野生型p53基因对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是介导白细胞与内皮细胞粘附的重要粘附分子．为研究野生型ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响,分别采用流式细胞术和ＲＴ－ＰＣＲ／ＨＰＬＣ方法测定ＩＣＡＭ－１蛋白及ｍＲＮＡ水平．静息状态的内皮细胞表面结构性地表达有少量的ＩＣＡＭ－１,在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα,１０～１０００Ｕ／ｍｌ）诱导下,其表达呈剂量依赖性增加．将ｐ５３基因导入内皮细胞,则显著抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达．ｐ５３基因的导入对静息状态内皮细胞表面结构性表达的ＩＣＡＭ－１影响较小．ｐ５３基因主要通过降低ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ水平而抑制内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达,但对蛋白的抑制程度小于对ｍＲＮＡ的抑制程度．提示：ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响除转录水平控制外,还存在转录后水平的调控     

缺氧—再给氧刺激培养的脑微血管内皮细胞表达细胞间粘附分子—1

在缺氧－再给氧条件下,观察了体外分离培养的大鼠脑微血管内皮细胞表面粘附分子ＩＣＡＭ－１的表达及中性粒细胞与内皮细胞粘附作用的改变。结果表明,单纯缺氧１０ｈ不引起内皮细胞ＩＣＡＭ－１的上调,再给氧６ｈＩ－ＣＡＭ－１的表达升高（Ｐ＜０．０１）,再给氧１２ｈ表达量增加了１００％（Ｐ＜０．０１）,此时中性粒细胞与内皮细胞的粘附作用也明显增强（Ｐ＜０．０１）。缺氧前用盐酸川芎嗪（２ｍｇ／ｍｌ）预处理内皮细胞可阻断ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０１）,同时也可降低ＰＭＮ与内皮细胞的粘附（Ｐ＜０．０５）。结果提示,脑微血管内皮细胞在缺氧－再给氧刺激下可自身调节Ｉ－ＣＡＭ－１的表达,为中性粒细胞与内皮细胞的粘附提供特异的结合位点。     

大鼠脑缺血—再灌注损伤细胞间粘附分子—1表达的研究

本文用暂时性脑缺血的大鼠模型对血管内皮细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）的表达进行了研究。免疫组化显示,ＩＣＡＭ１的表达于缺血１ｈ再灌６ｈ后明显升高;激光共聚焦扫描显微镜定量检测说明再灌后其表达量比单纯缺血增加了４７％。脑组织过氧化物酶ＭＰＯ（μ／ｇ）含量检测及光镜观察均证实再灌后白细胞在缺血区聚集增多。局部脑组织ＩＬ１含量（ＯＤ值／ｇ）在灌流３ｈ后明显升高。结果说明：①脑缺血再灌注损伤时血管内皮细胞ＩＣＡＭ１的表达为时间依赖性增加;②ＩＣＡＭ１的调节表达与脑损伤时局部细胞因子ＩＬ１的分泌有关;③再灌注后脑缺血区有白细胞的大量聚集;④ＩＣＡＭ１表达量的增加是白细胞在缺血区粘附到血管壁、游出血管损伤周围脑组织的前提条件。     

大鼠动脉内膜损伤后血管中的骨桥蛋白和基质Gla蛋白mRNA的表达变化

本实验采用球囊剥脱大鼠主动脉内皮造成血管内膜损伤的芭Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析,逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）等方法,研究大鼠主动脉内损伤后血管中的骨桥蛋白（ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ,ＯＰＮ）和基质Ｇｌａ蛋白（ｍａｔｒｉｘ Ｇｌａ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＧＰ）ｍＲＮＡ水平的动态变化。与无内皮损伤血管比较,损伤后的血管中ＯＰＮ和ＭＧＰ的ｍＲＮＡ水平明显升高,损伤后１,７,１４ｄ,两者的ｍＲＮＡ水平逐渐     

剪切应力下内皮细胞内皮素及其mRNA的表达

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹方法研究高血压（ＳＨＲ）和正常（ＷＫＹ）大鼠脑微血管培养内皮细胞,在剪切应力０、０．５、１、２Ｐａ作用下２４ｈ后检测内皮素及其基因ｍＲＮＡ表达上的区别。结果表明,在剪切应力０、０．５、１Ｐａ下,ＷＫＹ大鼠的内皮细胞随着剪切应力加大,其内皮素水平及其基因的ｍＲＮＡ的表达均比ＷＫＹ相应组的为高。在剪切应力２Ｐａ时,ＷＫＹ和ＳＨＲ大鼠的内皮细胞内皮素及其基因的ｍＲＮＡ表达水平不同     

缺氧和DDPH对人胚肺成纤维细胞前胶原mRNA表达的影响

用核酸原位杂交和图像分析等方法,观察直接缺氧（Ｈ）和缺氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞（ＫＭＢ１７）的前胶原ｐｒｏα１（Ⅰ）,ｐｒｏα１（Ⅲ）ｍＲＮＡ表达和抗高血压药１－（２,６－二甲基苯氧基）－２－（３,４－二甲氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对此过程的影响。结果发现,Ｈ和ＨＥＣＣＭ均可使ＫＭＢ１７的两型前胶原ｍＲＮＡ表达量增高,明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。ＤＤＰＨ对ＨＥＣＣＭ组细胞的Ⅰ,Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达增高均有显著的抑制作用（抑制率分别为－４３．９７％和－５６．２２％）,而对Ｈ组仅抑制ｐｒｏα１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ的过量表达（－５３．５８％）。提示缺氧可直接或通过肺动脉内皮细胞的介导,促进人胚肺成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达,ＤＤＰＨ在基因转录水平上对此过程有抑制作用     

MRL lpr/lpr自发狼疮鼠血管紧张素Ⅱ受体的基因表达及其在发病中的作用

目的：探讨血管紧张素Ⅱ受体在系统性红斑狼疮发病中的作用。方法：利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）的方法检测ＭＲＬｌｐｒ／ｌｐｒ自发狼疮鼠和ＭＲＬ系小鼠８和１８周时肾、心、肺、肝、脑、垂体、肾上腺、睾丸、卵巢和子宫组织中血管紧张素ⅡＡＴ１Ａ、ＡＴ１Ｂ和ＡＴ２受体的基因表达。结果：在１８周龄ＭＲＬｌｐｒ／ｌｐｒ小鼠肾、心、肺、肝、脑和睾丸等明显受损伤的组织中,ＡＴ１Ａ受体的ｍＲＮＡ表达有显著升高,而ＡＴ１Ｂ和ＡＴ２受体的基因表达与ＭＲＬ小鼠８和１８周时及ＭＲＬｌｐｒｌ／ｌｐｒ小鼠末发病（８周龄）时比较则无明显改变。应用血管紧张素转化酶抑制剂盐酸苯那普利治疗后,１８周龄ＭＲＬｌｐｒ／ｌｐｒ小鼠的尿蛋白和肾、心、肺、肝、脑和睾丸组织中ＡＴ１Ａ受体的ｍＲＮＡ水平显著降低,但上述脏器的病理损伤无明显减轻。结论：ＡＴ１Ａ受体参与了狼疮导致的多脏器损伤过程并起到一定作用。     

GABA减缓缺氧引起的神经营养素mRNA表达量的变化

γ－氨基丁酸是中枢神经系统中的一种内源性抑制递质。近年已有实验证据揭示ＧＡＢＡ具有抵抗中枢神经元缺氧或缺血损伤的作用,但其机制尚不清楚。脑源性神经营养因子ＢＤＮＦ,神经生长因子ＮＧＦ和神经营养素－３是同一家族的成员,它们在海马脑区均有表达。为研究ＧＡＢＡ抗缺氧作用的机制,我们以培养的海马ＣＡ１神经元为材料,采用原位杂交的方法检测了缺氧后ＢＤＮＦｍＲＮＡ,ＮＧＦｍＲＮＡ和ＮＴ－３ｍＲＮＡ表达量的变化以及ＧＡＢＡ对这种变化的影响。结果显示,缺氧使ＮＧＦｍＲＮＡ和ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速上调且前者的变化极为剧烈,而ＮＴ－３ｍＲＮＡ的表达量显著下降;用２０μＭ的ＧＡＢＡ处理细胞后,上述缺氧引起的神经营养因子ｍＲＮＡ表达量的上升或下降幅度均被减缓,其中对ＮＧＦｍＲＮＡ表达量变化的影响最为显著。这些结果表明,ＧＡＢＡ具有稳定缺氧后ＢＤＮＦｍＲＮＡ,ＮＧＦｍＲＮＡ和ＮＴ－３ｍＲＮＡ表达水平的作用。推测这种作用与ＧＡＢＡ增加氯电导,维持钙稳态以及提高神经元的抗缺氧能力的效应有一定联系     

MRL lpr／lpr自发狼疮鼠血管紧张素Ⅱ受体的基因表达及？…

目的：探讨血管紧张素Ⅱ受体在系统性红斑狼疮性发病中的作用。方法 利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法检测ＭＲＬｌｐｒ／ｌｐｒ自发狼疮鼠和ＭＲＬ系小鼠８和１８周时肾,心,肺,肝,脑,垂体,肾上腺,睾丸,卵巢和子宫组织中血管紧张素ⅡＡＴ１Ａ,ＡＴ１Ｂ和ＡＴ２受体的基因表达,结果：在１８周龄ＭＲＬｌｐｒ／ｌｐｒ小鼠肾,心,肺,肝,脑和睾丸等明显受损伤的组织中,ＡＴ１Ａ受体的ｍＲＮＡ表达有显著升     

秋水仙素对大鼠前脑生长抑素mRNA表达的影响

本实验用地高辛标记生长抑素（ＳＯＭ）反意。ＲＮＡ探针原位杂交组织化学研究了秋水仙素对大鼠前脑ＳＯＭｍＲＮＡ表达的影响。结果表明秋水仙素对前脑各核区ＳＯＭｍＲＮＡ的表达有明显的影响。结果表明秋水仙素对前脑各核区ＳＤＭｍＲＮＡ的表达有明显的核区特异性：大脑新皮质各区,隔核和脚内核中ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元数目及含量增加;海马复合体和下丘脑室周核和弓状核中ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元数目及含量下降;嗅脑,尾壳核和丘脑等核区的则无明显变化、秋水仙素对ＳＯＭｍＲＮＡ表达的核区特异性对正确分析秋水仙素条件下获得的神经肽或神经递质的定位资料具有重要的指导意义。     

慢性缺氧对大鼠肺内皮素表达的影响

本文以ＡＢＣ法和原位杂交技术,观察了慢性缺氧时大鼠肺组织内内皮素－１（ＥＴ－１）的表达情况,结果发现：①正常肺血管内皮细胞有少许ＥＴ－１样阳性染色物质呈现。②缺氧ＩＷ后,肺内ＥＴ－１含量增加,主要位于肺血管内皮细胞和支气管粘膜上皮细胞。③缺氧２Ｗ和３Ｗ后,ＥＴ１阳性免疫物质进一步增加,于肺泡细胞内也见到阳性染色。④缺氧１Ｗ后肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达增加,缺氧２Ｗ和３Ｗ后,ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达进一步加强。提示缺氧可刺激肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达,慢性缺氧时肺内ＥＴ－１持续分泌增加,这可能是缺氧性肺动脉高压发生的重要因素之一。     

内皮素-1 mRNA反义寡核苷酸预防大鼠急性缺血性心律失常

本实验夹闭雄性ＳＤ大鼠冠状动脉左前降支（ＬＡＤ）造成急性心肌缺血,观察ＬＡＤ闭塞后１ｈ内缺血性心律失常的发生。在ＬＡＤ夹闭前２ｈ,静脉注射本室设计的人内皮素－１ｍＲＮＡ反义寡核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）以阻断ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,观察ＡＳ－ＯＤＮ对血浆ＥＴ－１浓度和急性缺血性心律失常的影响。     

钙调素mRNA在受精前后分离的烟草胚囊中的定位

建立了一种新的ｍＲＮＡ原位杂交方法,适用于微量材料的整体观察。应用这一方法定位烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．ｃｖ．Ｗ３８）受精前后胚囊成员细胞中的钙调素ｍＲＮＡ（ＣａＭｍＲＮＡ）。结果显示成熟胚囊中的ＣａＭｍＲＮＡ主要分布于珠孔极的卵器和合点极的反足细胞;中央细胞中较少。受精前后胚囊中ＣａＭｍＲＮＡ的分布发生显著变化,特别是授粉后到受精前极核与卵器之间出现一条暂时的钙调素ｍＲＮＡ条带。受精前不久该带消失,ＣａＭｍＲＮＡ扩展为占据胚囊珠孔端的扇形区域。受精后胚囊中钙调素ｍＲＮＡ主要集中于伸长的合子和原胚的合点端。讨论了钙调素ｍＲＮＡ表达与受精的关系。     

mRNA降解机制的新进展

ｍＲＮＡ降解机制的新进展侯学文郑穗平（华南理工大学生物工程系,广州５１０６４１）关键词ｍＲＮＡ降解虽然人们已对ｍＲＮＡ降解过程有大致了解,但对某些细节问题尚未完全弄清。最近Ｂｅｅｌｍａｎ及其合作者对降解过程中的关键酶ＤＣＰ１的研究,使酵母中ｍＲＮＡ降...     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

mRNA差异展示PCR的进展

ｍＲＮＡ差异展示ＰＣＲ的进展崔大祥闫小君苏成芝（第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所,西安７１００３２）关键词ｍＲＮＡ差异展示聚合酶链反应ｍＲＮＡ差异展示（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ,ＤＤ）是目前筛选差异表达基因最有效的方法,自１...     

炎性刺激下中性粒细胞血管内皮细胞粘附的单细胞定量研究

炎性刺激下中性粒细胞血管内皮细胞粘附的单细胞定量研究周向东龙勉１（第三军医大学大坪医院,重庆６３００３８;重庆大学生物工程研究院１）中性粒细胞（ＰＭＮ）粘附于血管内皮细胞（ＶＥＣ）是炎性过程的第一步,故此两种细胞在致炎因素作用下其粘附特性的改变情况...     

mRNA差异显示技术在动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用

动物从卵裂开始的早期胚胎发育始终伴随着ｍＲＮＡ不断的合成与降解。最初受着受精卵内母体ｍＲＮＡ的控制。当这些ｍＲＮＡ在发育过程中逐渐被降解时,有些动物（如小鼠）在比较早的时期已有新基因的转录;而有些动物（如鱼类、两栖类）迟到囊胚中期以后,合子核的基因才开始转录新的ｍＲＮＡ。ｍＲＮＡ这种有规律的代谢活动控制着细胞的分化、胚层的形成以及模式形成（ｐａｔｅｒｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）。所有这些ｍＲＮＡ水平上的变化都可以用ｍＲＮＡ差异显示法（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ）检测出来并进而获得与早期胚胎发育有关的基因。ｍＲＮＡ差异显示法是由Ｌｉａｎｇ和Ｐａｒｄｅｅ于１９９２年建立起来的,用于显示两种不同组织之间ｍＲＮＡ差异的方法。基于绝大多数ｍＲＮＡ有一个ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴,选用一个较特殊的３’端引物─５’Ｔ１１ＭＮ３’,其中Ｍ可以是ｄＡＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,而Ｎ可以是ｄＡＴＰ,ｄＴＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,进行逆转录时,１／１２的ｍＲＮＡ可被逆转录为ｃＤＮＡ。这种ｃＤＮＡ第一链被用来ＰＣＲ扩增,所使用的３’端引物与逆转录引物相同,而５’端引物为１０个碱基的一段寡核苷酸,这类任意（ａｒｂｉｔｒａｒ     

AngⅡ和PKC对心肌细胞AngⅡ 1型受体的转录调节

利用体外培养的心肌细胞,观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在诱导ＡｎｇⅡ１型受体（ＡＴ１）基因表达及蛋白质代谢中的作用．研究结果表明：ＡｎｇⅡ可诱导ＡＴ１ｍＲＮＡ水平一过性下调,呈时间及剂量依赖性,１０ｎｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ刺激细胞６ｈ,引起ＡＴ１ｍＲＮＡ水平降低幅度最大,降至对照的５１．６％±９．５％,然后逐渐回升,２４ｈ恢复至对照水平．３０μｍｏｌ／ＬＨ－７（ＰＫＣ抑制剂）能阻断ＡｎｇⅡ诱导的ＡＴ１ｍＲＮＡ水平的下调．０．３μｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＡ（ＰＫＣ激活剂）单独应用可诱导ＡＴ１ｍＲＮＡ水平下调达对照的４３％±８％,加入ＡＴ１拮抗剂ＤＭＰ８１１及Ｄｕｐ７５３均可阻断ＡｎｇⅡ诱导的ＡＴ１ｍＲＮＡ水平的下调．１０ｎｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ刺激心肌细胞９６ｈ可使蛋白含量降低至对照的７３．４％±５．６％,而加药持续刺激１４４ｈ可使蛋白含量较对照增加３３．８％±６．３％,Ｈ－７不能阻断ＡｎｇⅡ诱导的蛋白含量降低,但可有效地抑制蛋白含量的增加．以上结果提示：ＡｎｇⅡ对心肌细胞ＡＴ１基因的转录和细胞的蛋白代谢有调节作用,而ＰＫＣ则参与了ＡｎｇⅡ的这种调节作用     

人MAdCAM—1分子的研究进展

ＭＡｄＣＡＭ－１分子（ｍｕｃｏｓａｌ ａｄｄｒｅｓｓｉｎ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１）是一种属于免疫球蛋白超家族的粘附分子,在小鼠体内其主要表达于肠道粘膜相关淋巴组织及固有层的血管内皮细胞上,可与淋巴细胞上的配体分子整合素α４β７及选择素Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ结合,在介导淋巴细胞向粘膜部位的定向白 担当重要角色。近年来人们开始对人体中ＭＡｄＣＡＭ－１分子的一些情况进行了研究,并