致瘤农杆菌对龙葵的致瘤作用及其T-DNA的转移

本文介绍采用9种致瘤农杆菌处理龙葵幼小植株,获得大量的畸胎瘤,并分化出健壮的幼苗,这些幼苗成长后能正常开花结实。将由畸胎瘤上形成的枝条上的叶片和幼茎,放在没有附加激素的培养基上培养,能分化出幼苗。经测定这些幼苗内含有胭脂碱,从而证实了致瘤农杆菌的Ti质粒上的T-DNA成功地整合到植物细胞中,为进一步研究特殊基因的转移创造有利的条件。     

胭脂碱合成酶基因在龙葵基因组中的转移

利用致瘤农杆菌的三个菌株B3/73、M3/73和pTi214感染龙葵植株诱发了畸胎瘤。由B3/73菌株诱导出的瘤组织产生的幼苗和幼茎能够在无激素的培养基上直接分化出愈伤组织和小植株;由M3/73和pTi214菌株诱导出的瘤组织块需要在含有激素5mg/1 LAA,0.5mg/l2,4-D,0.5mg/l KT的MS培养基中经过短期培养后,使其产生愈伤组织,再转移到没有激素的培养基中培养,才能分化出小植株。测定表明这些小植株都含有胭脂碱。从这些小植株诱导出的愈伤组织在固体培养基中经过一年多时间十几次继代培养,和通过二十多次液体悬浮培养,建立了较稳定的细胞系,在继代培养的愈伤组织和细胞株系中都测出了胭脂碱,说明胭脂碱合成酶基因能够整合到龙葵基因组中并可以正常表达。     

葡萄根癌土壤杆菌诱导的葡萄、毛叶曼陀罗冠瘿瘤的离体培养和植株再生

生化Ⅲ型葡萄根癌土壤杆菌MI3-2、BS33-6等菌株含有致瘤的Ti质粒。用章鱼碱菌株MI3-2、MI14-1、MS32-1、MI22-1及胭脂碱菌株BS33-6、BS33-7、从葡萄试管苗的茎诱导出冠瘿瘤。脱菌的葡萄冠瘿组织能在无外源植物激素供给的MS培养基继代生长,并合成章鱼碱或胭脂碱。章鱼碱冠瘿组织疏松、白色或淡黄色;胭脂碱冠瘿组织硬脆,深绿色,表面有许多小突起。两种冠瘿组织都未能诱导再生植株。 胭脂碱菌株BS33-6能诱导毛叶曼陀罗产生畸胎瘤,这种无菌畸胎瘤组织在无植物激素的培养基内,培养1个月能分化出植株。     

花生畸胎瘤冠瘿瘤的诱导及胭脂碱合成酶基因的转移

本文报道了致瘤农杆菌(Agrobacterium lume/aciens)的T(?)菌株对分属于五大类型的41个品种的栽培种花生致瘤实验结果。在41个品种中的6个品种上诱发了畸胎瘤。在无激素的MS培养基上诱发冠瘿瘤产生了愈伤组织。瘤组织、愈伤组织,畸胎瘤上幼苗的茎和叶均含有胭脂碱。     

含T-DNA的龙葵叶片分化不定芽的组织学观察

致瘤农杆菌Agrobacterium tumefaciens (Smith and Townserd) Conn．的Ti质粒中的 T-DNA能够稳定地整合到龙葵的核基因组 中,并能在瘤组织及其分化的幼苗中、继代培养 的愈伤组织和细胞系中Ill、以及由愈伤组织分 化的不定芽中t幻稳定地表达。本试验研究了 A208 (pTiT37）菌株感染后获得的含有TDNA 的龙葵叶片在无激素的培养基上产生不 定芽的过程。     

致瘤农杆菌对荔枝的致瘤及T-DNA转移

用致瘤农杆菌的四个菌系C58、B3/73、T37和ACH5对木本植物荔枝进行致瘤试验,诱导出冠瘿瘤,在无激素的MS培养基上从瘤组织中分化出愈伤组织。生化测定表明,其瘤组织的愈伤组织中均含有胭脂碱基因。证明Ti质粒上的T-DNA已转移到荔枝细胞基因组中。     

梨枣叶片和茎段再生体系的建立

用不同浓度配比的生长素和细胞分裂素诱导梨枣叶片和茎段愈伤组织的产生,并研究了不定芽诱导的最佳配方,建立了梨枣叶片和茎段的再生体系.结果表明,梨枣叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 1.5 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1;茎段为MS+2,4-D 1.0 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1.叶片不定芽诱导的最佳培养基为MS+IBA 0.1 mg·L-1+6-BA 1.5 mg·L-1. AgNO3能阻止叶片外植体褐化并有效地促进叶片愈伤组织分化.茎段能在同一培养基上产生愈伤组织并直接分化出不定芽.     

植物组织培养简报摘编

幼花轴在(1)上10天左右产生白色愈伤组织,转入(2)后一个月左右形成大量不定芽,并可在(2)上继代扩增。具芽地下茎在(3)上培养半个月后,基部产生少量白色愈伤组织,转入(4)上产生芽丛,芽丛基部愈伤组织具有分化不定芽能力。上述幼苗长出2—3幼叶后,移到(5)中诱导生根,一个月后移栽成活。国内外未见报道。     

资源植物罗布麻的愈伤组织诱导和植株再生研究

以罗布麻（Apocynum venetum L.）无菌苗的叶、茎和根作为外植体,在不同激素与浓度组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导和植株再生研究。结果表明,在多个激素浓度配比的培养基中,罗布麻叶和茎的愈伤组织诱导率均可达到100%;但进一步将愈伤组织转接到含有不同激素组合的培养基进行不定芽分化时,叶和茎来源的愈伤组织的不定芽分化率有很大不同,茎来源的愈伤组织虽可在多个培养基中有不定芽分化,但最高诱导率仅达20%;而叶片来源的愈伤组织虽仅有4个激素组合培养基中有不定芽的分化,但最高分化率可达到35%。因此,构建罗布麻再生体系的最佳外植体应选择叶片。愈伤组织诱导与不定芽分化的最佳培养基均为：MS＋NAA0.1 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L;不定芽在1/2MS＋NAA 0.2 mg/L生根培养基的生根效果最佳,不仅根群质量好,且生根率也高达100%;此再生苗的移栽成活率也最高,在适宜条件下可达75%。     

外源激素对金钱松胚外植体愈伤组织的诱导及其器官发生的调节作用

金钱松胚外植体在培养过程中由于外源激素的种类和配比的不同而存在着几种发育途径：直接从胚外植体表面分化不定芽;先诱导愈伤组织,再从愈伤组织分化不定芽;还可由愈伤组织分化出胚状体。激素ＢＡ对外植体不定芽的诱导起着关键作用。激素２,４－Ｄ则诱导愈伤组织,ＢＡ与２,４－Ｄ配比恰当诱导的愈伤组织分化出体细胞胚状体。　ＬＰ’附加低浓度的ＢＡ或ＫＴ（＜０．５ｍｇ／Ｌ）促进不定芽茎的伸长;　ＬＰ’附加浓度的ＩＢＡ（＜０．５ｍｇ／Ｌ）诱导不定根的发生。愈伤组织在基本培养基浓度为　×ＬＰ’或１×ＬＰ’的分化培养基上不定芽诱导率相似。     

植物生长调节剂对白头翁叶片培养的影响

以白头翁试管苗叶片为外植体,以MS为基础培养基,探讨不同细胞分裂素和生长素对叶片不定芽诱导、愈伤组织的诱导、增殖、再分化的影响。实验结果表明：细胞分裂素TDZ适合于白头翁叶片培养,与生长素搭配使用使叶片发生分化;2,4-D对愈伤组织的诱导能力相对较强。叶片直接诱导不定芽的激素组合为TDZ0．3mg／L＋NAA0．1mg／L;愈伤组织增殖的激素组合为TDZ0．2mg／L＋2,4-D0．2mg／L,将愈伤组织转接到TDZ和NAA组合的培养基上时会再分化。     

植物组织培养简报摘编

植物名称、外植体 桑树 (亚毋哪‘ba)茎尖和成熟叶片培养基配方(mg/L)(1)MS+6BAI 诱导不定芽(2)1/ZMS 生根成苗 茎尖在(1)上经45天长成高5~6em的无根苗,其主茎下部第一二片接触培养基的叶片表面主脉上分化出不定芽。成熟叶片在(劝土经15天分化出不定芽,每叶片上可分化不定芽20~30个。将带有不定芽的叶片切下转入(1)继续培养,2。夭后成丛生苗。将丛生苗由基部切下于100 ppm工BA溶依或800卫P醉78冬工〔扮但毗吮基)丙醇3溶液中浸债40分钟后,转入(2)份天后生根成苗,生根后15天可进行移栽。 (国内未见报道)作者与单位郑淑湘孔令汉沈永勤(山…     

铁炮百合组培中不定芽形成的细胞学观察

以铁炮百合鳞片诱导的无菌苗叶段作外植体,在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L培养基上诱导不定芽,效果较好。诱导过程中定期取样进行石蜡制片,观察不定芽分化过程中的细胞组织学变化。结果表明,脱分化始于切口周围的细胞;形态发生的主要方式是由愈伤组织分化出不定芽,不定芽通常起源于愈伤组织团从外到内第2~7层细胞的分生细胞团。     

马铃薯器官发生和植株再生研究

虎头、克４和Ｆａｖｏｒｉｔａ３个马铃薯品种的根、茎、叶外植体在附加ＮＡＡ和ＢＡ各１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上诱导出愈伤组织。在附加０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ和１ｍｇ／ＬＢＡ的ＭＳ培养荐,愈伤组织上分化产生不定芽。１．５－２．５ｃｍ高的不定芽在ＭＳ＋０．０５ｍｇ／ＬＮＡＡ培养基上生根形成再生完整植株。３个马铃薯品种中,虎头茎的愈伤组织诱导频率最高,达９８％。Ｆａｖｏｒｉｔａ叶愈伤组织的不定芽分化频率和不定芽生     

抗虫转基因甘蓝及其后代的研究

通过农杆菌感染法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因转移进了甘蓝的基因组,带子叶柄的子叶作为外植体与农杆菌共培养.发生在子叶柄基部的愈伤组织在含卡那霉素(Km)15～30mg/L的MS培养基上进行筛选,约5%外植体上的愈伤组织继续长大,当移到含Km和6-BA的分化培养基上时,愈伤组织分化出绿色的芽.将芽分离培养,约80%在加有Km的培养基上被诱导生了根.未转化的对照组织在筛选培养基上不能分化出正常的芽和根系,并且逐渐褐化死亡.小菜粉蝶的幼虫被饲喂以转基因植株的叶片,幼虫出现中毒症状,表现为发育受阻和死亡.约20%受试植物的DNA与苏云金杆菌杀虫蛋白基因探针杂交显阳性带.由转基因植株的种子长成的第2代甘蓝幼苗的卡那霉素抗性和植株的抗小菜粉蝶的活力均符合孟德尔单基因分离规律.     

油菜幼苗下胚轴、根和子叶愈伤组织器官分化的初步研究

器官分化是植物生理学上的一个重要问题。油菜幼苗子叶、下胚轴和根外植体,培养在附加适当浓度的一种生长素的培养基上,能诱导产生愈伤组织。愈伤组织转至除去生长素的基本培养基上,能从子叶和下胚轴愈伤组织分化出不定芽(苗),进而从不定芽(苗)形成的茎的基部长根而形成完整小植株,但频率不高。如果在附加一种生长素的诱导愈伤组织培养基中,再加入适当浓度的一种细胞分裂素,不仅能加速下胚轴和根愈伤组织的产生,而     

Ti质粒基因在单子叶植物石蒜和金针菜中的表达

本文报道了用胭脂碱型致瘤农杆菌感染单子叶植物石蒜和金针菜的实验结果。石蒜和金针菜的花茎幼嫩部位被致瘤农杆菌A_(208)感染后,一个月内形成小瘤。纸电泳结果表明,所有瘤组织都含有胭脂碱,证明石蒜和金针菜的细胞可被转化并表达nos基因;本文讨论了致瘤农杆菌转化单子叶植物的范围和筛选方法。     

辣椒再生体系不定芽发生因素的优化研究

以辣椒(Capsicum annuum L)品种"哈椒一号"为试材,选用无菌苗子叶、下胚轴和带柄子叶为外植体,采用正交设计探讨不同外植体、激素组合和AgNO_2浓度等因素对不定芽分化的影响,筛选出了三种外植体不定芽诱导的最适培养基。试验结果表明:在不定芽的分化中,6-BA与IAA相配合使叶片不定芽分化频率明显提高,BA/IAA的比例对不定芽分化有明显影响。并且6-BA 6 mg/L+IAA 2 mg/L的组合能够达到最高的诱导率。AgNO_3不但显著提高了不定芽诱导的频率,并且还缩短了不定芽的发生时间。另外,三种外植体的不定芽诱导率,带柄子叶最高,其次是子叶,下胚轴最差。最适不定芽培养基:MS+6-BA 6 mg/L+IAA 2 mg/L+AgNO_2 4 mg/L,pH 5.8,最高不定芽分化率达88.2%。     

唐菖蒲花色突变株开花后子房组织培养与植株再生的研究

以唐菖蒲花色突变株开花后的子房为外植体,接种于MS+1.0mg/L BA+0.01-0.1mg/L NAA或MS+1.0mg/LBA+1.0mg/L KT+0.01-0.1mg/LNAA的培养基中,从膨大的组织表面直接诱导不定芽.膨大的组织或带不定芽的组织每隔周转入1/2MS_1.0mg/L BA+0.01-0.1mg/L ANN培养基中,不断地诱导产生不定芽,分化的不定芽转入不含激素的1/2MS培养基中,形成幼苗、然后生根,最后可形成小球茎.幼苗转入1/2MS+0.1mg/L NAA培养基中,幼苗生根,再可形成小球茎.1个唐葛蒲突变株子房,经6—7个月培养,获得了上千株试管苗.     

偃伏梾木组织培养及再生体系的建立(简报)

本文以偃伏株木(Cornus stolonifera)叶片为外植体,建立了其叶片再生体系.同时系统地研究了离体再生芽及丛生芽分化增殖的适宜培养基、不定根诱导的关键因子以及再生芽生根后植株移栽成活的影响因素.叶片外植体在添加0.5 mg/L 6-BA和1.0 mg/L IBA的1/2 MS培养基上再生频率达100%,平均每个外植体上再生芽数为5.0±0.7.不定芽在添加0.5 mg/L 6-BA和0.25 mg/LIBA的1/2 MS培养基上能有效增殖.再生芽在添加0.5 mg/L IBA的1/2 MS培养基上生根效果最佳.在叶片再生过程中选取典型组织进行扫描电镜观测,进一步证实了偃伏株木叶片直接体细胞胚发生过程.用携带有gus基因表达载体的农杆碱型EHA105农杆菌菌株浸染叶片外植体,能观察到其中gus基因的瞬时表达.