造血素的新用途?

到目前为止,美国食品药物管理局(FDA)只批准AZT这一种药物用于治疗艾滋病,而AZT又常常引起骨髓生长抑制和贫血等副作用,以前进行的初步研究结果表明,重组人类造血素(EPO)可使那些体内EPO水平低的艾滋病患者的贫血症有所好转.这一结果已被进一步的研究证实,这样,重组EPO有希望被用于减少经AZT治疗的艾滋病患者的输血需求量.这是个好消息,因为在一系列疾病和过程(包括器官移植、结肠癌,也可能包括艾滋病)当中,血液传输常与免疫抑制作用有关.此外,如果AZT仍是最好的治     

促红细胞生成素对血液透析患者血浆脂联素水平及左心室肥厚的影响

目的:促红细胞生成素(EPO)在维持性血液透析患者中具有保护心血管的作用,本文旨在探讨EPO在血液透析病人中对脂联素(ADPN)水平及左心室肥厚的影响。方法:46名维持性血液透析患者用EPO治疗8周,分别在治疗前,治疗第2、4、8周后测定血红蛋白(Hb),红细胞压积(Hct),血浆白蛋白(ALB),体重指数(BMI),C反应蛋白(CRP),血清铁蛋白(SF),血清铁饱和度(TAST),ELISA测定ADPN水平;彩色多普勒超声测定左心室心肌重量(LVM)及计算左心室心肌重量指数(LVMI)。结果:血液透析患者血清ADPN水平高于正常人;用EPO治疗2周后即出现ADPN水平升高,第4周后ADPN水平进一步升高,第8周与第4周比较无明显变化;应用EPO可降低CRP、SF水平;ADPN是LVMI的重要影响因子,EPO可改善左心室肥厚与功能。结论:EPO可提高血液透析患者ADPN水平,降低CRP、SF水平,减轻左心室肥厚。     

动态

当初,欧洲专利局(EPO)(Munich,Germany)否决了哈佛大学转基因小鼠“oncomouse”的专利申请。二年后的今天,EPO转变态度并决定批准这项专利。此专利将在14个EPO欧洲成员国中的11个国家生效,其中包括英国、法国、德国和意大利。早在3年前美国就批准了一项有关这种小鼠的专利。哈佛大学技术和商标许可证发放处主任,Joyce Brinton对本刊记者说,哈佛大学对此决定表示欣喜。然而她又指出,反对者仍有九个月时间可以表明他们的观点,阻挠专利批准。必然有很大的势力反对     

生物制药的现状和未来（二）：发展趋势与希望

随着基因组和蛋白质组研究的深入,越来越多的与人类疾病发展相关的靶标被确定,使得我们能够研发更精确的药物来防治这些疾病。这意味着生物制药将有更多机会获得突破性进展,最终将使更多更好的生物技术药物被批准上市。综述了生物制药发展的几个趋势,主要有:(1)哺乳动物细胞表达的产品将在相当长的时间内占统治地位;(2)治疗性抗体将会是生物制药领域第二次创新高潮;(3)越来越多分子量大、结构复杂的功能蛋白将被开发成生物技术药物,尤其是用于治疗遗传性疾病的药物;(4)对已批准上市的生物技术药物的化学修饰尤其是PEG化以改善药物性能;(5)通过某些药物的定点突变获得第二代新生物技术药物,如胰岛素、EPO和t-PA的突变体;(6)组织工程、细胞治疗和基因治疗充满了机遇和挑战。     

FDA为治疗多发性硬化的Betaseron开绿灯

美国食品与药物管理局(FDA)已批准合伙人Chiron Corp.(Emeryville,CA)和Berlex Laboratories,Inc.(Richmond,CA)制造并销售Betaseron。Betaseron是rDNA β干扰素-1b的商品名,用于治疗复发-缓解多发性硬化(MS)患者。它是25年来第一个获批的治疗MS的新药,也是FDA新的危及生命疾病治疗产品加速审批程序实施后获批准的第一个生物技术药物。 该药物被注明只能用于治疗复发-缓解MS患者,美国有30万MS患者,其中30％属于此类型。这些患者何时发病不能预料,发病后有一阶段部分或完全恢复期。该病有3种类型,这是第二种。第一种属良性,是最温和的类型;第三种是慢性-进行性的,是最新类型。获批准的药物只可用于治疗非卧床的复发-缓解患者,然而,Berlex打算年内开展一项用此药治疗慢性进行性患者的临床实验。 Berlex和Chiron均拒绝透露该药的售价。不过,根据α-干扰素的平均售价可估算其价格,因为α-     

促红细胞生成素的纯化

促红细胞生成素(Erythropoitm,EPO)是一种糖蛋白激素,正常条件下在血浆中浓度很低,当贫血或缺氧时,血浆中EPO浓度显著增加,并分泌到尿液里、EPO具有促进红系祖细胞的增殖、分化和成熟的作用,正是这一特性使它在某些贫血治疗中有着重要价值。为了研究EPO性状及临床应用,获得大量纯品EPO非常重要,1977年Miyake等人首先经过7步纯化从再障性贫血患者尿中获得毫克量级尿EPO(urme EPO,uEPO)。天然EPO源于正常人及患者尿液、血浆和胎盘浸出液。八十年代后朗编码人EPO基因被克隆,重组人EPO(recombinant human EPO,rhEPO)在哺乳动物细胞中成功表达,大大丰富了EPO来源,减小了纯化难度,使获得大量EPO纯品用于临     

Amgen公司的EPO仍独占美国市场

美国食品与药物管理局(FDA)没有批准美国Genetics Institute公司要求在美国市场销售EPO(促红细胞生成素)的申请.这样,美国Amgen公司的EPO得以作为“独家药”在美国销售.申请是1989年和1990年(2次)由GI公司和美国Chugai-Upjohn公司提出的.理由是使用Amgen公司的EPO的患者数超过了约20万人,以及Amgen公司申请的适应范围和FDA认可的适应范围不一致等,还有诉说Amgen公司1983年获独家药认可是不妥当的.     

Catus公司的IL-2领先获得批准

丹麦批准了美国Cetus公司的rDNA白细胞介素-2(XL-2),用以治疗晚期肾癌,这是首次对IL-2的批准,而且是在欧洲共同体的顾问委员会即专利医药产品委员会认可此药后仅仅6周时批准的。Cetus公司指望美国方面能在1990年上半年准许此药上市。 Farmos集团公司(芬兰)已与Cetus公司签订协议,将在丹麦和其它斯堪的纳维亚国家市场上推出此药。估计一个月内产品即能上市,在上市之前暂不宣布具体价格,Cetus公     

聚乙二醇重组人促红细胞生成素在食蟹猴体内的药代动力学检测方法

目的:建立2种灵敏度高、特异性好且快速的ELISA方法,用以检测食蟹猴血浆中的聚乙二醇重组人促细胞生成素(EPO)含量。方法:建立了2套双抗夹心的ELISA方法对聚乙二醇重组人EPO进行定量,包括PEG特异性ELISA(检测完整药物)及EPO特异性ELISA(检测总EPO)。完整药物检测:包被小鼠抗重组人EPO单抗,加入稀释的血浆样品,之后加入稀释的生物素标记的兔抗PEG单抗(检测抗体)及链亲和素-HRP(酶标抗体),再加入TMB底物显色,2 mol/L硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D_(450/600nm)值。总EPO检测:包被小鼠抗重组人EPO单抗,加入稀释的血浆样品,之后加入稀释的兔抗重组人EPO多抗-HRP(酶标抗体),再加入TMB底物显色,2 mol/L硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D_(450/600nm)值。结果:建立并验证了2套ELISA方法,定量范围均为4~54 ng/mL,定量下限均为4 ng/mL,准确度和精密度(板内和板间)均在±15%之内(总EPO检测时以聚乙二醇重组人EPO为标准品),同时室温稳定性、冻融稳定性、长期稳定性及稀释线性(空白猴血浆稀释)均良好。结论:方法学确证表明,2套ELISA方法具有良好的灵敏度、准确度、特异性和可重复性,可用于定量测定食蟹猴血浆中聚乙二醇重组人EPO的浓度。     

重组EPO获准作为AZT的辅助剂治疗艾滋病

美国食品与药物管理局(FDA)批准了利用重组人红细胞生成素(EPO)治疗由AZT治疗引起的艾滋病患者的贫血. 药品制造者Amgen公司将此药称为Epoetin-α,Johnson&Johnson公司(新泽西州,新不伦瑞克)的Ortho Biotech Division将作为Amgen的批发商,用Procrit商标进行销售.此次批准的药品是用于治疗AIDS和未经透析的慢性肾衰竭(此项用途已于1989年6月得到FDA的批准)引起的贫血.Ortho的发言人Sarah Colamarino说,预     

EPO,EPOR及其信号传递研究进展

EPO(Erythropoietin,促红细胞生成素)是促进哺乳动物红系祖细胞增殖和分化的主要细胞团子。EPO与红系祖细胞表面的EPOR(EPO Receptor)结合后,通过信号传递使细胞核内特定基因转录发生改变。与其它造血生长因子不同,EPO主要作用于相对成熟的红系细胞。近年来,随着对人和动物的EPOR分子克隆以及EPOR突变体分析,使我们对EPO与EPOR的相互作用及其信号传递路径有了比较深入的了解。     

生物技术未来的十大产业

许多分析家通常认为生物技术是由分子生物学开发的一系列工具的集合,而这些工具则引起了一系列产业部门的变革。现就生物技术商业化中最具经济潜力的领域作一分析。治疗药物据《医药技术股票快讯》报道,生物技术药物1989年的销售额为6亿美元,1990年上升到10亿美元。迄今,重组d干扰素,促红细胞生成素(EPO),组织血纤维溶酶原激活剂(t-PA),胰岛素,人生长激素,乙肝疫苗,OKT单克隆抗体已经FDA批准使用。下一组     

促红细胞生成素治疗慢性心力衰竭156例临床观察

目的:观察EPO对慢性充血性心力衰竭(CHF)治疗效果。方法:选择CHF患者212例,随机分为非EPO治疗组(56例)和EPO治疗组(156例)。其中非EPO治疗组采用常规抗心衰治疗,EPO治疗组接受常规抗心衰治疗和EPO治疗,直至临床观察结束。治疗后观察心功能指标改变。结果:156例心衰患者经过EPO治疗后,左室射血分数,每搏输出量,每分输出量,心指数均较非EPO治疗对照组患者明显改善(P<0.05),其中尤以左室射血分数改善最为明显(P<0.01)。156例EPO治疗组患者中116例心衰伴贫血患者心功能各项指标的改善较40例心衰不伴贫血患者更为明显,具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:EPO对CHF患者心功能的改善主要是因为EPO的促红细胞生成作用。EPO对于慢性心功能不全有独立于促红细胞生成以外的治疗作用。     

低氧诱导因子-脯氨酸羟化酶轴在肾性贫血中的作用机制研究进展

肾性贫血是慢性肾脏病患者最常见的并发症之一,主要由促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)缺乏和功能性铁缺乏(functional iron deficiency, FID)引起。低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor, HIF)是体内参与细胞低氧应答的主要转录因子,而氧依赖性的脯氨酸羟化酶(prolyl hydroxylase, PHD)是HIF降解反应的限速酶,可羟基化HIF的脯氨酸残基,使HIF被蛋白酶体降解,这就是HIF-PHD氧传感途径,亦称HIF-PHD轴。贫血情况下组织缺氧,通过调节HIF-PHD轴可刺激EPO生成、调节铁代谢等,这已成为治疗肾性贫血的新方法。近年来,几种作为选择性HIF-PHD抑制剂的创新药物被成功开发,其中一些药物正在进行临床试验。本文就HIF-PHD轴的概念、调节机制及其在肾性贫血中的作用机制研究进展进行综述。     

促红细胞生成素对血液透析患者血浆脂联素水平及左心室肥厚的影响

目的：促红细胞生成素（EPO）在维持性血液透析患者中具有保护心血管的作用,本文旨在探讨EPO在血液透析病人中对脂联素（ADPN）水平及左心室肥厚的影响。方法：46名维持性血液透析患者用EPO治疗8周,分别在治疗前,治疗第2、4、8周后测定血红蛋白（Hb）,红细胞压积（Hct）,血浆白蛋白（ALB）,体重指数（BMI）,C反应蛋白（CRP）,血清铁蛋白（SF）,血清铁饱和度（TAST）,ELISA测定ADPN水平;彩色多普勒超声测定左心室心肌重量（LVM）及计算左心室心肌重量指数（LVMI）。结果：血液透析患者血清ADPN水平高于正常人;用EPO治疗2周后即出现ADPN水平升高,第4周后ADPN水平进一步升高,第8周与第4周比较无明显变化;应用EPO可降低CRP、SF水平;ADPN是LVMI的重要影响因子,EPO可改善左心室肥厚与功能。结论：EPO可提高血液透析患者ADPN水平,降低CRP、SF水平,减轻左心室肥厚。     

转EPO基因成肌细胞移植治疗大鼠肾性贫血的实验研究

以产病毒包装细胞上清转染原代培养的大鼠骨骼肌成肌细胞和皮肤成纤维细胞 ,经G41 8筛选得到转染成功的阳性克隆 ,分别命名为Myo/EPO和Fib/EPO .将抗性克隆扩增并测定培养上清中EPO活性 ,供大鼠移植 .肾性贫血大鼠经乙醚麻醉后 ,通过多点肌注及皮下注射分别将Myo/EPO和Fib/EPO植入大鼠体内 ,动态检测各组大鼠外周血象 ,定期测定大鼠血清EPO含量及移植部位肌组织hEPO分泌情况 .结果表明 ,对照组 (Myo/X)大鼠血红蛋白 (Hb)和红细胞压积 (HCT)进行性降低 ,而治疗组大鼠 (Myo/EPO)的Hb和HCT在移植后 1 4d ,由移植前的 ( 92 .5± 3.0 )g/L和 0 .2 9± 0 .0 4升至 ( 1 0 3.8± 5 .0 ) g/L和 0 .32± 0 .0 4,之后逐渐下降 ,但仍高于或维持移植前水平达 90d ,Fib/EPO细胞移植的作用特点与Myo/EPO组类似 ;Myo/EPO细胞移植前大鼠血清EPO的浓度已测不出 ,移植后 30 ,6 0 d测得EPO的浓度分别为 ( 4.2± 1 .3)、( 3.3± 0 .9)mU/mL ;以PCR和免疫组化方法对移植后 6 0d大鼠肌注部位的肌肉组织进行检测证实 ,移植部位肌组织存在hEPOcDNA ,并且分泌EPO蛋白 .结论 :以大鼠骨骼肌成肌细胞作为EPO基因治疗的靶细胞进行大鼠体内移植 ,可以较持久地改善大鼠肾性贫血症状 ,具有潜在的应用价值 ,为临床上EPO基因治疗提供了实验依据     

人红细胞生成素的研究和应用现状

人红细胞生成素(EPO)主要是由与近侧肾小管邻近的对氧敏感细胞生成的一种糖蛋白,在成人,极少部分由肝脏合成,胎儿时期肝脏则是合成EPO的重要器官。EPO在红细胞发育成熟过程中起着重要作用,临床上用于治疗各种贫血性疾病有特殊的治疗效果。1 EPO的理化特性及生物学活性 天然EPO分子包括多肽部分和糖链部分。多肽全长为193个氨基酸残基,分泌前27个氨基酸的前导信号肽被除去。事实证明,成熟EPO分子多肽的羧端精氨酸残基也被除去,为165个氨基酸残基。肽链中有两个二硫键,分别为7位与161位、29位与33位。4个糖基化位     

红细胞生成素3’端增强子在肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖调控中的作用

用噻唑蓝比色法 (MTT法 )、H3 胸腺嘧啶核苷 (H3 TdR)掺入法和流式细胞术 ,观察红细胞生成素 (EPO)3’端增强子片段对培养的猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)的内皮依赖性和非内皮依赖性低氧性增殖的影响。结果为 :(1)低氧 2 4h后PASMCs明显增殖 ,转入野生型EPO3’端增强子片段可被抑制 ,而转入突变型片段无此作用 ;(2 )肺动脉内皮细胞 (PAECs)低氧 2 4h ,其条件培养液有明显的促PASMCs增殖作用 ,将野生型EPO3’端增强子片段先转入PAECs,此作用明显减弱 ,而转入突变型片段则无明显影响。提示 :(1)PAECs低氧条件培养液可促进PASMCs增殖 ,PASMCs也可直接感受低氧而增殖 ,PAECs和PASMCs的低氧反应均被外源性EPO3’增强子片段抑制 ;(2 )由于EPO3’增强子上有低氧诱导因子 1(HIF 1)结合位点 ,PAEC和PASMC低氧反应可能是通过HIF 1低氧信号转导的共同通路     

欧洲国家开始认可rDNA制品

欧洲的环境保护问题专家以及反对生物技术的团体多年来一直成功地阻止了rDNA产品的生产,现在他们逐渐开始在一些主要问题上让步。在提出申请三年之后,Hoechst AG公司(Frankfurt,West Germany)想完成和开办一家生产rDNA胰岛素的小型实验工厂的请求得到了设在西德Hesse州的环境部的批准。Hoechst公司是在去午获准恢复建设试验工     

细胞生成素3'端增强子在肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖调控中的作用

用噻唑蓝比色法(MTT法)、H3-胸腺嘧啶核苷(H3-TdR)掺入法和流式细胞术, 观察红细胞生成素(EPO)3'端增强子片段对培养的猪肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的内皮依赖性和非内皮依赖性低氧性增殖的影响.结果为: (1)低氧24 h后PASMCs明显增殖, 转入野生型EPO3'端增强子片段可被抑制, 而转入突变型片段无此作用;(2)肺动脉内皮细胞(PAECs)低氧24 h, 其条件培养液有明显的促PASMCs增殖作用, 将野生型EPO3'端增强子片段先转入PAECs, 此作用明显减弱, 而转入突变型片段则无明显影响.提示: (1)PAECs低氧条件培养液可促进PASMCs增殖, PASMCs也可直接感受低氧而增殖, PAECs和PASMCs的低氧反应均被外源性EPO3'增强子片段抑制;(2)由于EPO3'增强子上有低氧诱导因子-1(HIF-1)结合位点, PAEC和PASMC低氧反应可能是通过HIF-1低氧信号转导的共同通路.