不常见的革兰氏阳性无芽胞杆菌的鉴定(续一)

<正> 荧光假单胞菌一在琼脂上的菌落和生化特性与绿脓假单胞菌相类似,但仅可产生一种色素即荧光素,可在5℃下生长,但42℃下不生长,蛋黄反应为阳性。本菌为腐生菌,发现在土壤与水中,也是食物腐败菌。 恶臭假单胞菌一类似于绿脓假单胞菌, 但仅形成荧光素。本菌属嗜冷营养型,不能在37℃下生长,但可在22℃下生长。有二个生物型,其一可在4℃下生长,另一则不能生长。二者均水解精氨酸,蛋黄反应阴性,不液化明胶,老培养物有明显的三甲胺气味(臭鱼味),为鱼类重要致病菌,也可从人的材料中分离到。 嗜麦芽假单胞菌-菌落类似绿脓假单胞菌,但产生黄色或褐色可扩散的色素。本菌由Gilardi氏用Difco制造的氧化酶片做氧化酶试验为阴性,而Snell用四甲基-1-苯二胺二盐酸盐做试验则发现为氧化酶阳性菌株。看来所用的方法是重要的。本菌不能水     

钝顶螺旋藻FtsZ在大肠杆菌中的表达和定位北大核心CSCD

FtsZ是与真核微管蛋白类似的原核骨架蛋白,能在细胞分裂位点聚合组装成环状结构而调控细胞分裂过程。为了研究钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)FtsZ蛋白的功能,构建了钝顶螺旋藻FtsZ与绿色荧光蛋白GFP融合表达的质粒,并在大肠杆菌中进行了表达和定位研究,结果发现,表达融合蛋白GFP-FtsZ的大肠杆菌细胞由短杆状变为长丝状,且菌丝体长度与融合蛋白的表达量呈正比。在荧光显微镜下观察到融合蛋白GFP-FtsZ在长丝状体细菌中呈有规律的点状分布,这说明FtsZ蛋白功能高度保守,钝顶螺旋藻FtsZ蛋白能识别大肠杆菌分裂位点并装配成环状结构调控大肠杆菌细胞分裂,FtsZ蛋白的过量表达能抑制大肠杆菌正常的细胞分裂而导致长丝状体细胞的形成。     

钝顶螺旋藻FtsZ在大肠杆菌中的表达和定位

FtsZ是与真核微管蛋白类似的原核骨架蛋白,能在细胞分裂位点聚合组装成环状结构而调控细胞分裂过程。为了研究钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）FtsZ蛋白的功能,构建了钝顶螺旋藻FtsZ与绿色荧光蛋白GFP融合表达的质粒,并在大肠杆菌中进行了表达和定位研究,结果发现,表达融合蛋白GFP-FtsZ的大肠杆菌细胞由短杆状变为长丝状,且菌丝体长度与融合蛋白的表达量呈正比。在荧光显微镜下观察到融合蛋白GFP-FtsZ在长丝状体细菌中呈有规律的点状分布,这说明FtsZ蛋白功能高度保守,钝顶螺旋藻FtsZ蛋白能识别大肠杆菌分裂位点并装配成环状结构调控大肠杆菌细胞分裂,FtsZ蛋白的过量表达能抑制大肠杆菌正常的细胞分裂而导致长丝状体细胞的形成。     

假结核耶氏菌在实验条件下细菌L型的观察

细菌L型广泛分布在生物体内外,并为细菌生命周期的一相。本文应用假结核耶氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)作为研究材料,在L型培养基中无抗生素存在情况下连续传代,观察到:正常型(杆状)假结核菌出现圆球体、丝状体,继续传代又返祖为正常型。实验表明,细菌L型是细菌生命周期中的一相。     

旱生蕨类植物金毛裸蕨配子体发育及其生态意义

采用光学显微镜对旱生金毛裸蕨(Gymnopteris vestita)配子体发育的全过程进行了观察。结果显示,(1)旱生金毛裸蕨孢子三裂缝,成熟时黄褐色,接种后10～15d萌发,萌发类型为书带蕨型。原叶体母细胞首先形成单列的丝状体,其后配子体发育明显区别于非旱生的蕨类,金毛裸蕨配子体发育最明显的特征是形成大量的分枝,通常单列的丝状体基部细胞可通过细胞纵分裂形成丝状分枝,这些分枝又可进一步产生新的分枝,分枝的末端可形成片状体,这些片状体又可产生分枝丝状体或片状体,最终整个配子体可发育为群丛。有时,单列的丝状体也可直接发育为片状体,然而这些片状体并不发育为原叶体而是产生大量的丝状分枝。当群丛形成时,在丝状体或片状体表面可产生数量较多的精子器,但在人工培养条件下并没有发现颈卵器。如果培养条件适宜,配子体可进行营养繁殖,持续较长时间,老的片状体上可产生新的丝状体。金毛裸蕨位于群丛外的大型心形原叶体可进行无配子生殖产生孢子体。金毛裸蕨的配子体发育特征,包括多分枝、发达的营养繁殖及无配子生殖现象的发生,表明了金毛裸蕨配子体群丛的形成是对于旱生环境的一种适应性。     

枇杷叶尖焦枯病叶脉组织电镜观察初报

用超薄切片和电镜观察技术,对枇杷叶尖焦枯病进行组织病理学观察。结果发现,病株叶脉韧皮部的筛管及伴胞内有大量丝状菌体状物存在,其大小为37~100×1500~?nm,横切面形态为近圆形、椭圆形或不规则短杆状,纵切面形态为菌丝状,而对照的无病实生苗木中则无。据此初步认为,丝状菌体状物可能与枇杷叶尖焦枯病的发生有关。     

普氏立克次氏体的组织培养I.鼠胚肺单层细胞培养普氏立克次氏体

本文报告了用含有10％牛血清的#199综合培养基,培养了经垃胰蛋白酶分散的鼠胚肺组织细胞。 用普氏立克麦氏体鼠啼毒株感染了单层细胞,不加抗菌素在340C培养,立克次氏体的繁殖开始于48—96小时,高举在4--7天,约有80％的细胞受到感染。立克次氏体的发育过程是：丝状体一链状体一长杆状一短杆状。有时在丝状体的前一阶段时间内先有始体出现。在油浸接物镜下看到的细胞病变是：1)梭形及多边形上皮细胞被极端增殖的立克次氏体所胀破;2)这两种上皮细胞的退化和碎解;3)游离到细胞外的立克次氏体。至于星状上皮细胞内立克灾氏体的培殖较其他类型的上皮细胞中的增殖为早。巢形细胞在感染的早期出现室泡性变化,后期细胞脱落,立克夹氏体寄生于鏖泡之间的间隙中。组织培养收获物(细胞)经鼻腔感染小白鼠证明有致病力,且可在鼠肺涂片上找到大量的立克我氏体。据估计,普氏立克六氏体在鼠胚肺组织培养中的增殖量至少为原接种量的十几倍。因此,可以考虑用本法制备立克交氏体抗原和进行疫苗的研究。     

鞘丝菌属的一个新种

自同氮蓝藻藻种培养池的土壤中分离得到一株具有透明薄鞘、宽度均一、长度不等、可届挠滑行运动的丝状菌。随菌龄增长或培养条件的改变,丝状体内分隔形成单列杆状细胞链。此种杆状细胞可由鞘内滑出形成新的丝状体。产生内生芽孢。革兰氏染色阳性,但不稳定。30—320c生长良好,45℃亦可生长,并形成大量不规则卷曲的螺旋状丝状体。在含铁蛋白胨琼脂上出现膨大的葫芦状细胞。初次分离物对固氮蓝藻细胞有明显的溶解能力。经鉴定为鞘丝菌属(Coleomitus)的一个新种,命名为直孢鞘丝菌(Coleomitus rectisporus sp．nov．)。     

几种因素诱导鱼腥藻7120短藻丝体的形成

丝状蓝藻鱼腥藻7120（Anabaena sp.PCC7120）中可成功表达外源基因,但其转化和表达效率不高,改变细胞的生理状态可能会影响外源基因的转化和表达效率。将鱼腥藻7120藻丝体通过几种因素诱导形成短藻丝体（具有25个左右细胞）,并对其光合活性进行了测定。结果表明：红光和高温对鱼腥藻7120短藻丝体较为有效,且红光诱导在48h时,短藻丝体细胞数占总细胞数的比例达到85％;DCMU单独诱导效果不明显,适当浓度的DCMU＋红光诱导时诱导效率略有增加;高温以45℃诱导12h比例最高,约达87％;高温45℃诱导时,对数生长后期的鱼腥藻7120较易形成短藻丝体。光合活性测定结果显示,诱导形成的短藻丝体光合放氧速率比正常营养藻丝体的低,这种具有光合放氧能力的短藻丝体显示出作为表达外源基因受体的可能性。     

Eltor型霍乱弧菌L型的诱导及形态学观察

本文主要介绍Eltor型霍乱弧菌在液体和固相的青霉素诱导下形成L型的过程及其菌落和菌体的形态学改变。Eltor型霍乱弧菌在被诱导3—5次即可出现典型的L型菌落。本试验共诱导10次,获得稳定的L型菌株,菌落形态除油煎蛋样外,还可见到双重心样菌落、靶环样菌落、纤维型菌落。菌体的正常状态为徽弧状,经青霉素作用后,微弧状消失,膨大变直,继尔变成杆状和杆状长链。菌落中心多为相互盘绕、交织成网状的丝状体。     

促进CHO细胞生长及其产物hNGF表达的培养条件的初步研究

以稳定表达人神经生长因子（hNGF）的重组工程CHO细胞株为对象,采用无血清流加悬浮培养（Fed batch culture）方式,考察使用基础培养基(无特殊添加物),分别添加丁酸钠、DMSO、KH2PO4的培养基及不同培养温度（32℃和37℃）对细胞生长和重组蛋白表达的影响。每日取样检测细胞密度、细胞活率、葡萄糖浓度、重组蛋白浓度。结果表明细胞培养温度由37℃下降至32℃,细胞生长周期明显延长,重组蛋白产量增加。5mmol/L丁酸钠和2% DMSO的加入虽然提高了重组蛋白的表达量,但严重抑制细胞生长。最大的蛋白比生成速率（qNGF）出现在37℃培养且添加2% DMSO的培养条件下,而最高蛋白表达量则出现于32℃培养添加3.65mmol/L KH2PO4的培养条件下。研究表明,将培养温度设为32℃,在基础培养基中添加3.65mmol/L KH2PO4或1% DMSO是提高hNGF表达水平的有效方法。     

温度对不同年龄大鼠海马器官型脑片长期培养中细胞活性和tau蛋白表达的影响

探讨在海马器官型脑片的长期培养过程中,温度对不同年龄大鼠的海马脑片细胞活性和tau蛋白表达的影响,并以此为依据建立一种研究tau相关疾病的模型.选用出生后1周、2周、4周和8周的Wistar大鼠制备海马器官型脑片,培养温度分别为34℃和37℃,培养时间为21d,在培养过程中,检测培养基中的乳酸脱氢酶的含量以判断脑片的活性,采用免疫印迹技术检测细胞骨架蛋白tau的含量的变化.结果如下:(1)温度对海马脑片的细胞活性影响:34℃较37℃能在较长的时间内保持细胞活性,而在同一培养温度时,不同年龄鼠的脑片的细胞活性变化趋势一致;(2)温度对海马脑片的tau蛋白表达的影响:成年鼠(4周和8周)的海马脑片tau蛋白在34℃时能维持较长时间的稳定表达,而在37℃时tau的表达量随培养时间的延长而显著下降,且随鼠龄的增加,这种影响越明显.温度对1周和2周龄乳鼠的海马脑片tau蛋白的表达无影响.结论为:34℃培养条件下,4周和8周龄大鼠制备的海马器官型脑片能更长时间维持脑片的活性和tau蛋白的稳定表达,从而可望成为研究与tau蛋白相关疾病(如老年性痴呆)的理想模型.     

高产油小球藻的筛选及其油脂分析

小球藻广泛分布于各种生境,特别是淡水环境中,适应性强。其同化产物主要是淀粉,但在环境胁迫条件下可显著积累中性脂,其脂肪酸类型主要为C16和C18,适合作为生物柴油的原料。我们从中国部分地区水体中分离纯化到若干株小球藻,通过薄层层析比较分析了21株产油小球藻的油脂含量,筛选到一株三酰基甘油含量较高的藻株Chlorella sp.NMX37N。其适宜生长温区为15—35℃,在25℃时生长速率最快,比生长速率为0.53/d,生长的最适光强为250μmol photons/(m2.s)。批量培养实验显示,藻细胞的三酰基甘油含量随培养时间延长而增加,并在培养的稳定期达到最大值,此时培养液中氮基本被耗尽。在批量培养条件下培养Chlorella sp.NMX37N约40d,藻细胞中总脂含量可达到33%左右,与此相比通过两步培养方式,将培养至对数后期(约20d)的藻细胞缺氮处理48h后,得到的总脂产率相当。通过两步培养方式可以大大缩短培养时间,使得该藻细胞快速有效积累油脂。另外,气相色谱分析显示,该藻的总脂和三酰基甘油的脂肪酸均以C16∶0和C18∶2为主,占总脂肪酸的70%以上,且不含C20以上的长链脂肪酸,可以作为优质的生物柴油原料。     

裂褶菌培养基形态学观察和DNA序列分析

目的通过观察裂褶菌在5种培养基上的生长状态、扫描电镜及DNA序列分析,了解该菌形态学及分子生物学等方面的特征。方法菌落转种于沙氏培养基(SDA),麦芽浸膏琼脂(MEA),马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),玉米粉琼脂(CMA)和察氏琼脂(CZA)平皿培养基,27℃和37℃培养2周,观察菌落生长情况,进行扫描电镜检测及DNA序列分析。结果菌落在SDA,MEA和PDA上生长状态较好,呈蓬松白色羊毛状;尿素酶试验阳性,放线菌酮耐受试验阴性。光镜下见分支分隔菌丝、侧生的钉状突起及类水母体变异子实体。扫描电镜见菌丝分隔处闭锁联合、侧生钉状突起和泪滴状球形分泌物。经26S rDNAD1/D2区序列分析证实该菌株为裂褶菌。结论裂褶菌只有丝状型一种菌落形态;分支分隔菌丝及分隔处闭锁联合,侧生钉状突起和泪滴状球形分泌为其形态学特征;孢子由类水母状子实体产生。     

Optimization of nutritional and environmental conditions for pyocyanin production by urine isolates of Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a highly pathogenic bacteria involved in numerous diseases among which, are urinary tract infections (UTIs). The pyocyanin secreted as a virulence factor by this bacterium has many beneficial applications but its high cost remains an obstacle for its widespread use. In this study, a total of fifty urine isolates were identified as P. aeruginosa. All strains produced pyocyanin pigment with a range of 1.3–31 µg/ml. The highest producer clinical strain P21 and the standard strain PA14 were used in optimization of pyocyanin production. Among tested media, king’s A fluid medium resulted in the highest yield of pyocyanin pigment followed by nutrient broth. Growth at 37 °C was superior in pyocyanin production than growth at 30 °C. Both shaking and longer incubation periods (3–4 days) improved pyocyanin production. The pyocyanin yield was indifferent upon growth of P21 at both pH 7 and pH 8. In conclusion, the optimum conditions for pyocyanin production are to use King’s A fluid medium of pH 7 and incubate the inoculated medium at 37 °C with shaking at 200 rpm for a period of three to four days.     

Effect of pyocyanin on a crude-oil-degrading microbial community

Pseudomonas aeruginosa is an n-alkane degrader that is frequently isolated from petroleum-contaminated sites and produces factors that enhance its competitiveness and survival in many environments. In this study, one such factor, pyocyanin, has been detected in an oil-degrading culture containing P. aeruginosa and is a redox-active compound capable of inhibiting microbial growth. To examine the effects of pyocyanin further, an oil-degrading culture was grown with and without 9.5 microM pyocyanin and microbial community structure and oil degradation were monitored for 50 days. Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) analysis of cultures revealed a decrease in the microbial community diversity in the pyocyanin-amended cultures compared to that of the unamended cultures. Two members of the microbial community in pure culture exhibited intermediate and high sensitivities to pyocyanin corresponding to intermediate and low levels of activity for the antioxidant enzymes catalase and superoxide dismutase, respectively. Another member of the community that remained constant in the DGGE gels over the 50-day culture incubation period exhibited no sensitivity to pyocyanin, corresponding to a high level of catalase and superoxide dismutase when examined in pure culture. Pyocyanin also affected the overall degradation of the crude oil. At 50 days, the culture without pyocyanin had decreased polycyclic aromatic hydrocarbons compared to the pyocyanin-amended culture, with a specific reduction in the degradation of dibenzothiophenes, naphthalenes, and C(29) and C(30) hopanes. This study demonstrated that pyocyanin influenced the diversity of the microbial community and suggests the importance of understanding how interspecies interactions influence the degradation capability of a microbial community.     

Effect of Pyocyanin on a Crude-Oil-Degrading Microbial Community

Pseudomonas aeruginosa is an n-alkane degrader that is frequently isolated from petroleum-contaminated sites and produces factors that enhance its competitiveness and survival in many environments. In this study, one such factor, pyocyanin, has been detected in an oil-degrading culture containing P. aeruginosa and is a redox-active compound capable of inhibiting microbial growth. To examine the effects of pyocyanin further, an oil-degrading culture was grown with and without 9.5 μM pyocyanin and microbial community structure and oil degradation were monitored for 50 days. Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) analysis of cultures revealed a decrease in the microbial community diversity in the pyocyanin-amended cultures compared to that of the unamended cultures. Two members of the microbial community in pure culture exhibited intermediate and high sensitivities to pyocyanin corresponding to intermediate and low levels of activity for the antioxidant enzymes catalase and superoxide dismutase, respectively. Another member of the community that remained constant in the DGGE gels over the 50-day culture incubation period exhibited no sensitivity to pyocyanin, corresponding to a high level of catalase and superoxide dismutase when examined in pure culture. Pyocyanin also affected the overall degradation of the crude oil. At 50 days, the culture without pyocyanin had decreased polycyclic aromatic hydrocarbons compared to the pyocyanin-amended culture, with a specific reduction in the degradation of dibenzothiophenes, naphthalenes, and C₂₉ and C₃₀ hopanes. This study demonstrated that pyocyanin influenced the diversity of the microbial community and suggests the importance of understanding how interspecies interactions influence the degradation capability of a microbial community.     

草鱼、中华鳖IL-2活性影响因素的研究

结果显示:当年草鱼种和中华鳖脾细胞培养上清液中能检测出IL-2活性,而且1龄以上草鱼、中华鳖的IL-2活性高于当年孵化的草鱼和中华鳖.草鱼、中华鳖脾细胞在25℃培养温度条件下,其上清液中IL-2活性最高,35℃次之,15℃最低.因此,草鱼、中华鳖IL-2活性在一定范围内是随着年龄增加而增强和依赖温度的.通过小鼠胸腺细胞增殖和对小鼠L929细胞杀伤率的实验表明37℃比25℃检测温度下所测的IL-2活性高,而中华鳖胸腺细胞增殖实验却显示25℃检测温度下IL-2活性高于37℃.本文讨论了年龄、温度对免疫反应影响的机理.       

群体和单细胞微囊藻对短期温度变化的生理响应

为了探索短期温度变化对群体微囊藻和单细胞微囊藻的影响, 在室内受控模拟条件下研究了在10℃、25℃和35℃三个温度梯度下, 群体和单细胞微囊藻对短期温度变化的生理响应。研究表明: 与对照组25℃相比, 在10℃培养下, 微囊藻叶绿素浓度显著降低, SOD活性和死亡率均显著增加。与群体微囊藻相比, 在10℃下单细胞微囊藻叶绿素浓度显著下降, F_v/F_m下降, SOD活性显著增加。在35℃培养下, 单细胞微囊藻叶绿素浓度上升, 死亡率和SOD活性增加, 而群体微囊藻则呈现出叶绿素浓度和死亡率降低, CAT活性增加。结果表明短期的温度变化影响了群体和单细胞微囊藻生理机制, 与单细胞微囊藻相比, 群体更能适应短期的温度胁迫, 导致其更具优势。     

牛肾组织及其培养物的不同消化法效果评价

为了比较不同消化液及消化方式对牛肾皮质组织和培养后形成单层细胞的消化分散效果并确定最适消化液和消化方式,分别用0.25%胰蛋白酶和0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA两种消化液,消化牛肾皮质组织及其培养形成的单层牛肾皮质细胞。牛肾皮质组织采用热(37℃)和冷(4℃)两种消化方式;经培养形成单层的牛肾皮质细胞采用室温(25℃)消化。结果显示,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液热消化牛肾组织时,分散获得牛肾皮质细胞的活细胞数、存活率、贴壁率均优于其他消化方法,差异显著(P0.05)。培养形成的单层牛肾皮质细胞用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液的消化速度明显快于用单一0.25%胰蛋白酶消化液的消化速度,统计学分析显示具有显著性差异(P0.01),两种消化液消化所得细胞的存活率及贴壁率前者要更高,差异显著(P0.05)。