TGF-β1诱导的Postn、α-SMA和CollagenⅠ在宫腔粘连内膜组织中高表达与粘连严重程度相关

骨膜蛋白（periostin, Postn）与转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1,TGF-β1）信号通路活动密切相关,并参与多种纤维化疾病的病理形成,但在宫腔粘连（intrauterine adhesions,IUAs）形成过程中的作用机制尚不清楚。为了解Postn与纤维标志物（α-平滑肌肌动蛋白：alpha smooth muscle actin,α-SMA,Ⅰ型胶原：CollagenⅠ）在宫腔粘连发病中的作用,本研究收集宫腔粘连（实验组）轻、中、重度各20名患者的内膜组织,非宫腔粘连者20名（对照组）,利用实时荧光定量PCR技术、Western印迹技术和免疫组化染色证明：Postn与α-SMA、CollagenⅠ在mRNA和蛋白质表达水平的趋势一致,且与宫腔粘连严重程度呈正相关;实验组Postn、α-SMA 和 CollagenⅠ较对照组明显升高,其中以中、重度宫腔粘连患者内膜组织Postn、α-SMA和CollagenⅠ表达有非常显著的统计学差异（P＜0.01）。同时,为探究TGF-β1与Postn等纤维标志物的关系,利用重组人转化生长因子TGF-β1刺激原代子宫内膜基质细胞后,Western印迹结果显示,TGF-β1与Postn、α-SMA和CollagenⅠ蛋白质表达变化呈现剂量和时间依赖关系。上述结果证实,内膜纤维化是宫腔粘连的主要特征,由Postn等纤维产物参与形成,且与粘连程度相关。推测该病理过程可能与内膜损伤后,TGF-β1促使子宫内膜基质细胞成纤维分化、诱导Postn持续高表达有关。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤中Notch1信号通路的影响

目的：观察厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤的作用,分析Notch1信号通路在其中的变化。方法：实验分4组：正常对照组（CON）、高糖高脂组（HC）、糖尿病组（DM）和厄贝沙坦+糖尿病组（Ir+DM）。制作2型糖尿病（T2DM）大鼠模型成功后,第8周开始检测大鼠空腹血糖水平（FBG）、全心质量及左心室重量,计算心脏指数（H/B）及左室重量指数（LVWI）,检测大鼠血浆甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）水平,检测心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量变化,免疫组化检测Bcl-2、Bax表达变化,Western blot检测大鼠心肌组织Notch1、Hes-1及Jagged-1的蛋白表达。结果：与CON组相比,HC组H/B、LVWI、FBG无明显变化,血脂、MDA含量明显升高,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1、Hes-1、Jagged-1蛋白表达降低;与HC组相比,DM组H/B、LVWI、FBG、MDA含量增加明显,血脂水平无明显变化,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1信号通路蛋白表达进一步降低;与DM组相比,厄贝沙坦干预组H/B、LVWI明显降低,血脂、血糖水平无明显变化,但SOD活性、Bcl-2/Bax增加,MDA含量降低,同时Notch1信号通路相关蛋白表达增加。结论：糖尿病可导致大鼠发生心肌损伤,厄贝沙坦可能通过增强Notch1信号通路的表达发挥心肌保护作用。     

Notch 通路在大鼠肝纤维化发生发展中作用的初探

目的:研究Notch通路在肝纤维发生发展中作用及可能的分子机制。方法:Wistar大鼠40只随机分为正常对照组与病理模型组,病理模型组皮下注射四氯化碳制备肝纤维化模型。8周后将大鼠处死,取肝组织行病理HE染色评价肝纤维化程度并采用免疫组织化学法检测Notch-1蛋白、E-cadherin蛋白与TGF-β1蛋白的表达。结果:肝组织病理HE染色示肝纤维化大鼠肝脏肝细胞坏死、再生明显,胶原纤维沉积明显增加,肝实质结构紊乱。与正常对照组相比,病理模型组notch-1与TGF-β1蛋白表达明显增加,而E-cadherin蛋白的表达明显下降(P<0.01)。结论:Notch通路在大鼠肝纤维化发生发展中可能起重要作用。     

RNA干扰Mcl-1基因表达对淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨抑制Mcl-1基因表达对淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:NC-siRNA、Mcl-1-siRNA转染Raji细胞,以不作任何处理的细胞作为空白对照组,48h后Western blot检测各组细胞中Mcl-1的蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况;Western blot检测Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果:转染Mcl-1-siRNA后Mcl-1的蛋白表达显著降低;与对照组及NC-siRNA组比较,Mcl-1-siRNA组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白显著上调表达,Notch1和Hes1蛋白显著下调表达。结论:RNA干扰抑制Mcl-1基因表达可显著降低Raji细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

LDH影像分级与DKK-1的负相关可能与Wnt信号通路的调控有关

本研究选择了100例腰椎间盘突出症(lumbar disk herniation, LDH)患者为观察组,以同期健康体检者20例为对照组,采用Western blotting法检测血清中Dickkopf相关蛋白1 (dickkopf-related protein 1, DKK-1)的表达水平,用ELISA法检测两组血清中DKK-1含量,试图分析血清中DKK-1与LDH影像学分级的相关性及其作用机理。研究结果显示,LDH患者的血清中DKK-1含量水平明显低于正常对照组。Western blotting法检测发现LDH患者影像分级与DKK-1的蛋白水平呈负相关;而ELISA法检测也证实LDH患者影像分级与DKK-1水平呈负相关。LDH患者影像分级与Wnt信号通路相关蛋白β-catenin呈正相关。本研究初步说明,腰椎间盘突出症影像分级与DKK-1水平呈负相关,而该相关性与Wnt信号通路的相关蛋白β-catenin调控有关。     

转录因子Hey1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的检测Hey1与Notch1在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨Hey1在非小细胞肺癌中的表达与Notch1的表达、各临床病理特征之间的关系。方法制作组织芯片,采用免疫组织化学染色检测Notch1和Hey1在246例非小细胞肺癌组织及相应117例癌旁正常肺组织中的表达,应用SPSS 21.0进行统计分析。结果 Notch1在肺鳞癌、肺腺癌和癌旁正常肺组织的阳性率分别为78.8%,28.9%和30.8%,Hey1在肺鳞癌、肺腺癌和癌旁正常肺组织中的阳性率分别为79.7%,23.4%和33.3%;肺鳞癌患者Notch1阳性表达与TNM分期和淋巴结转移情况呈正相关;肺鳞癌患者Hey1阳性表达与TNM分期呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关;Spearman相关分析显示,肺鳞癌和肺腺癌组织中Notch1表达与Hey1表达具有显著的正相关关系。结论 Hey1和Notch1与肺鳞癌的恶性程度密切相关,可能是肺鳞癌发生、发展的重要参与因子。     

Notch 家族四个蛋白质在人胰腺癌细胞 HPAC 中对 YY1 和 EGFR水平的影响

Notch信号通路是肿瘤形成过程中一种重要的信号通路,其中心分子为Notch受体. Notch受体为细胞膜上的单次跨膜蛋白,介导细胞间信号转导,哺乳动物细胞内包括Notch1、Notch2、Notch3和Notch4的4个成员. Notch家族4个蛋白质在结构和功能上存在差异.前期研究显示,Notch1信号通路与转录因子YY1（YING-YANG 1）、表皮生长因子受体（EGFR）间存在调控作用. 本研究在人胰腺癌细胞HPAC中,采用RNA干扰技术,分别降低细胞中Notch家族4个蛋白质的表达,检测YY1和EGFR在mRNA和蛋白质水平上的表达;并构建相应的激活形式的Notch受体--Notch胞内结构域（Notch intracellular domain,NICD）真核表达质粒,在HPAC细胞中分别过表达4种NICD,检测其对YY1和EGFR表达水平的影响. 结果显示,降低细胞中Notch1或Notch3的表达,均使HPAC细胞中EGFR mRNA和蛋白质水平升高（P<0.05）,而降低Notch2和Notch4后,EGFR mRNA和蛋白质水平没有改变（P>0.05）.分别降低4个Notch的表达,对YY1的蛋白质和mRNA表达水平均没有改变（P>0.05）. 在HPAC细胞中过表达N1ICD和N3ICD后,YY1和EGFR的蛋白质水平降低（P<0.05）,而过表达N2ICD和N4ICD后,YY1和EGFR蛋白质水平没有改变（P>0.05）.分别过表达4种NICD均没有改变YY1和EGFR的mRNA表达水平（P>0.05）.初步得出结论是,在HPAC细胞中,Notch信号通路经Notch1和Notch3影响EGFR的表达. Notch1和Notch3对EGFR的表达可能具有负调控作用. 在Notch1和Notch3过度激活时,这种调控作用通过YY1介导. 本文可为深入研究Notch信号通路对胰腺癌发生发展的作用机制提供有意义的参考.     

小肠腺癌组织中Notch1和P53免疫反应性增强

目的研究小肠腺癌中Notch1、Numb、P53和P63蛋白的免疫组织化学表达情况及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测含有60例小肠腺癌(small intestinal adenocarcinoma,SIA)组织芯片中Notch1、Numb、P53和P63蛋白的表达情况,与9例正常小肠组织进行对照,并进行统计学分析。结果在小肠腺癌组织中,Notch1免疫组织化学染色阳性率显著高于正常小肠组织,Notch1蛋白在小肠腺癌中的免疫组织化学表达与肿瘤TNM分期相关,而与年龄和性别不相关。P53在小肠腺癌组织中的免疫组织化学表达为41.7%,P53在正常小肠组织中无表达。Numb蛋白在小肠腺癌组织和正常小肠组织中阳性表达率分别为68.3%和77.8%,二者比较无统计学差异。Numb蛋白在小肠腺癌组织表达缺失率为31.7%。P63在小肠腺癌组织中表达率为5%,而在正常小肠组织中不表达。P53和Numb表达均与年龄、性别、TNM分期等临床病理参数不相关。相关分析显示,小肠腺癌中Numb与Notch1,P53与Numb、Notch1表达之间无相关性。结论小肠腺癌组织中存在Notch1的过表达,且与小肠腺癌的进展相关,部分病例Numb蛋白表达缺失及P53突变,Numb-Notch1信号通路蛋白可能参与了小肠腺癌的发生机制。     

流产术后并发宫腔粘连的危险因素分析及宫腔镜联合雌孕激素的干预效果研究

目的:分析流产术后并发宫腔粘连的危险因素,并探讨宫腔镜联合雌孕激素对宫腔粘连的干预效果,以期为宫腔粘连的防治提供依据。方法:选取2016年1月至2017年2月于我院接受流产术后并发宫腔粘连的患者100例作为粘连组,另选取同期于我院接受流产术后未发生宫腔粘连的患者100例作为未粘连组。比较粘连组和未粘连组患者基本资料、既往史情况、手术指标,并采用多因素Logistic回归分析流产术后并发宫腔粘连的危险因素。进一步将粘连组按照随机数字表法分成对照组(n=50)和观察组(n=50),对照组患者进行雌孕激素治疗,观察组患者进行宫腔镜联合雌孕激素治疗。比较观察组与对照组患者治疗3个周期后首次月经情况以及临床疗效。结果:粘连组孕次、产次、吸宫时负压、吸宫时间以及合并盆腔炎时间均高于未粘连组,差异均有统计学意义(P0.05)。经多因素Logistic回归分析可得,吸宫时负压≧500 mm Hg、吸宫时间≧15 min为流产术后并发宫腔粘连的危险因素(P0.05)。观察组治疗3个周期后首次月经量减少发生率、首次月经中期子宫内膜厚度≤8 mm发生率低于对照组,治疗有效率高于对照组(P0.05)。结论:吸宫时负压≧500 mm Hg、吸宫时间≧15 min均属于流产术后并发宫腔粘连的独立危险因素,临床应根据以上危险因素采取相应预防措施,以减少宫腔粘连的发生。而对于已发生宫腔粘连的患者,采用宫腔镜联合雌孕激素治疗具有较好的干预效果,值得在临床上推广应用。     

miR-152-3p调控Notch1/DLL4通路对家兔深II度烧伤创面血管生成的影响

摘要 目的：探究微小核糖核酸（miR）-152-3p调控果蝇Notch同源物1（Notch1）/Delta样配体4（DLL4）通路对家兔深II度烧伤创面血管生成的影响。方法：将50只新西兰家兔随机分为对照组、模型组、miR-152-3p拮抗剂（antagomir）组、miR-152-3p antagomir阴性对照+空载组、miR-152-3p antagomir+Notch1敲低组,每组10只,除对照组外其余各组家兔构建深II度烧伤模型,分组给药处理后,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测各组家兔创面组织miR-152-3p与Notch1、DLL4 mRNA表达;检测各组家兔创面愈合率及微循环血流灌注值（MPD）;免疫组织化学染色检测各组家兔创面微血管密度（MVD）;酶联免疫吸附反应（ELISA）检测各组家兔血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）及促血管生成素1（Ang1）水平;免疫印迹检测各组家兔创面组织VEGF、Ang1与Notch1/DLL4通路蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测兔脐静脉内皮细胞中miR-152-3p对Notch1及DLL4的靶向调节。结果：与对照组相比,模型组家兔创面组织miR-152-3p与Notch1、DLL4 mRNA表达升高（P<0.05）,创面MPD及MVD、血清VEGF及Ang1水平、创面组织VEGF与Ang1蛋白表达降低（P<0.05）。与模型组相比,miR-152-3p antagomir组家兔创面组织miR-152-3p mRNA表达降低（P<0.05）,创面愈合率、创面MPD及MVD、血清VEGF及Ang1水平、创面组织Notch1、DLL4 mRNA及蛋白表达、创面组织VEGF与Ang1蛋白表达升高（P<0.05）;miR-152-3p antagomir阴性对照+空载组家兔各指标无明显差异（P＞0.05）;与miR-152-3p antagomir组相比,miR-152-3p antagomir+Notch1敲低组家兔创面组织miR-152-3p mRNA表达无明显差异（P＞0.05）,创面愈合率、创面MPD及MVD、血清VEGF及Ang1水平、创面组织Notch1、DLL4 mRNA及蛋白表达、创面组织VEGF与Ang1蛋白表达降低（P<0.05）。miR-152-3p可靶向下调兔脐静脉内皮细胞中Notch1及DLL4的表达。结论：敲低miR-152-3p可通过上调Notch1/DLL4通路而增强家兔深II度烧伤创面血管生成,进而促进其创面愈合。     

Inhibition of Jagged-mediated Notch signaling disrupts zebrafish biliary development and generates multi-organ defects compatible with an Alagille syndrome phenocopy

The Alagille Syndrome (AGS) is a heritable disorder affecting the liver and other organs. Causative dominant mutations in human Jagged 1 have been identified in most AGS patients. Related organ defects occur in mice that carry jagged 1 and notch 2 mutations. Multiple jagged and notch genes are expressed in the developing zebrafish liver. Compound jagged and notch gene knockdowns alter zebrafish biliary, kidney, pancreatic, cardiac and craniofacial development in a manner compatible with an AGS phenocopy. These data confirm an evolutionarily conserved role for Notch signaling in vertebrate liver development, and support the zebrafish as a model system for diseases of the human biliary system.     

Notch: from neural development to neurological disorders

Notch is an integral membrane protein that functions as receptor for ligands such as jagged and delta that are associated with the surface of neighboring cells. Upon ligand binding, notch is proteolytically cleaved within its transmembrane domain by presenilin‐1 (the enzymatic component of the γ‐secretase complex) resulting in the release of a notch intracellular domain which translocates to the nucleus where it regulates gene expression. Notch signaling plays multiple roles in the development of the CNS including regulating neural stem cell (NSC) proliferation, survival, self‐renewal and differentiation. Notch is also present in post‐mitotic neurons in the adult CNS wherein its activation influences structural and functional plasticity including processes involved in learning and memory. Recent findings suggest that notch signaling in neurons, glia, and NSCs may be involved in pathological changes that occur in disorders such as stroke, Alzheimer’s disease and CNS tumors. Studies of animal models suggest the potential of agents that target notch signaling as therapeutic interventions for several different CNS disorders.     

Notch-Hif-1-alpha信号通路参与调控大鼠肝再生过程的研究

目的：探讨使用酌分泌酶抑制剂Fli-06 特异性阻断Notch 信号通路后,大鼠肝部分切除术后肝再生的情况并初步阐明 Notch-Hif-1-alpha信号通路调控肝再生的可能机制。方法：取SD 大鼠分为对照（生理盐水注射组,n=24）和抑制剂组（酌分泌酶抑制剂 注射组,n=24）。给予药物处理后,两组分别施行大鼠肝部分切除术,术后0 d,1 d,3 d,5 d,每个时间点分别留取对照组（n=6）及抑 制剂组（n=6）再生的肝组织,并检测相应肝重体重比,免疫组化法检测再生肝PCNA（增殖细胞核抗原,Proliferation Cell Nuclear Antigen）表达,RT-PCR 检测再生肝组织中的Notch1、Hes1、VEGF mRNA的变化,Western-Blot 法检测NICD（Notch 胞内段,Notch Intracellular Domain）、Hif-1-alpha（低氧诱导因子-1-alpha,Hypoxia Inducible Factor-1琢)蛋白在肝再生过程的变化情况。结果：1、肝部分切除 术后3 d和5 d,抑制剂组肝重体重比明显低于对照组差异有统计学意义（P<0.05）;2、免疫组织化学染色结果提示：抑制剂组再生 肝PCNA阳性细胞率在术后1 d,3 d,5 d 均明显低于对照组（P<0.05）;3、Western blot 结果表明：NICD 和Hif-1-alpha蛋白水平明显低 于对照组（P<0.05）;同时RT-PCR 结果提示：抑制剂组Hes1 的mRNA表达量术后1 d,3 d明显低于对照组,差异具有统计学意义 （P<0.05）。同时,抑制剂组VEGF mRNA 水平在术后3 d,5 d明显低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：在大鼠肝部分 切除术后肝再生过程中,使用酌分泌酶抑制剂Fli-06 抑制Notch 信号通路后,大鼠的肝再生能力明显降低,Notch-Hif-1alpha信号通 路可能参与调控了大鼠肝部分切除术后肝再生过程。     

Management of intrauterine adhesions using human amniotic mesenchymal stromal cells to promote endometrial regeneration and repair through Notch signalling

Intrauterine adhesions (IUAs) severely hamper women's reproductive functions. Human amniotic mesenchymal stromal cell (hAMSC) transplantation is effective in treating IUAs. Here, we examined the function of Notch signalling in IUA treatment with hAMSC transplantation. Forty-five Sprague-Dawley female rats were randomly divided into the sham operation, IUA, IUA + E2, IUA + hAMSCs and IUA + hAMSCs + E2 groups. After IUA induction in the rats, hAMSCs promoted endometrial regeneration and repair via differentiation into endometrial epithelial cells. In all groups, the expression of key proteins in Notch signalling was detected in the uterus by immunohistochemistry. The results indicated Notch signalling activation in the hAMSCs and hAMSCs + E2 groups. We could also induce hAMSC differentiation to generate endometrial epithelial cells in vitro. Furthermore, the inhibition of Notch signalling using the AdR-dnNotch1 vector suppressed hAMSC differentiation (assessed by epithelial and mesenchymal marker levels), whereas its activation using the AdR-Jagged1 vector increased differentiation. The above findings indicate Notch signalling mediates the differentiation of hAMSCs into endometrial epithelial cells, thus promoting endometrial regeneration and repair; Notch signalling could have an important function in IUA treatment.     

Notch信号在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化过程中的作用

目的:探讨Notch信号通路在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化中的作用。方法:实验分为未转染组、转染组(转染Rn-Notch1-siRNA)、阳性对照组(转染Rn-MAPK-1 Control siRNA)及阴性对照组(转染Negative Control siRNA)等4组。采用盐酸法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs转染后荧光表达情况;RT-PCR检测Notch1、Hes1和MAPK1 mRNA的表达变化;免疫细胞化学法检测Notch1、神经元烯醇化酶(NSE)、神经微丝蛋白亚单位(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化;MTT方法检测细胞存活率。结果:①siRNA转染72h,MSCs荧光表达最强,转染率可达91.3%±4.2%;同时,转染组MSCs的Notch1和Hes1 mRNA转录下降(P0.05);MTT提示转染组细胞存活率也显著减少(P0.05)。②盐酸法舒地尔可以诱导MSCs向神经元分化,其中以转染组诱导效果最佳,NSE、NF-M的表达率显著的高于其它各组(P0.05)。结论:盐酸法舒地尔在诱导大鼠MSCs向神经元分化过程中,可能存在Notch信号通路与RhoA/Rho激酶通路信号的协同作用,共同促进MSCs向神经元分化。