木聚糖酶产生菌的选育及发酵条件研究

采用富集培养、透明圈平板筛选,从长期在其上堆放秸秆的土壤中分离到-株木聚糖酶产生菌黑曲霉C2。对该菌株进行紫外线诱变处理,然后采用自然选育的方法筛选到-株木聚糖酶高产菌株C2—56,并对该菌株的适宜发酵条件和酶学特性进行了初步研究。结果表明,C2—56三角瓶发酵酶活达656．8U／g,比出发菌株C2提高了140％;发酵条件以80％麸皮和20％玉米芯为培养基,采用3％接种量,在曲盘上发酵72h为宜,酶活达1750U／g;该菌株产生的木聚糖酶具有较差的热稳定性和较好的pH稳定性,适宜反应温度和pH分别为50℃和pH4．2。     

衣康酸产生菌的分离和选育

本文叙述了从土壤分离衣康酸产生菌的过程和方法,使用Co60与UV-高温复合处理土曲霉野生菌株,获得一些突变体(Mo.82-r17、No．25一13B、No．25—23B and No．25-24B),用正交试验确定较佳培养基组成,在37℃下摇瓶培养No．82一r17,培养液积累衣康酸3．5g／100ml,对供给糖转化率35％,从培养液回收衣康酸与标准衣康酸进行红外光谱测定,比较两者吸收曲线,确证它是衣康酸。     

宁南霉素产生菌的选育和发酵条件研究

以诺尔斯链霉菌西昌变种(Streptomyces noursei var.richangensis),作为原始菌株,利用紫外线,32P.镅镀中子源复合因子处理．再经自然分离．获得．株纯化株16A-6 146—7-98—6-5简称16A-6—5)。此突变株在高氏一号琼脂等培养基上．其培养特征和形态特征与原始菌株有明显区别。在玉米粉、花生饼粉培养基中．起始pH7．2．28C．摇瓶振荡培养72小时,宁南霉素含量为5 500u／ml.效价比原始菌株提高5倍,因此认为该突变株有工业应用前景。     

Mn2+对必特螺旋霉素产生菌代谢和必特螺旋霉素合成的影响

通过在必特螺旋霉素产生菌WSJ 1 195发酵过程中添加金属离子Mn2 发现 :发酵前期 (2 4h左右 )添加Mn2 可以明显提高生物效价 ,加入的Mn2 浓度以 5mmol L为最佳。实验显示添加Mn2 后发酵液pH逐渐下降 ,整个产素期间pH一直低于对照 ;与对照相比添加Mn2 摇瓶菌体浓度也较低。通过研究必特螺旋霉素发酵过程有机酸的变化趋势发现 :2 4h添加 5mmol LMn2 后发酵过程中有机酸含量已经发生变化 ,其中丙酸浓度的增长最为显著 ,84h时其浓度为对照的 6倍。通过丙酸盐的添加实验证实了发酵前期添加Mn2 可以促进产物合成的原因之一是促进了丙酸等前体酸的合成 ,丰富了大环内酯合成的前体库     

碱性普鲁兰酶产生菌选育和发酵条件的研究

从儿童食品中分离筛选到1株产碱性普鲁兰酶活性较高的菌株,编号为SX－12,初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.,研究了SX－12原生质体制备与再生最佳条件,其原生质体经紫外线诱变处理,选育出产碱性普鲁兰酶的高产菌株SX－12C67,酶活由出发菌株的2．42U/mL提高到6．87U／mL,提高了约1．8倍,在此基础上对产酶条件进行了优化,优化后的最佳发酵培养基为：可溶性淀粉3％,蛋白胨1．0％,酵母膏0．5％,K2HPO42％,MgSO4.7H2O0.05%MnCl20.0001%,最适p;H9.5,最适温度40℃,初步研究了酶的部分性质,酶反应的最适pH,温度分别为10．0－10．5和55℃,在55摄氏度反应条件下,酶在pH6.0-11.0的范围内都具有一定的活性,Ca^2 ,Mn^2 ,Mg^2 等离子是酶的激活性,Zn^2 ,Hg^2 等离子是抑制剂。     

Mn2+对必特螺旋霉素产生菌代谢和必特螺旋霉素合成的影响

通过在必特螺旋霉素产生菌WSJ1195发酵过程中添加金属离子Mn²⁺发现：发酵前期（24h左右）添加Mn²⁺可以明显提高生物效价,加入的Mn2+浓度以5mmol/L为最佳。实验显示添加Mn2+后发酵液pH逐渐下降,整个产素期间 pH一直低于对照;与对照相比添加Mn²⁺摇瓶菌体浓度也较低。通过研究必特螺旋霉素发酵过程有机酸的变化趋势发现：24h添加5mmol/L Mn2+后发酵过程中有机酸含量已经发生变化,其中丙酸浓度的增长最为显著,84h时其浓度为对照的6倍。通过丙酸盐的添加实验证实了发酵前期添加Mn²⁺可以促进产物合成的原因之一是促进了丙酸等前体酸的合成,丰富了大环内酯合成的前体库。     

莫能菌素高产菌株的诱变与筛选

采用紫外线对现有生产菌株进行诱变处理,再运用筛选剂丙酸、丁酸等对其进行选育,得到高产菌株M-3-01。投入中试车间发酵罐中,发酵效价达到50560×103u.L-1,其发酵能力比出发菌株提高了26%。     

β-胡萝卜素的生物合成与发酵促进剂

本文论述了β－胡萝卜素的生物合成途径及某些发酵助剂对微生物产β－胡萝卜素的影响。据对甘些植物和真菌产生β－胡萝卜素的研究,认为β－胡萝卜素及相关类胡萝卜素是一类自己酰ＣＯＡ开始的次生代谢产物。通过大量的研究实例表明,添加合适的发酵促进剂是提高β－胡萝卜素产量和降低生产成本非常有效的工艺学途径。     

益生素制剂菌种的选择研究及其进展

益生素作为一种活菌制剂已经在功能性食品以及医药行业中得到应用,选择新的和能满足特殊消费群体的菌种将成为近几年研究的重点。讨论了目前益生素研究中存在的问题,从安全性、功能性以及技术可行性三个方面对如何选择优良的益生素菌种进行了详细的探讨,综合了益生素制剂菌株选择研究的方法及手段,并对目前已经应用和研究的菌种作了简单介绍。     

保幼激素生物合成研究进展

保幼激素（juvenile hormone,JH）是存在于昆虫、甲壳动物和部分植物体内的倍半萜类衍生物。在昆虫和甲壳动物体内,保幼激素主要调节变态和生殖活动。在植物体内,则可能作为异株克生物质发挥作用。保幼激素主要通过细胞质内的甲羟戊酸途径（MVA）合成,植物质体内存在萜类合成的1-去氧木糖-5-磷酸途径（DXP）。MVA和DXP途径通过单向质子协同运输系统进行协调,使DXP途径中形成的前体化合物参与MVA途径的倍半萜合成。JH生物合成的主要步骤己基本查明,但与合成相关的酶学研究还较薄弱。生物合成酶的分子生物学是近来研究的热点,相关酶的cDNA克隆已有报道。JH生物合成酶的进一步研究有助于查明JH生物合成调控机制,深化对节肢动物生殖的理解,还可为新型杀虫剂开发提供可能的靶标。     

远端霉素高产菌株的选育

目的：选育远端霉素高产菌株。方法：以远端霉素产生菌（Streptomyces distallicus）D32为出发菌株,经铜蒸汽激光和5-氟尿嘧啶（5-fu）及其复合处理。结果：在复合诱变组中获得一株远端霉素高产稳产突变株DZ-206,经发酵罐应用后,其产率较出发菌株提高1．38倍。结论：该方法诱变谱广,突变率高,能够快速有效获得抗生素高产菌株。     

黑曲霉HS—16纤维素糖化菌的选育及在酒精发酵中的应用研究

本试验以有一定纤维素酶活力的黑曲霉Ａ．ｎｉｇｅｒＨＳ－００为出发菌株,经紫外光、激光、亚硝基胍复合诱变,选育出糖化稻草纤维素性能优良的Ａ．ｎｉｇｅｒＨＳ－１６菌株,其分解稻草纤维素产生还原糖的能力是出发菌株的５倍,还原糖生成率可达２８％。利用其稻草纤维素糖化液进行酒精发酵,酒化率为８４．８％。本试验还系统研究了影响稻草纤维素糖化的因素,确定了糖化用固体稻草培养基的最佳配方,分析了不同营养对酒精发酵     

植物萜类化合物的生物合成及应用

萜类化合物是植物中广泛存在的一类代谢产物,在植物生长、发育过程中起重要作用。植物中的萜类化合物有2条合成途径,即甲羟戊酸途径和甲基赤藓糖醇磷酸途径。这2条途径中都存在一系列调控萜类化合物生成、结构和功能各异的酶。植物萜类化合物不仅在植物生命活动中起重要作用,而且具有重要的商业价值,被广泛用于工业、医药卫生等领域。     

人参皂苷等萜类化合物生物合成途径及HMGR的研究进展

人参皂苷是人参的主要有效成分之一,属典型的萜类化合物。本文对萜类生物合成途径及HMG-CoA还原酶进行了综述。人参皂苷等萜类生物合成分为甲羟戊酸和丙酮酸两种途径,两者都是以异戊烯基焦磷酸为主要的中间产物。大量研究资料表明HMG-CoA还原酶是甲羟戊酸途径的第一个限速关键酶,这对人参皂苷生物合成途径及其调控的深入研究具有一定的参考价值。     

复合诱变和抗性筛选利迪链菌素高产菌株

为解决利迪链霉菌生产能力低的问题,以Streptomyces lydicus AS4.2501-P28为出发菌株,应用紫外和吖啶橙诱变,结合抗生素的抗性筛选,得到稳定高产的S.lydicus AS4.2501-L8,发酵水平达到177.0μg/mL,较出发菌株提高了96.2%。     

Rational surface engineering of an arginine deiminase (an antitumor enzyme) for increased PEGylation efficiency

Arginine deiminase (ADI) is a therapeutic protein for cancer therapy of arginine-auxotrophic tumors. However, its application as anticancer drug is hampered by its poor stability under physiological conditions in the bloodstream. Commonly, random PEGylation is being used for increasing the stability of ADI and in turn the improved half-life. However, the traditional random PEGylation usually leads to poor PEGylation efficiency due to the limited number of Lys on the protein surface. To boost the PEGylation efficiency and enhance the stability of ADI further, surface engineering of PpADI (an ADI from Pseudomonas plecoglossicida) to increase the suitable PEGylation sites was carried out. A new in silico approach for increasing the PEGylation sites was developed. The validation of this approach was performed on previously identified PpADI variant M31 to increase potential PEGylation sites. Four Arg residues on the surface of PpADI M31 were selected through three criteria and subsequently substituted to Lys, aiming for providing primary amines for PEGylation. Two out of the four substitutions (R299K and R382K) enhanced the stability of PEGylated PpADI in human serum. The average numbers of PEGylation sites were increased from ~12 (tetrameric PpADI M31, starting point) to ~20 (tetrameric PpADI M36, final variant). Importantly, the PEGylated PpADI M36 after PEGylation exhibited significantly improved T_m values (M31: 40°C; M36: 40°C; polyethylene glycol [PEG]-M31: 54°C; PEG-M36: 64°C) and half-life in human serum (M31: 1.9 days; M36: 2.0 days; PEG-M31: 3.2 days; PEG-M36: 4.8 days). These proved that surface engineering is an effective approach to increase the PEGylation efficiency which therefore enhances the stability of therapeutic enzymes. Furthermore, the PEGylated PpADI M36 represents a highly attractive candidate for the treatment of arginine-auxotrophic tumors.