的方法具有简便,染色清晰,易分辨,特异性强的特点,且未见标本损坏现象。     

三种不同脂肪染色方法的比较

目的探讨碳蜡(聚乙二醇)包埋技术、冰冻切片及饿酸染色在脂肪染色中的应用,综合比较几种方法的优缺点,以便在病理工作及科研工作中能找到更适合的脂肪染色方法。方法取新鲜脂肪组织及肝组织,每份标本各取3块组织,分为A、B、C三组:A组和B组标本分别进行碳蜡包埋切片和常规冰冻切片,油红O法染色;C组以饿酸浸染组织块后进行石蜡包埋切片及眦复染。结果 A组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;B组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;C组切片脂肪滴呈黑色。结论饿酸染色和碳蜡包埋技术在脂肪染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,弥补了常规冰冻切片脂肪染色的缺点和局限性,在病理检验及科研中具有一定应用价值。     

不同胚龄大鼠胚胎组织切片制作体会

全胚切片标本是发育生物学教学及其相关研究的基础。本实验采用石蜡包埋和免疫组织化学技术对如何制作完整和连续的不同胚龄之全胚切片进行了探索,并研究了亨廷顿相关蛋白1在孕中期胚鼠的表达。     

微小组织石蜡切片制作体会

目的探讨提高微小组织石蜡制片质量的方法,明确微小组织的内涵。方法针对微小组织石蜡切片制作过程中常常出现组织遗漏、切完和多粒组织切片不全等问题,通过伊红标记、预包埋等方法来精心制作切片。结果伊红标记可避免微小组织遗漏,预包埋可以使多粒微小组织处于同一水平面来防止切不全或切完组织的情况发生,整个制片过程中仔细操作也是必不可少的条件。结论伊红标记和预包埋等方法能够很好地解决微小组织切片制作中的遗漏、切完和"切不全"等问题,并进一步明确了微小组织的内涵。     

一种简便快速的超薄切片裸面载网法

电镜生物样品制作的质量,直接影响到对标本的观察及结果分析与判断。要获得既整洁,平坦又结构清晰的优质超薄切片,除标本的固定、包埋等一系列步骤必须严格操作外,超薄切片制作完成后的捞片载网也是一个十分重要的问题。为此,我们从实际工作中摸索出了一种超薄切片裸面铜网捞片法,将超薄切片直接载至经过特定处理的裸面铜网上。其处理的步骤是:首先将市售未经过处理的300目铜网(北京创业电镜铜网工艺社产品)入小称量瓶中,以双蒸馏水清洗2次,每次1～2分钟;继入用重铬酸钾配制的硫酸清洗液(取洗液1伤;水1份,释稀为1∶1)浸洗5—10秒钟,充分震荡直至铜网沉降在清洗液底部,迅速倾去清洗液。再用双蒸水洗3～5次,每次1分钟,彻底洗净清洗液用沪纸吸于水份,再浸入无水乙醇     

试用鳔膠封标本瓶口的方法

我们都知道,生物陈列标本的制作与保存,在研究机关、学校、博物馆和展览会里都具有极其重大的意义。关于制作浸制标本时,封标本瓶口的材料和方法,在国内外的参考书上只有一些零星的记载。通常在实验室里多用凡士林来封浸制标本瓶口,这种作法比较简便,却不牢固。如果保存时间较久一些,容易粘附一层浮土,根本不适合作永久标本封口的要求。有时为了克服这一缺点,在瓶口外边包一层胶布条,经久由于胶布粘性失效,既易张脱,也不雅观。以石蠟一份,混松香二份,或以黄蠟混松香封瓶口也是比较常用的方法之一;可是由于它的粘性较小,性质较脆,塗薄了贴不牢,塗厚了易崩脱,同时由于它与标本瓶的色调不一致,陈列起来也很难看。用液体玻璃50份、白陶土50份和氧化锌10份调制成湖状物,搓成细条封瓶口是比较牢固一些的材料,但乾的慢,至少需1个月,在未乾透前若瓶中液体触及瓶口,则易起混溷。还有的用桐油石灰调合成油膩封标本瓶口,除乾的慢外,如资料差一点,也不容易封牢。     

“标本瓶封口法”的一种新尝试

标本瓶口的封合剂是很多的,按性质可分为热封合剂和冷封合剂两类。现在一般技术操作书上介绍的热封合剂较多,它有—个缺点,需要加热比较麻烦,所以一般多喜欢用冷封合剂封瓶口,手续此较简单。过去我们用加拿大树膠,效果很好,但是实际操作中发现加拿大树膠却封不住装冬青油的透明标本瓶盖,因为冬青油的蒸汽可以溶解它,是否可以不用“松香     

不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA影响

目的:比较石蜡包埋组织三种不同的前处理方式用不同试剂盒提取DNA效果,以期达到能根据各自实验室条件差异,选择合适的样本处理方式及相应的试剂盒,获得高质量DNA。方法:在提取DNA前,对石蜡块包埋的组织分别进行三种前处理,形成三种组织形式:切片机连续切片,手动刮取石蜡组织块后获得手刮片和切片后烤片制成的玻片,用Qiagen和Tiangen试剂盒提取DNA,并用琼脂糖电泳,PCR扩增和测序进行鉴定。结论:如果样本是玻片形式的石蜡包埋组织,可以选择改良过的Qiagen试剂盒提取DNA;样本如果是石蜡块包埋的组织,有切片机的,切片之后用Tiangen试剂盒提取DNA;而没有切片机的实验室可以选择用刀片刮取石蜡块组织,用Tiangen试剂盒提取DNA。     

一种用于DAPI染色的方法--Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman's wax 包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman's wax 作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5 μm的连续切片.Steedman's wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman's wax 包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.